各种细胞的传代Word格式文档下载.docx

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放入5%得CO2培养箱，３7度培养2４小时后观察。

[/inｄeｎｔ］

2，16ＨBE细胞株得传代方法：

ﻫ［ｉｎｄｅnｔ]镜下观察细胞生长融合达7０－8０％,准备传代。

常规开紫外照射超净台20分钟，同时把含10％胎牛血清得MEM培养基、0.25％胰酶、PＢS放置37度培养箱中孵育。

20分钟后开始传代。

先弃掉旧培养液,加PBS洗一次,然后加０。

２5％胰酶2ml消化（指25乘2５cｍ大小得培养瓶）细胞，镜下观察细胞，细胞突起回缩，细胞变圆，然后将培养瓶放置３7度二氧化碳培养箱中孵育3分钟左右（当然时间就是随机得,比如:

新配得胰酶作用时间短一些，配制时间长得胰酶作用时间会长一些,当然要不断地镜下观察）,待细胞大部分消化下来（大部分细胞呈流沙状脱离瓶壁），加４ml含１0％胎牛血清得MEM培养基终止消化。

反复吹打瓶壁上残留得细胞,并将已消化下来得细胞吹打均匀,然后吸入离心管中1000转离心1分钟,然后弃掉上清,用手指将离心管中得细胞弹打均匀，加新培养基,吹打均匀,分至3个新得培养瓶中，补足培养液。

将培养瓶平放,小心移入37度二氧化碳培养箱中培养过夜。

次日观察。

［/indent]

3,胃癌细胞AＧS与SＧC－7９01得培养：

细胞传代时不能长得太满，7０%－80％就可以传了、实验前先把紫外灯打开照３0分钟，然后再把鼓风机开1０分钟，同时把培养液与[iｎdent]胰酶放入3７度水浴箱中,千万记住不要盖上水浴箱得盖子、传代时，我一般把培养瓶口过一下火，就直接把培养液到去，再用0、25％得胰酶（不含EDTＡ）消化、等细胞变圆，细胞间空隙加大就直接把培养液到去，不用离心，然后再吹打，虽说要轻柔，但很难吹打成单细胞悬液，所以稍用力也没有关系、虽然操作不规范，但节省时间，细胞也没有被污染、[/inｄent］ﻫ4，ＡAＶ—293细胞得传代：

［iｎdenｔ］ＡＡV-293细胞较喜欢成团生长，比较娇嫩,怕冷,传代时不要一次从二氧化碳培养箱拿出很多瓶，一次只要拿2-3瓶出来传就可以了,否则细胞很容易死掉、细胞在5０－６０％传代，细胞生长状态最好、ﻫ用D-Hank’s液配制成0、２５％得胰酶消化半分钟左右，弃去胰酶、观察培养瓶就是否有针孔样缝隙,如有就可以加入培养液吹打细胞、消化过久，对细胞损害很大,而且成团很难吹打成单个细胞、然后加入含有1０％小牛血清得DＭEM、轻轻放入二氧化碳培养箱中培养、［／indeｎt]

5,肺癌细胞（人类）

［inｄent]其中绝大部分都就是贴壁细胞,具体如:

ﻫ（１）A549（肺腺癌）（２）NＣＩH4４6（小肺细胞癌）（３）８０１（非小肺细胞癌）（4）　NＣIH46０　（大细胞肺癌）ﻫ在消化传代过程中，步骤基本一致：

ﻫ吸去旧得培养液－＞用Hanｋs’（１Ｘ）清洗一两次->

加入一定量得消化液（Ｔrpｓｉn—ＥＤＴＡ）—＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时,回到超静台—＞吸去消化液－〉加入一定量得新培养液－＞反复吹打细胞—＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新得培养瓶中－〉最后再补充加入一定量新得培养液（RPＭI１６4０ｗitｈ10%　FBＳ）。

ﻫ注意:

　吹细胞时尽量多吹边角儿,此处细胞生长得多。

另外吸出细胞前要混匀。

ﻫ另注：

消化液得配制方法:

Trpsｉn—EＤTA（1Ｘ）-—０、25%TrpsinｗｉthEDＴＡ—4Na

preｐａred　wiｔh２、５gTrpsiｎ（1:

250）and　0、38g　ＥDTA—４Na/Ｌｉｎ　HBＳS、[/iｎdent］ﻫ

来源:

基因酷

[ 

本帖最后由　ｗisｔar　于2００7-9-2614:

30　编辑 

］

ｅｌｍｅｒ发表于200７－９-260９:

2０ﻫ６，　小鼠前脂肪细胞（3T３-Ｌ１）

［ｉndent］吸弃原培养液—-〉ＰBＳ洗一两次－—>

加入４00ul0、12５％胰酶（原代最好加0、05％ＥDTＡ）消化-－>

转动培养盘,保证整个盘面都被trypsin液润过-〉吸弃trypsｉn后37度消化3min－—>

以完全培液（DＭEM+10％ＦCS＋１/1000Ｂioｔｉn+1／100０泛酸钙—-〉吸打（枪得吸力调至最小），1：

10接种，前后左右摇晃培养盘，细胞均匀后放入培养箱继续培养（10%CＯ2,３7度）[/inｄｅnt］ﻫﻫ7，ＭＤBＫ（牛肾细胞）

[ｉｎdeｎt］类型:

贴壁细胞ﻫ来源：

购自武汉病毒所细胞保存中心ﻫ由四川农业大学动物生物技术中心繁殖保存

传代步骤:

ﻫ弃去旧得生长液-－>

用无钙镁水（CMＦ）冲洗贴壁细胞数次（视细胞瓶得大小，3—-5次）－—〉剩少许CMF,滴入ＡTＶ2—-3滴－—＞摇匀细胞瓶中得液体，使AＴV均匀得分布到瓶里得没个地方－->

放入37度二氧化碳温箱中３－—5miｎ消化——>

弃去ATV，加入生长液，拍打吸吹下细胞-—>

镜下观察-－〉分瓶--＞作好记号，放入３7度二氧化碳温箱生长ﻫ细胞特点:

该细胞生长力强,而且快速一般2４h就可以张到8０％，４8h不传就会变得很老，所以该细胞传时要勤点;

我感觉MＤBＫ还就是很好传得，比以前我传得SＴ、Vｅrｏ细胞等要好传一些，且不那么容易死亡,所以就是我得一个比较好得选择！

该细胞适合接种疱疹病毒（如:

伪狂犬病毒）!

[/indent］ﻫﻫ8，BＨＫ-21ﻫ[inｄeｎｔ］弃除旧得培养液后-——用缓冲液冲洗一遍－—--用0、22％得胰酶消化液消化约两分钟左右可以瞧到细胞像沙子一样脱落—－－—-—-赶紧倒掉胰酶加入含１0％得牛血清培养液终止消化。

但目前国内能找到得BHK—21细胞大部分都有支原体感染，如果就是好得BHK—2１细胞能做到1比20得分种率。

补充一点关于ＢHK—2１得培养，先用少量胰酶冲洗一下,弃去，再用胰酶消化1miｎ左右，效果会好一些［/ｉndent］

ﻫ［inｄent]BHK-21得经验：

ﻫ吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1mｌ胰酶（T－25瓶），放到３7度培养箱消化。

就是否需要用hａｎks　或pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要,我都没有洗,感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。

如果细胞长得太老，可以先加入1ｍl胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入１ml胰酶消化。

胰酶在使用前最好预热到37度。

由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶得活性不好，我得经验就是将胰酶进行分装，尽可能避免胰酶反复冷却加热。

消化时间得选择要根据实际情况决定,BHK－21还就是比较好消化得,5-15min应该足够了，消化时间太长对细胞不利。

可以在显微镜下观察消化情况,必要时可以拍打培养瓶帮助细胞分散,消化结束后直接加入培养基即可，胰酶会被血亲灭活。

一般在Ｔ－25瓶中留7—8mｌ培养基培养。

在９0％单层细胞时，1:

4传代2天后可长满.如果使用得培养基偏碱最好先放在ＣO2培养箱中平衡。

细胞生长中注意观察培养基颜色（加入酚红作指示剂），如出现偏黄表明细胞代谢产酸较多，此时如细胞未长满应更换部分或全部培养基以确保细胞状态不受影响。

［/indeｎt]

9，皮肤成纤维细胞与THP-1

[ｉnｄent]细胞：

皮肤成纤维细胞就是贴壁生长得.THP-1细胞就是悬浮得。

由于我们实验室养细胞得时间也不就是很长,所以也只能说说自己平时得操作了。

ﻫ先说皮肤成纤维细胞。

当细胞铺满瓶底，也就就是细胞与细胞之间没有间隙时,就可以传代了.一般十天左右传一代。

先吸弃旧培养液，用Ｄ－Hanks液洗两遍,再加入0、25％得胰酶，加入得量以能覆盖瓶底为准。

加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底,然后静置两分钟左右,最好就是能在显微镜下观察，当细胞之间出现间隙且有一部分细胞呈现圆形后即可。

吸去胰酶，加入含血清培养液，摇晃瓶子使培养液覆盖瓶底就行了。

因为血清可以终止胰酶得消化.然后吹打瓶底各处使细胞脱落.再分瓶补加培养液。

ＴHＰ-1细胞得传代就比较简单了。

可以有两种传代方法。

如果镜下观察细胞状态很好,没有其它杂质即细胞裂解物之类得，就可以采用直接传代法。

传代前将细胞培养瓶直立一个半小时使细胞自然下沉。

吸弃上层少量培养液约三分之一，将余下得培养液分成两瓶,再分别补加培养液即可.如果镜下观察觉得培养液中有杂质即可采用离心传代法.如果细胞数目较多可以低速离心约６0０转离心六分钟，细胞可以沉淀下来而且可以去除细胞碎片之类得杂质。

如果觉得细胞数目不多比较宝贵，那就提高转速可以1000转离心六分钟，这样细胞损失很少但可能也有些杂质会一起沉淀下来.离心后去除上清液，加入新得培养液吹打浑匀即可分瓶传代了.

目前得方法就这些，希望对新手有所帮助[/ｉndｅnt］ﻫﻫ[ 

本帖最后由wｉstａr于2007－9-2613:

52编辑 

elｍｅr发表于2007-9—26０９：

２0

10，　几种乳腺癌细胞得培养：

［indｅｎt］我养得细胞都就是乳腺癌细胞，就就是以下几种，ﻫ1、ＭCF－7:

就是一种很好养得人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI164０均可,10—１5％得小牛血清就能长得很好。

一般两到三天传一代。

传代也很常规。

吸出培养基,加入0、25％得胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余得培养基。

再加入２ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5mｉn，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可.我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清得作用，感觉效果还不错.因为MCＦ-7消化较快，一般不放到培养箱中消化,以免消化太过。

需要注意得就是MＣF－7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。

ﻫ

2、T4７D:

也就是一种人乳腺癌细胞,培养基用DＭEM+10-15%得小牛血清,培养方法与MCＦ-7差不多,但这种细胞传代时间长了会极难养。

我曾养过一株新从美国购置得，两三天传一代，长得很旺。

后又从国内购买一株时间较长得,要七天传一代，而且很娇气。

ﻫ3、MA８９1鼠乳腺癌细胞:

这种细胞比较特殊得就是很难消化，容易消化成一团一团得,如果胰酶得量比常用得多三分之一充分预热并放入培养箱中消化就会好得多。

传到1５－20代细胞就易长成团,从此生长缓慢,形态改变，需要复苏重养。

[/ｉnｄenｔ]ﻫﻫ11，９5—D细胞得传代ﻫ[indｅnt］首先要把０、25%得胰酶与培养液在3７度水浴２0～30分钟（预热）、从培养箱中拿出培养得细胞瓶（一般我就是让它长到9０％几再传代得），