鸡传染性支气管炎研究进展Word格式文档下载.docx

1、IB 是由传染性支气管炎病毒（IBV 引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要危害鸡呼吸和泌尿生殖道,感染鸡可由于呼吸道或肾脏病变而引起死亡。耐过鸡生产性能和饲料报酬降低,极易继发细菌感染,因此对本病的研究具有重要意义。本病最早由Schalk 于1930年在美国北科他州发现,随后在世界各地相继发现,自1982年以来,肾型传染性支气管炎在我国广泛流行,目前仍然是威胁集约化养鸡场的主要疫病之一,即使在免疫鸡群中也时有发生。1病原学IBV 属于冠状病毒科冠状病毒属,具有囊膜,直径90200nm ,呈不规则形或圆形,表面有长20nm 排列整齐的杆状纤突,似花冠状。基因组为单股正链RNA ,全长约27k

2、b 。其病原血清型众多,同毒株之间又有组织亲嗜性的差异,表现为呼吸型、肾型、肠型、腺胃型等。化学成分分析发现,IBV 的主要结构蛋白有3种,纤突蛋白（S 蛋白、膜基质蛋白（M 蛋白和核衣壳蛋白（N 蛋白,3种结构蛋白分子摩尔比为1615。M 蛋白形成抗原决定蛋性能的影响J.江西畜牧兽医杂志,2002,4:25.18McIntosh J I,Slinger S J,Sibbald I R,et al.Theeffects of three physical forms of wheat on the weight gains and feed efficiencies of pullets fr

3、om batching to fifteen weeks of age J.Poultry Science,1962,41:438-444.19Umar Faruk M,Bouvarel I,Meme N.Sequential feeding using whole wheat and a separate protein -mineral concentrate improved feed efficiency in laying hensJ.Poultry Science,2010,89:785-796.20Amerah A M,Ravindran V,Lentle R G,et al.I

4、nfluenceof particle size on the performance,digest characteristics and energy utilisation of broilers fed maize and wheat based diets J.Proceedings of the Australian Poultry Science Symposium,2007（19:89-92.21宋凯,单安山.不同小麦日粮对肉仔鸡肉质、脂肪酸合成酶mRNA 与脂蛋白脂肪酶mRNA 表达的影响J.动物营养学报,2008,20（1:69-74.22吕明斌,燕磊,李国平等.日粮中添加

5、整粒小麦对肉鸡生产性能、胴体指标和消化器官的影响J.中国家禽,2009,31（6:16-19.23陈朝江,侯水生,高玉鹏.日粮纤维对鹅消化生理功能的影响J.饲料博览,2005,3:33-34.24李杰,李凌.家禽饲料代谢能的研究V 日粮和小麦麸对鸡和水禽代谢能的比较J.东北农学院学报,1984,3:91-95.25王瑞晓,郑诚.对几种饲料原料在鹅消化道排空时间的测定J.中国家禽,2001,2:12.26周秀丽.日粮中苜蓿、黑麦草和小麦麸含量对仔鹅生产性能和消化生理影响的研究D.硕士毕业论文,扬州:扬州大学,2004.27盛东峰.鹅代谢能生物学评定方法的研究D.硕士毕业论文,扬州:扬州大学,20

6、05.簇,N蛋白是病毒内部核衣壳的组成蛋白,S蛋白构成了冠状病毒的最表层纤状突起。IBV经5615min及4590min灭活,对乙醚和氯仿极敏感,能被20%的乙醚及5%的氯仿灭活,0.1%去氧胆酸钠4作用18h能使IBV完全失去感染性。1%煤酚、1/10000高锰酸钾、70%酒精和1%福尔马林均可在室温下几分钟内杀死病毒。不同毒株在pH3时稳定性不同。2流行病学本病在世界许多国家均有发生,易感动物主要是鸡,不同品种和品系的鸡对本病的敏感性不同,但是所有年龄的鸡都容易感染,尤其326周龄的鸡最易感染。一年四季均可发生,分布广,传播速度快,发病率和死亡率高,雏鸡死亡率约为15%30%。传播途径主要

7、为呼吸道和消化道传染,传染源为病鸡和带毒鸡,从病鸡和带毒鸡呼吸道、粪便排出的病毒经空气、飞沫传染给易感鸡,也可以通过饲养人员、遭受污染的饲料、饮水及用具等经消化道感染本病,通常在48h内出现症状。3临床症状及病理变化发病后很快出现幼鸡流鼻涕,发出气管啰音,频繁咳嗽,打喷嚏,精神沉郁,怕冷挤堆,饮水增加,呼吸道症状持续14d后消失,鸡群不见异常表现。随后鸡群突然发病,23d内逐渐加剧,病鸡挤堆厌食,排白色稀粪,体重明显减轻,鸡冠和皮肤变暗,肛门周围粘满白色水样粪便,感染幼鸡出现死亡,产蛋鸡群产蛋量下降,部分耐过鸡可逐渐康复。前期剖检病死鸡可以看到气管和喉头内有多量粘液,气管粘膜充血,肺脏充血,气

8、囊浑浊。后期病变主要在肾脏,病鸡肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管扩张,里面充满大量白色尿酸盐,整个肾脏外表有许多花纹,呈槟榔样。切开肾脏有多量白色尿酸盐流出。严重病例在腹膜、心包膜和胸膜上也有白色尿酸盐沉积,母鸡卵巢发生退行性变化,腹腔内有游离的卵黄样物质,卵巢充血或出血,有的呈紫色。4诊断4.1血清学诊断技术自发现IB至90年代初,主要采用血清中和试验（鸡胚气管环培养观测纤毛运动情况、琼脂扩散试验、血凝和血凝抑制试验等常规血清学技术对IB进行诊断。血清中和试验可用于检测IBV抗体、抗原及分型,虽然方法简便易行,但花费时间长。琼脂扩散试验用于检测IBV抗体操作简便,但敏感度不高,不适用于免疫后抗

9、体的检测。血凝和血凝抑制试验可用于检测IBV抗原及抗体,但用不同毒株制成的HI抗原检测抗体时,抗体水平参差不齐。反向间接血凝试验可用于检测IBV抗原,但可靠性不及中和试验。王乐元（1993首次成功的建立了检测IBV抗原的间接Dot-ELISA,对IBV抗原的最低检出量为1.36g/ml,可以作为疫病早期诊断的依据和进行流行病学调查1。王红宁（1996在国内首先采用对流免疫电泳技术对128份人工感染鸡样品进行检测,该方法简便,具有较高的敏感性和准确性,生产场可用此方法进行IB的免疫检测。刘兴友等（1997建立了胰酶分散抗原间接荧光抗体法,该方法具有良好的特异性,检测程序简单,检测抗原时间短,适合

10、于制备大批量抗原用于临床检测或抗体监测。王宏俊等（2003将IBV N基因在大肠杆菌中表达,表达产物N蛋白作为ELISA诊断抗原,可用于IBV抗体检测2。4.2分子生物学诊断技术4.2.1反转录多聚酶链式反应（RT-PCRRT-PCR技术用于IB诊断使诊断技术提高到基因水平,具有简便、快速和敏感性、特异性强的特点。Jackwook（1992提取了分属于5个血清型的8株IBV的RNA,将其反转录成DNA后,用PCR扩增,然后用一生物素标记的探针进行斑点杂交,结果这8株病毒均被检出。王林川等（1992率先在我国采用RT-PCR技术检测了广东分离的IBV。黄勇等（2000对四川分离的多株IBV S1

11、基因和N 基因用RT-PCR进行了扩增,结果证明RT-PCR 检测方法具有敏感、特异、快速等特点,适用于不同来源及不同血清型IBV的检测。胡建和等（2003应用设计合成的RT-PCR技术检测鸡传染性支气管炎,特异性强,成本低,检出率高,可有效用于鸡传染性支气管炎的早期检测和流行病学研究3。程晓霞等（2009以IBV疫苗株为模板,建立了检测IBV的RT-PCR方法,对IBV的检测敏感性高、特异性强,可用于IBV感染的诊断和流行病学调查4。刘金朋等（2011根据鸡传染性支气管炎病毒（IBVN基因序列（FJ767920,利用引物软件Premier5.0,设计并合成了1对特异引物,通过RT-PCR扩增

12、条件的优化,建立了一种快速检测IBV 的RT-PCR方法,应用该方法成功地从IBV M41和河南株HN99中扩增出318bp的目的片段,而传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增出相应的片段;将回收的RT-PCR 产物克隆到pGEM-T Easy载体后测序,进一步证实RT-PCR检测方法的特异性,对IBV的最低检出量为0.6pg的cDNA;经初步应用表明,该方法的建立为IBV的早期诊断和临床检测奠定基础5。张琳等（2011根据禽呼肠孤病毒（ARV、禽流感病毒（AIV、新城疫病毒（NDV和鸡传染性支气管炎病毒（IBV的基因保守区设计了4对特异性引物,建立了针对四种病毒的多重PCR

13、检测体系,并对该体系进行了条件优化及特异性、敏感性试验,该体系扩增的四种病毒基因片断大小分别为199bp （ARV、264bp（AIV、362bp（NDV和459bp（IBV,且特异性、敏感性良好,能够检出1pg AIV和10pg ARV、NDV、IBV的RNA,临床应用结果证明,该体系具有很高的实用价值和应用前景6。4.2.2核酸探针技术核酸探针技术具有很高的敏感性。Kwon（1993将此法同电镜（EM观察病毒方法进行了比较,发现此法敏感度比EM高。刘苹等（1997用地高辛标记IBV标准强毒株M41的S1基因,将标记的S1基因探针与12株已知IBV 的RNA提取物进行斑点杂交,结果该探针与1

14、2株已知IBV毒株均成阳性反应,而与NDV、IBDV、ILTV、正常胚液、蒸馏水对照均成阴性。该探针的检测灵敏度为9.77fg,杂交灵敏度为24.41pg,具有很高的灵敏性。莫胜兰等（2007用该方法检测了38份疑似IBV临床病料,31份阳性,而用RT-PCR法扩增IBVS2基因确诊为阳性的只有29份;对人工接种IBV H52弱毒苗鸡咽喉和肛门拭子32份进行检测,检出15份阳性,表明利用DIG探针检测IBV的RT-PCR产物,特异性和敏感性强,可重复,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性。4.2.3限制性酶切片断长度多态性分析（RFLP这是一种通过病毒基因限制性酶

15、切图谱进行分型的方法,该法新颖,重复性好,可用于IBV从分子水平上进行了分型。Kown等（1993对IBV S1基因的RT-PCR扩增产物,经限制性内切酶消化后电泳,根据电泳图谱对25株IBV进行了分类,结果得到了与中和试验相一致的结论。黄勇等（1996、王林川等（1997、磨美兰等（2001、Jackwood（1997等人均用限制性酶切片段长度多态性分析对IBV进行了分型研究。4.2.4寡核苷酸指纹图谱分析主要用于IBV的流行病学调查,可区分新的变异株是由当地株变异而来,还是从外地传入的。尽管该法重复性好、灵敏,可以区分同一血清型不同突变株之间的差异。但该法只有用于基因序列同源率在95%以上时才有价值。Butcher等（1990利用此法对DPI毒株10代、100代鸡胚传代物、T株、M41株进行了分析,结果发现这4株图谱都有差别。该法一般应与其它方法相结合来进行IBV的诊断。5防治技术传染性支气管炎病毒血清型众多,新的变异株不断出现,不同血清型之间没有