临床微生物检验考试重点精华版Word格式.docx

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正常菌群：

定居在人类皮肤和黏膜上的各类微生物，在正常情况下无害，而且具有拮抗外来病原微生物和提供某些营养物的作用。

条件致病微生物：

原属正常菌群中的细菌，由于机体抵抗力下降、寄居部位改变或寄居微生物丛平衡失调，能引起内源性感染。

病原微生物：

指少数能引起人类和动、植物致病的微生物。

3.微生物学：

是生物学的一个分支，它是研究微生物的类型、分布、形态结构、生命活动及规律、遗传、进化以及与人类、动物、植物等相互关系的一门学科。

随着其研究的深入，形成了很多分支学科。

4.医学微生物学：

是研究与医学和疾病有关的病原微生物的生物学特性、致病性、免疫性以及特异性诊断和预防治疗措施的学科。

5.临床微生物学的性质和任务：

1.研究感染性疾病的病原体特征2.提供快速而准确的病原学诊断3.指导临床合理使用抗菌药物4.对医院感染进行监控

6.临床微生物检验的思路与原则：

1.确保分析前质量2.全面了解机体的正常菌群3.保证检验过程中的质量4.采用三定一结合（定性、定量和定位，结合病情）5.重视和加强与临床的联系

第一章

1.生物安全：

采用微生物学技术、安全设施、保护设备,防止实验室工作人员、环境及公众暴露于实验室中处理储存的已知或潜在的感染性微生物。

2.实验室生物安全：

描述防止实验室发生病原体或毒素意外暴露及释放的原则、技术及实践。

3.获得性感染主要是由于处理感染性物质时的操作不当造成的。

4.危险度评估是生物安全的核心。

5.生物安全基本设备：

生物安全柜和个人防护设备

6.实验室生物安全保障：

指单位和个人为防止病原体或毒素丢失被窃、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。

7.生物恐怖：

是指使用致病性微生物或毒素等作为袭击手段,通过一定的途径散布危险因子，造成疾病的暴发、流行，导致人群失能和死亡。

8.消毒（）：

通过物理或化学方法去除或杀灭大多数微生物的过程。

灭菌（）：

通过物理或化学方法杀灭或去除所有微生物的过程。

消毒灭菌技术包括：

热力（湿热灭菌和干热灭菌）、化学（液体或气体）、辐射（γ辐射和紫外线）、过滤技术。

9.医院感染的定义：

医院感染又称医疗机构相关感染。

指病人入院时不存在也不处于潜伏期而在住院期间发生的感染，同时也包括在医院内感染而在出院后发病的感染。

医院感染的分类：

外源性感染：

交叉感染和医源性感染；

内源性感染：

又称自身感染

10.常见医院感染：

泌尿道感染最常见：

与留置导管有关、呼吸道感染、外科伤口感染、血流感染→占医院感染的小部分，但是最重要的院内感染，近年来日益增加、其它：

烧伤、皮肤和软组织感染，眼和结膜感染、子宫内膜炎、产后生殖道感染，胃肠炎、肝炎等。

第二章

1.标本采集的一般原则：

1无菌采集（标本部位和盛放容器）2早期采集3根据目的菌的特性用不同方法采集4采集适量标本5安全采集

2.临床常见采血指征：

1发热（≥38︒C）或低温（≤36︒C）2寒战3白细胞增多（计数大于12，000⨯109，特别有“核左移”未成熟的或杆状核的白细胞）4粒细胞减少（成熟的多核白细胞<

1000⨯109）5血小板减少6皮肤粘膜出血7昏迷，休克8多器官衰竭9升高

3.培养瓶种类及接种程序：

成人：

需氧瓶和厌氧瓶儿童：

需氧瓶抗生素吸附剂：

活性炭和树脂

4.血培养瓶的接种顺序：

◆蝶形针采血：

先需氧瓶后厌氧瓶，以免装置中的氧气进入厌氧瓶。

◆注射器：

先厌氧瓶后需氧瓶。

◆采血量少于推荐量时，先接种需氧瓶，剩余血液接种厌氧瓶。

①多数菌血症由需氧菌和兼性厌氧菌引起。

②严格需氧菌和致病酵母样真菌都是从需氧瓶培养出来。

5.血培养的三级报告流程

6.菌血症：

在血液中有细菌存在，包括一过性和持续性在血中存在，不繁殖或很少繁殖，不引起或仅引起轻微的炎症反应者。

7.脓毒症：

化脓性细菌在血液中大量繁殖且产生毒性代谢产物的同时，由于细菌扩散，在全身多个器官和组织引起新的化脓性病灶。

8.合格痰标本标准：

白细胞＞25个/低倍视野，鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野。

9.有临床意义的尿标本：

杆菌≥105，球菌≥104

第三章

1.细菌形态学检查方法：

不染色检查：

只能观察动力和运动状况.

1.压滴法（湿片法）→不可有气泡和外溢

2.悬滴法→可较长时间观察

3.毛细管法→主要用于观察厌氧菌的动力

染色检查：

菌体形态、大小、排列、染色特性及特殊结构，可将细菌进行分类。

2.主要染色方法：

革兰染色、抗酸染色、荧光染色、特殊染色（鞭毛染色和荚膜染色）

3.革兰染色的三个原理，操作步骤与临床意义

原理：

细胞壁的结构学说：

革兰阳性菌细胞壁结构较紧密，肽聚糖层厚，含脂质少，脱色时乙醇不易渗入，反而使细胞壁脱水，通透性下降，

胞内结晶紫与碘的复合物不易渗出。

革兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层薄，含脂质多，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增加，胞内结晶

紫与碘的复合物易被乙醇溶解溢出而被脱色。

化学学说：

革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐可与结晶紫、碘牢固结合，而不易被乙醇脱色。

革兰阴性菌内所含核糖核酸镁盐少，故易被脱色。

等电点学说：

革兰阳性菌的等电点（2~3）比格兰阴性菌（4~5）低，在相同的条件下，革兰阳性菌比革兰阴性菌所带的负电荷

多，与带正电荷的碱性染料结合较牢固，而不易脱色。

操作步骤：

①细菌涂片、干燥，经火焰固定（菌膜>

11）②结晶紫染色1，水洗甩干③加碘液媒染1，水洗甩干

④加95%乙醇脱色30s，水洗甩干⑤用稀释复红或沙黄复染30s，水洗吸干后镜检

临床意义：

①鉴别细菌②选择治疗用药③与细菌致病性有关

4.培养基：

由人工方法配置而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。

5.培养基的种类

按物理状态分：

液体、半固体、固体培养基（高层、斜面、高层斜面、平板）

按用途分：

基础、营养、鉴别、选择和特殊培养基

5.细菌的培养方法

需氧培养法（37℃，18～24h）二氧化碳培养法：

二氧化碳培养箱和烛缸法厌氧培养法

6.生化反应

（一）碳水化合物的代谢试验

1.糖（醇、苷）类发酵试验

（1）原理：

不同细菌分解糖（醇、苷）的酶各异，代谢能力产物各不同，有的不分解，有的仅产酸，有的既产酸又产气，利用此特点鉴别细菌。

（2）培养基：

0.5～1.0%糖类等，内有指示剂。

（3）方法：

细菌接种糖发酵管，37℃、24h孵育后观察结果

结果判断：

有的细菌能分解某些糖产酸产气（），有的只能产酸而不产气（），有的则不能分解糖类（）

★2.葡萄糖代谢类型鉴别试验（试验）

★原理：

细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧分子参加，在无氧环境下不能分解葡萄糖，称为氧化型;

在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解，称为发酵型，此型细菌在有氧和无氧环境下都能分解葡萄糖；

不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。

★培养基：

培养基（氧化-发酵培养基）

阴性杆菌指示剂为溴麝香草酚兰；

阳性球菌指示剂为溴甲酚紫。

★方法：

2支试管，一支加灭菌的液体石蜡覆盖，使培养基与空气隔绝；

另一支不加灭菌的液体石蜡，培养基暴露于空气中。

35℃培养18~24h后，观察结果

★结果及应用：

氧化型细菌（O）——仅在有氧环境中分解葡萄糖，在无氧环境中不分解，加液体石蜡不变色，不加液体石蜡变色；

发酵型细菌（F）——在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，两管均变色

不利用型细菌（N）——有氧或无氧的环境中都不能分解葡萄糖，两管均不变色

产碱型细菌（K）——开放管变蓝，封闭管不变色

3.β-半乳糖苷酶试验（）

具有β-半乳糖苷酶的细菌，可分解邻-硝基酚-β半乳糖苷（），生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下亦可检出。

（2）试剂：

0.75M溶液

取纯化菌落于0.25无菌生理盐水中，制成浓的菌悬液，加入一滴甲苯使酶释放，37℃5，再加入等量的溶液，水浴203h观察结果。

（4）应用：

迅速或迟缓分解乳糖的细菌试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。

主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定

a细菌分解乳糖需要两种酶，一种是半乳糖苷渗透酶，可是乳糖通过细菌的细胞壁进入菌体内另一种是β-半乳糖苷酶，可将乳糖分解成半乳糖和葡萄糖，进而再分解。

缓慢分解乳糖的细菌缺乏渗透酶，不能将乳糖快速运到细胞内所以需几天乳糖才能被分解。

b乳糖：

葡萄糖和半乳糖通过β-半乳糖苷键连接

：

邻硝基酚取代了葡萄糖，其分子小很多可直接进入菌体内。

4.七叶苷水解试验

有的细菌可将七叶苷水解成七叶素和葡萄糖，前者与二价铁离子反应，生成黑色化合物

七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基

（3）方法及应用：

肠球菌阳性，其他链球菌阴性

★5.甲基红试验（）

◆原理：

细菌在代谢糖的过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸的代谢有两种途径，一种是丙酮酸进一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合酸，使降低到4.5以下，加入甲基红试剂显红色（阳性）。

如果酸进一步转化为其它物质（醇、酮、醛、气体和水），或丙酮酸按另一途径代谢，则仍保持在6.2以上，加入甲基红试剂呈黄色（阴性）。

◆培养基：

葡萄糖蛋白胨水

◆方法：

将待测纯菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育后加入甲基红试剂，立即观察结果。

◆结果应用：

大肠埃希菌阳性，产气肠杆菌阴性。

★6.试验

◆原理：

细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化生成二乙酰，二乙酰再与培养基中精氨酸、肌酐等所含的胍基结合，形成红色化合物（胍缩二乙酰）。

◆培养基：

同甲基红试验

◆方法：

将待测纯菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育后加入试剂，35℃放置15～30分钟观察结果。

◆结果与应用:

同甲基红试验一起使用。

甲基红阳性者试验常阴性

（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验

1.明胶液化试验

细菌分泌的明胶酶（胞外蛋白水解酶）能分解明胶使明胶失去凝固能力而液化

（2）方法：

将待检菌接种于明胶培养基中，35℃孵育24h到7日，每24h取出放入4℃冰箱约30以上，观察有无液化。

（明胶的凝固点20℃，高于24℃呈液化状态）

（3）应用：

a肠杆菌科细菌鉴别b厌氧菌鉴定c非发酵菌鉴定常用

★2.吲哚试验（靛基质试验）

★原理：

具有色氨酸酶的细菌，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚（靛基质），吲哚与加入试剂对位二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚呈红色。

★培养基：

蛋白胨水培养基

★方法与结果：

：

将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，35℃培养18~24h，再在培养基中加入靛基质指示剂（对二甲基氨基苯甲醛），试剂与培养基两液面接触处呈红色为阳性，无色为阴性。

★应用：

主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

3.硫化氢试验

①原理：

有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生H2S，H2S与培养基中2+（或2+）反应生成黑色的硫化亚铁或硫化铅