鸡传染性支气管炎研究进展Word格式文档下载.docx

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IB是由传染性支气管炎病毒（IBV引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要危害鸡呼吸和泌尿生殖道,感染鸡可由于呼吸道或肾脏病变而引起死亡。

耐过鸡生产性能和饲料报酬降低,极易继发细菌感染,因此对本病的研究具有重要意义。

本病最早由Schalk于1930年在美国北科他州发现,随后在世界各地相继发现,自1982年以来,肾型传染性支气管炎在我国广泛流行,目前仍然是威胁集约化养鸡场的主要疫病之一,即使在免疫鸡群中

也时有发生。

1病原学

IBV属于冠状病毒科冠状病毒属,具有囊膜,直径90~200nm,呈不规则形或圆形,表面有长

20nm排列整齐的杆状纤突,似花冠状。

基因组为单股正链RNA,全长约27kb。

其病原血清型众多,同毒株之间又有组织亲嗜性的差异,表现为呼吸型、肾型、肠型、腺胃型等。

化学成分分析发现,IBV的主要结构蛋白有3种,纤突蛋白（S蛋白、膜基质蛋白（M蛋白和核衣壳蛋白（N蛋白,3种结构蛋白分子摩尔比为1∶6∶15。

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簇,N蛋白是病毒内部核衣壳的组成蛋白,S蛋白构成了冠状病毒的最表层纤状突起。

IBV经56℃15min及45℃90min灭活,对乙醚和氯仿极敏感,能被20%的乙醚及5%的氯仿灭活,0.1%去氧胆酸钠4℃作用18h能使IBV完全失去感染性。

1%煤酚、1/10000高锰酸钾、70%酒精和1%福尔马林均可在室温下几分钟内杀死病毒。

不同毒株在pH3时稳定性不同。

2流行病学

本病在世界许多国家均有发生,易感动物主要是鸡,不同品种和品系的鸡对本病的敏感性不同,但是所有年龄的鸡都容易感染,尤其3~26周龄的鸡最易感染。

一年四季均可发生,分布广,传播速度快,发病率和死亡率高,雏鸡死亡率约为15%~30%。

传播途径主要为呼吸道和消化道传染,传染源为病鸡和带毒鸡,从病鸡和带毒鸡呼吸道、粪便排出的病毒经空气、飞沫传染给易感鸡,也可以通过饲养人员、遭受污染的饲料、饮水及用具等经消化道感染本病,通常在48h内出现症状。

3临床症状及病理变化

发病后很快出现幼鸡流鼻涕,发出气管啰音,频繁咳嗽,打喷嚏,精神沉郁,怕冷挤堆,饮水增加,呼吸道症状持续1~4d后消失,鸡群不见异常表现。

随后鸡群突然发病,2~3d内逐渐加剧,病鸡挤堆厌食,排白色稀粪,体重明显减轻,鸡冠和皮肤变暗,肛门周围粘满白色水样粪便,感染幼鸡出现死亡,产蛋鸡群产蛋量下降,部分耐过鸡可逐渐康复。

前期剖检病死鸡可以看到气管和喉头内有多量粘液,气管粘膜充血,肺脏充血,气囊浑浊。

后期病变主要在肾脏,病鸡肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管扩张,里面充满大量白色尿酸盐,整个肾脏外表有许多花纹,呈槟榔样。

切开肾脏有多量白色尿酸盐流出。

严重病例在腹膜、心包膜和胸膜上也有白色尿酸盐沉积,母鸡卵巢发生退行性变化,腹腔内有游离的卵黄样物质,卵巢充血或出血,有的呈紫色。

4诊断

4.1血清学诊断技术自发现IB至90年代初,主要采用血清中和试验（鸡胚气管环培养观测纤毛运动情况、琼脂扩散试验、血凝和血凝抑制试验等常规血清学技术对IB进行诊断。

血清中和试验可用于检测IBV抗体、抗原及分型,虽然方法简便易行,但花费时间长。

琼脂扩散试验用于检测IBV抗体操作简便,但敏感度不高,不适用于免疫后抗体的检测。

血凝和血凝抑制试验可用于检测IBV抗原及抗体,但用不同毒株制成的HI抗原检测抗体时,抗体水平参差不齐。

反向间接血凝试验可用于检测IBV抗原,但可靠性不及中和试验。

王乐元（1993首次成功的建立了检测IBV抗原的间接Dot-ELISA,对IBV抗原的最低检出量为1.36μg/ml,可以作为疫病早期诊断的依据和进行流行病学调查[1]。

王红宁（1996在国内首先采用对流免疫电泳技术对128份人工感染鸡样品进行检测,该方法简便,具有较高的敏感性和准确性,生产场可用此方法进行IB的免疫检测。

刘兴友等（1997建立了胰酶分散抗原间接荧光抗体法,该方法具有良好的特异性,检测程序简单,检测抗原时间短,适合于制备大批量抗原用于临床检测或抗体监测。

王宏俊等（2003将IBVN基因在大肠杆菌中表达,表达产物N蛋白作为ELISA诊断抗原,可用于IBV抗体检测[2]。

4.2分子生物学诊断技术

4.2.1反转录多聚酶链式反应（RT-PCRRT-PCR技术用于IB诊断使诊断技术提高到基因水平,具有简便、快速和敏感性、特异性强的特点。

Jackwook（1992提取了分属于5个血清型的8株IBV的RNA,将其反转录成DNA后,用PCR扩增,然后用一生物素标记的探针进行斑点杂交,结果这8株病毒均被检出。

王林川等（1992率先在我国采用RT-PCR技术检测了广东分离的IBV。

黄勇等（2000对四川分离的多株IBVS1基因和N基因用RT-PCR进行了扩增,结果证明RT-PCR检测方法具有敏感、特异、快速等特点,适用于不同来源及不同血清型IBV的检测。

胡建和等（2003应用设计合成的RT-PCR技术检测鸡传染性支气管炎,特异性强,成本低,检出率高,可有效用于鸡传染性支气管炎的早期检测和流行病学研究[3]。

程晓霞等（2009以IBV疫苗株为模板,建立了检测IBV的RT-PCR方法,对IBV的检测敏感性高、特异性强,可用于IBV感染的诊断和流行病学调查[4]。

刘金朋等（2011根据鸡传染性支气管炎

病毒（IBVN基因序列（FJ767920,利用引物软件Premier5.0,设计并合成了1对特异引物,通过RT-PCR扩增条件的优化,建立了一种快速检测IBV的RT-PCR方法,应用该方法成功地从IBVM41和河南株HN99中扩增出318bp的目的片段,而传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增出相应的片段;

将回收的RT-PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体后测序,进一步证实RT-PCR检测方法的特异性,对IBV的最低检出量为0.6pg的cDNA;

经初步应用表明,该方法的建立为IBV的早期诊断和临床检测奠定基础[5]。

张琳等（2011根据禽呼肠孤病毒（ARV、禽流感病毒（AIV、新城疫病毒（NDV和鸡传染性支气管炎病毒（IBV的基因保守区设计了4对特异性引物,建立了针对四种病毒的多重PCR检测体系,并对该体系进行了条件优化及特异性、敏感性试验,该体系扩增的四种病毒基因片断大小分别为199bp（ARV、264bp（AIV、362bp（NDV和459bp（IBV,且特异性、敏感性良好,能够检出1pgAIV和10pgARV、NDV、IBV的RNA,临床应用结果证明,该体系具有很高的实用价值和应用前景[6]。

4.2.2核酸探针技术核酸探针技术具有很高的敏感性。

Kwon（1993将此法同电镜（EM观察病毒方法进行了比较,发现此法敏感度比EM高。

刘苹等（1997用地高辛标记IBV标准强毒株M41的S1基因,将标记的S1基因探针与12株已知IBV的RNA提取物进行斑点杂交,结果该探针与12株已知IBV毒株均成阳性反应,而与NDV、IBDV、ILTV、正常胚液、蒸馏水对照均成阴性。

该探针的检测灵敏度为9.77fg,杂交灵敏度为24.41pg,具有很高的灵敏性。

莫胜兰等（2007用该方法检测了38份疑似IBV临床病料,31份阳性,而用RT-PCR法扩增IBVS2基因确诊为阳性的只有29份;

对人工接种IBVH

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弱毒苗鸡咽喉和肛门拭子32份进行检测,检出15份阳性,表明利用DIG探针检测IBV的RT-PCR产物,特异性和敏感性强,可重复,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性。

4.2.3限制性酶切片断长度多态性分析（RFLP这是一种通过病毒基因限制性酶切图谱进行分型的方法,该法新颖,重复性好,可用于IBV从分子水平上进行了分型。

Kown等（1993对IBVS1基因的RT-PCR扩增产物,经限制性内切酶消化后电泳,根据电泳图谱对25株IBV进行了分类,结果得到了与中和试验相一致的结论。

黄勇等（1996、王林川等（1997、磨美兰等（2001、Jackwood（1997等人均用限制性酶切片段长度多态性分析对IBV进行了分型研究。

4.2.4寡核苷酸指纹图谱分析主要用于IBV的流行病学调查,可区分新的变异株是由当地株变异而来,还是从外地传入的。

尽管该法重复性好、灵敏,可以区分同一血清型不同突变株之间的差异。

但该法只有用于基因序列同源率在95%以上时才有价值。

Butcher等（1990利用此法对DPI毒株10代、100代鸡胚传代物、T株、M41株进行了分析,结果发现这4株图谱都有差别。

该法一般应与其它方法相结合来进行IBV的诊断。

5防治技术

传染性支气管炎病毒血清型众多,新的变异株不断出现,不同血清型之间没有