免疫学实验指导Word文档下载推荐.docx

免疫学实验指导Word文档下载推荐.docx

《免疫学实验指导Word文档下载推荐.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫学实验指导Word文档下载推荐.docx（27页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

［实验原理］

实验动物的基本操作是免疫学实验的基础，抗原对动物机体的免疫效果，通

过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。

［目的要求］

1实验材料的准备（棉球、注射器的准备与消毒）（演示）

2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。

［自学］

3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。

4、练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。

5、练习小白鼠的取血方法。

6、学习血涂片的制作及染色；

观察动物血液中有形成分的形态结构特点。

［实验动物］小白鼠，2只/组，共需18~20只。

［试剂］

⑴3%来苏儿或3%石炭酸100~150ml/组;

⑵无菌生理盐水100~150ml/组；

磷酸盐缓冲液20~50ml/组（带滴管、染

色用）。

⑶3~5%苦味酸20~50ml/组（带滴管，编号用）；

⑷5%品红20ml~50ml/组（带滴管，编号用）；

⑸瑞特氏（wright‘s）染色液50ml/组（带滴管，染色用）；

*抗凝剂一支

［器材］

⑴1ml注射器及针头2支/组；

⑵碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；

⑶手术剪刀2把/组；

镊子2把/组；

载玻片、盖玻片各6片/组；

⑷毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组

⑸显微镜6台/组

［6］鼠笼1个/组

［操作步骤］

1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮内注射、腹腔注射的方法。

（见

《免疫学实验》P9-13。

2、练习小白鼠尾静脉取血法。

（P15）

实验报告要求：

1、时间、地点、操作人、同组人、指导老师。

2、实验原理、目的要求

3、实验操作记录（实验步骤、结果）

4、分析总结：

依据实验原理、目的要求，分析总结实验是否成功，是否达

到实验目的？

为什么？

5、对实验动物编号有何实际意义，你对书中关于小白鼠的编号方法有何想法？

有无更简便、实用的方法？

6、若给动物注射传染性材料应注意些什么？

实验二、免疫器官与免疫细胞观察

免疫器官、免疫细胞是动物免疫系统的主体。

在胸腺、脾脏中有大量淋巴细

胞存在，在外周血液中有大量淋巴细胞和白细胞等免疫细胞存在，发挥着免疫监

视作用。

1、练习血涂片的制作

附图21血片制备方法

2、学习小鼠颈椎脱臼致死的方法，观察小白鼠的解剖结构；

3、学习脾脏、胸腺的触片制备与染色方法；

观察小鼠脾脏触片、血液涂片

中的免疫细胞，并画图

［方法与步骤］

1、练习血涂片的制作（3张/组）

1）准备一张洁净玻片，取血1滴于玻片右侧，另取一光边玻片的一端，放在血滴前方，并逐渐后移接触血滴，血液立即沿推片散开，然后将推片与载片保持30一45度角，平稳地向前推动，至玻片另一端,载玻片上便留下一层血膜。

良好的血膜象舌头，头、体、尾鲜明，厚薄适宜、分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。

2）染色：

A、瑞特氏（WrightFs）染色法：

1.血涂片制成后可在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩。

选择良

好的血片，用特种玻璃铅笔画出两边界限（注意保留尾部，因体积大的细胞往往在此出现），以防染液外溢。

2在血膜上滴加几滴瑞氏染色液，左右晃动，使染液完全覆盖血膜，注意染液不宜过多而溢出界限，亦不能过少而干燥。

31—2min后，滴加等量磷酸盐缓冲液或生理盐水，2—3min后，可见表面有金属光泽，即可用清水轻轻冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸轻轻吸干。

在正常的情况下，血膜外观染成粉红色。

3）镜检：

先在低倍镜下检查血片，染色是否合格，血细胞分布是否均匀等

然后换高倍镜或油镜观察，并绘图，指出淋巴细胞与白细胞、红细胞。

如自己图

片不成功，则对教学片进行观察和绘图。

结果：

血液涂片瑞特氏染色法染色的结果：

中性粒细胞：

是白细胞中数量最多的细胞，胞体大于红细胞，细胞核蓝紫色，

呈分叶形，可分2—5叶。

叶间有细丝相连；

细胞浆为粉红色，其中充满褐灰色的小颗粒。

嗜酸性粒细胞：

数量少，占白细胞总数的0.5—3%。

胞体较中性粒细胞大，胞核蓝色，颗粒粉红色。

嗜碱性粒细胞：

细胞核蓝紫色，颗粒蓝色。

红细胞数量最大，边缘厚（浓染），中央薄（淡）。

淋巴细胞细胞质天蓝色，细胞核几乎占据整个细胞。

B、姬姆萨染色法：

⑴用甲醇固定标本10分钟，或醋酸：

甲醇=1：

3的混合液固定30分钟。

⑵用滴管吸取姬姆萨染色工作液布满材料面，注意不要有气泡。

⑶染色10――15分钟后，用自来水冲洗，空气干燥，二甲苯透明5分钟。

⑷用光学树脂封片后观察。

血液涂片姬姆萨染色法染色的结果：

有核细胞的细胞核染成紫红色或蓝紫

色，细胞浆染成粉红色。

无核细胞染成：

C、血液标本片观察结果：

2、练习小白鼠脊椎脱臼处死法。

或用乙醚麻醉致死。

3、仔细解剖小鼠，观察小鼠的内脏器官，找出脾脏、胸腺，分别做触片（3

张/组）并用瑞特氏（WrightFs）染色法或姬姆萨染色法染色、观察。

4、观察标本片，绘图描述人、小鼠血液中的几种有形成分。

［结果］

1、脾脏触片瑞特氏染色法染色的结果:

2、脾脏触片姬姆萨染色法染色的结果：

3、标本片观察结果：

3、实验操作记录（实验步骤、结果）

4、分析总结：

5、绘图描述：

人、鼠血液涂片中的淋巴细胞、粒细胞、红细胞

抗原免疫动物后，其相应的抗体就会产生并存在于动物的体液中。

血清是体液的重要组成部分，存在大量抗体。

学会了制备血清的方法，就学会了制备抗血清的方法。

红细胞是免疫学反应中常用的颗粒性抗原，也是可溶性抗原的载体及补体结合反应中指示系统的组成成员。

在许多免疫学检测中都要用到红细胞，因此，血清与红细胞的制备技术，是免疫学实验的基本技术。

1学习鸡、兔的动脉、静脉及心脏等部位的无菌采血方法；

2、学习动物血清、红细胞的制备方法；

3、掌握离心机的使用方法。

4、解剖鸡、兔，观察免疫器官。

［实验动物］鸡、兔各1只/2组，共需鸡5只、兔5只。

⑴3%来苏儿或3%石炭酸50~100ml/组;

⑵无菌生理盐水150ml/组；

分两瓶（100ml/瓶、50ml/瓶）

⑶500单位/ml的肝素溶液2~5ml/班。

⑴10ml注射器及针头2支/组；

50-100ml烧杯1个/组；

⑶手术刀、剪、镊子各1把/组；

⑷50~100ml、带玻璃珠的无菌三角烧瓶1个/组（可用20ml链霉素瓶代替）;

⑸无菌试管及试管塞6套/组；

离心管2支/组；

（6）离心机1台/6组，共3台；

⑺试管架1个/组、恒温培养箱一个/班、冰箱一个/班。

1、兔耳静脉采血（P19）

2、兔耳中央动脉采血（P19）

3、兔心脏采血：

（P18）

4、鸡翼根静脉取血（P19）

5、鸡心脏取血（P18）。

6离心法制备血清：

取下注射器针头将抽得的血液以无菌操作注入无菌的离心管中，平衡离心管，离心10——20分钟/2000—3000rpm。

用毛细滴管吸出血清，将获取的血清分装于已灭菌的小瓶内，加盖并用封口胶将瓶口封住，贴上标签注明血清的名称及制备日期，置低温冰箱中保存备用。

7、沉淀法制备血清：

取下注射器针头将抽得的血液以无菌操作注入无菌试管（或平皿）内，加盖置37C温室内2小时，凝固后用无菌滴管沿试管（或平皿）边缘将血块与皿壁脱离，然后放入4~8C冰箱中过夜，使血清充分析出。

吸取血清分装于已灭菌的小瓶内备用。

8、动物血红细胞制备：

（1）无菌操作取静脉血，将血注入装有玻璃珠的无菌三角瓶中，振摇数分钟以脱纤维抗凝。

（2）取适量的脱纤维血，用2—5倍无菌生理盐水洗2次，每次2000rpm，离心10分

钟，弃上清后用无菌生理盐水配成20%的红细胞悬液，置4C冰箱保存备用。

作业：

实验报告

1、简述无菌采血应注意哪些事项？

2、离心机操作中应注意哪些问题？

3、血清制备中应注意哪些问题？

4、红细胞制备中应注意哪些问题？

备注：

实验前请仔细阅读〈免疫学实验〉！

实验四血球凝集反应和交叉配血试验

红细胞等颗粒性抗原与血清中相应的抗体，在适量电解质存在的条件下，经一定时间后，凝集成肉眼可见的凝集物。

抗原抗体的这种反应，称为凝集反应。

在人的ABO血型中，A型血的红细胞上有A抗原，血清中有抗B抗原的抗体；

在B型血的红细胞上有B抗原，血清中有抗A抗原的抗体；

故A型血的红细胞与B型血的血清混合时，在有电解质存在的条件下就可能发生凝集；

同样，B型血的红细胞与A型血的血清混合，在有电解质存在的条件下也可能发生凝集；

AB型血的红细胞上，既有A抗原，也有B抗原，而其血清中既无抗A抗原的抗体，也无抗B抗原的抗体；

而O型血的红细胞上既无A抗原，也无B抗原，而其血清中既有抗A抗原的抗体，也有抗B抗原的抗体，故AB型血的血清与A型、B型、O型血的红细胞混合，均不会发生凝集，也就是说，AB型血

的人能接受A型、B型、O型血液的输血；

而O型血的血清与A型、B型、AB型血的红细胞混合，均可能发生凝集；

既O型血的人不能接受A型、B型、AB型血液的输血，但他却是万能输血者，其红细胞可以输给任何血型的人。

兔、鸡是否也有相应的血型？

尚不清楚。

本实验可自行设计，在有生理盐水存在的条件下，利用不同组的兔与兔、鸡与鸡、鸡与兔的红细胞和血清的混合，观察凝集现象和溶血现象，并分析、总结实验结果。

1、将实验三所制备的鸡、兔血清、红细胞分别进行交叉，自行设计，观察

鸡与鸡、兔与兔、鸡与兔之间血清与红细胞交互混合，产生的凝集现象和溶血现象。

2、尝试着利用抗原抗体反应的特异性对实验结果进行解释。

［试剂］0.85%生理盐水，100ml/组；

5ml注射器2支/组。

［器材］载玻片每人1张、小试管4支/组，毛细滴管2支/每组。

1、将制备好的鸡、兔红细胞用生理盐水稀释成0.5%的混悬液。

2、兔与兔（鸡与鸡）配血，观察血球凝集现象：

取1#兔（鸡）血清1滴于载玻片上，加入2#、3#兔（鸡）红细胞，用火柴棒混匀，

过10~15分钟，观察，血球凝集现象。

3、兔与鸡（鸡与兔）配血，观察血球凝集现象

取1#、2#兔（鸡）血清1滴于载玻片上，加入1#、2#鸡（兔）红细胞，用火柴棒混匀，过10~15分钟，观察，血球凝集现象。

4、兔与兔（鸡与鸡）配血，观察溶