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基因组(genome):
是指一个细胞内的全部遗传信息,包括染色体基因组和染色体外基因组。
C值(C-value):
一种生物体单倍体基因组DNA的总量,用以衡量基因组的大小。
基因重叠:
是指同一段DNA片段能够参与编码两种甚至两种以上的蛋白质分子,这种现象在其他的生物细胞中仅见于线粒体和质粒DNA。
这种结构的意义在于使较小的基因组能够携带较多的遗传信息。
多顺反子mRNA(polycistroniemRNA):
病毒基因组DNA序列中功能上相关的蛋白质的基因或rRNA的基因往往丛集在基因组的一个或几个特定的部位,形成一个功能单位或转录单元。
它们可被一起转录成含有多个mRNA的分子,称为多顺反子mRNA。
类核(nucleoid):
原核生物基因组通常由一条环状的双链DNA分子组成,在细胞中与蛋白质结合成染色体的形式,在细胞内形成一个致密的区域,称为类核。
插入序列(IS):
长度在2000bp以内,两端都有正向重复序列(DR)和反向重复序列(IR),中间1kb左右的编码序列,仅编码和转座有关的转座酶。
只有当IS转座到某一基因中使该基因失活或插入位点旁边的染色体发生畸变等效应时才会被发现。
复合型转座子(Tn):
长度在2000-20000bp之间,两端由一对IS元件组成,带有与转座作用有关的基因以及其他基因。
质粒(plasmid):
一类染色体外具有自主复制能力的环状双链DNA分子,属染色体外基因组。
cccDNA:
共价闭合环状DNA,大肠杆菌质粒是双链环状结构的DNA分子,没有游离的末端,每条链上的核苷酸通过共价键彼此头尾相连,这种结构称为共价闭合环状DNA。
质粒的不相容性(incompatibility):
两种不同质粒因利用同一复制和维持机制,在复制和随后向子代细胞分配的过程中会发生竞争,从而不能在同一宿主细胞内稳定存在,其中一种质粒将被丢失,这种现象称为质粒的不相容性。
反向重复序列:
是指两个相同顺序的互补拷贝在同一DNA链上的方向排列。
反向重复序列常见于基因的调控区,可能与复制、转录的调控有关。
卫星DNA:
由2-10bp组成重复单位,重复单位成串排列而成,由于这类序列的碱基组成不同于其他部份,可用等密度梯度离心法将其与主体DNA分开。
多基因家族(multigenefamily):
是指由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因。
多基因家族大致可分为两类:
①一个基因家族的不同成员成簇地分布在不同染色体上,但核酸序列高度同源,编码一组功能上紧密相关的蛋白质,如珠蛋白基因家族;
②基因家族成簇地分布在某一条染色体上,它们可同时发挥作用,合成某些蛋白质,如组蛋白基因家族。
假基因(pseudogene):
是指与某些有功能的基因结构相似,但不能表达有功能的基因产物的某些基因。
基因组学(Genomics):
是一门对生命有机体全基因组进行序列分析和功能研究的学科。
蛋白质组学(proteomics):
以蛋白质组为研究对象,分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间的相互作用与联系,在整体水平上研究蛋白质的组成与调控的活动规律。
基因工程(geneengineering):
又称为重组DNA技术,是指将外源基因通过体外重组后导入受体细胞,并使其能在受体细胞内复制和表达的技术。
分子克隆(molecularcloning):
是指在体外将制备的DNA片段与载体重组,然后导入受体细胞,并在受体细胞中复制、扩增,以获得该DNA分子的大量拷贝的技术。
冈崎片段(okazakifragment):
DNA复制是半保留复制,复制是从一个复制起点双向进行的。
DNA合成相对于模板链总是按5'
→3'
方向进行。
复制叉是由一条前导链和一条滞后链组成的,前导链中DNA合成可连续进行,而在滞后链中是先合成一些不连续的短的片段即岗崎片段。
载体:
指能携带外源DNA片段导入宿主细胞进行扩增或表达的工具。
载体的本质为DNA。
制备的目的基因或外源性DNA片段必须与合适的载体连接形成重组体,才能进入受体细胞并进行复制和表达。
载体包括克隆载体和表达载体。
多克隆位点(multiplecloningsites,MCS):
载体上具有多个限制酶的单一位点(即在载体其他部位无这些酶的相同位点),以供外源DNA插入。
克隆载体:
能将载体外源基因在受体细胞中复制扩增并产生足够量目的基因的载体。
表达载体:
指能将外源基因在受体细胞中有效转录和正确翻译的载体。
报告基因:
是指处于待测基因下游并通过转录和表达水平来反映上游待测基因功能的基因,又称报道基因。
启动子(promoter):
在转录起始位点及其上游大约100-200bp内的一组具有独立功能的DNA序列,决定RNA聚合酶Ⅱ转录起始点和转录频率的关键元件,包括核心启动子和上游启动子元件。
终止子(terminator):
一个基因的3,末端有一特定的DNA序列,它具有被RNA聚合酶识别并停止转录的功能。
该序列含有一段富含A/T和富含G/C的回文对称结构,终止子转录后形成的RNA具有茎环状局部二级结构。
穿梭载体:
既能在原核细胞中复制、又能在真核细胞中复制,在原核和真核细胞分子克隆中均能应用的载体称为穿梭载体(shuttlevector)。
基因组文库(G-文库):
是指含有某种生物全部基因随机片段的重组DNA克隆群。
转染(transfection):
是指以噬菌体、病毒或以它为载体构建的重组子导入细胞的过程。
蓝白斑筛选:
某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ¢
基因,该基因含一段编码b-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸a-肽的片段,IPTG可诱导此片段合成,此片段能与宿主细胞所编码的缺陷型b-半乳糖苷酶实现基因内a-互补,形成完整的b-半乳糖苷酶。
该酶能催化指示剂底物X-gal形成蓝色菌落。
当外源基因插入lacZ¢
基因中的MCS时,laca-肽基因阅读框架被破坏,细菌内将无b-半乳糖苷酶活性,结果重组克隆呈白色菌落,这是常用的蓝白斑筛选。
感受态细胞(competentcell):
细胞膜结构改变、通透性增加并具有摄取外源DNA能力的细胞。
转化(transformation):
以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程称为转化。
基因诊断:
利用分子生物学和分子遗传学技术,从DNA/RNA水平检测和分析基因的存在和结构、变异及表达状态,从而对疾病作出诊断的方法。
聚合酶链反应(PCR):
是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。
基因治疗:
是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用,从而达到治疗疾病目的的生物医学新技术。
核酸分子杂交(nucleicacidhybridization):
在DNA复性过程中,如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中,或把DNA与RNA放在一起,只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系,就可以在不同的分子之间形成杂化双链。
探针技术(probe):
将一小段已知序列的核酸片段用放射性同位素、生物素或荧光染料对它的末端或全链进行进行标记,称为“探针”然后用于分子杂交,杂交后通过放射自显影、荧光检测或显色技术,使杂交区带显现出来。
原位杂交:
即组织原位杂交,指组织切片或细胞涂片直接用于杂交分析。
先经适当处理,使细胞通透性增加,让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交。
因此原位杂交可以确定探针的互补序列在胞内的空间位置,这一点具有重要的生物学和病理学意义。
生物大分子:
指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子。
常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、脂类、糖类。
核酸变性(nucleicaciddenaturation):
在某些理化因素的作用下,维系DNA分子二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏,DNA由双螺旋变成单链过程。
增色效应(hyperchromiceffect):
DNA变性时其溶液OD260增高的现象。
解链曲线:
通常利用DNA变性后在波长260nm处吸光度(A260)的增加来监测DNA变性的过程。
如果以温度对A260的关系作图,所得的曲线称为解链曲线。
典型DNA变性曲线呈S型。
融解温度(Tm):
在热变性过程中,紫外吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度或融解温度。
核酸复性(nucleicacidrenaturation):
指变性DNA在适当条件下,二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。
退火(annealing):
热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为“退火”。
核酸探针(nucleicacidprobe):
是指能与特定核苷酸序列发生特异性互补杂交,杂交后可用特殊方法检测的已知被标记的核酸分子。
基因芯片(genechip):
又称DNA芯片(DNAchip)或DNA微阵列(DNAmicroarray),将大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上,称之为基因芯片。
该技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效、快速的核酸序列分析手段。
平台效应:
DNA以指数形式进行扩增,但是DNA的指数扩增并不能无限期的进行下去,PCR循环后期,由于引物、dNTP消耗、DNA聚合酶活力下降等因素使得扩增产物累积趋于饱和,原来以指数递增的速率曲线变成平坦的曲线,这种现象称为“平台效应”。
巢式PCR(nestedPCR):
是用两对引物,一对引物序列在模板的外侧,另一对引物序列在模板内侧,第一对引物做PCR的扩增产物作为第二对引物退火的模板,再做PCR。
提高灵敏度和特异性。
逆转录PCR(reversetranscription-PCR,RT-PCR):
检测RNA病毒、细胞因子mRNA时,一般不能以RNA为模板直接扩增,需要现在逆转录酶的作用下逆转录为cDNA,以cDNA为模板,再做PCR,该方法称为逆转录PCR。
one-stepRT-PCR:
一步法PCR,将逆转录和PCR过程合二为一,在同一体系中加入逆转录酶、逆转录引物、TaqDNA聚合酶、PCR引物、dNTP和缓冲液,直接以mRNA
为模板进行逆转录和PCR扩增,称为一步法RT-PCR。
多重PCR(multiplexPCR):
PCR一般由一对引物扩增产生一个核酸片段,以此手段诊断疾病的效率低。
为提高效率,常采用多重PCR技术。
该技术是在一个反应体系中加入多对引物,同时扩增出多个核酸片段,由于每对引物扩增的片段长度不同,可用电泳加以鉴别。
多重PCR主要用于多种病原微生物的同时检测或病原微生物、遗传病及癌基因的分型鉴定。
Ct值:
PCR扩增过程中,荧光信号开始由本底进入指数增长阶段时,达到一个人