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在每一塔板内，一部分空间为固定相所占据，另一部分空间则为流动相所占据，流动相占据的空间称为板体积。

待分离组分随流动相进入色谱柱后，在每块塔板里的两相间达成一次分配平衡（在柱内每达成一次分配平衡所需要的柱长就叫做塔板高度H）。

经过这样多次分配平衡之后，分配系数不同的组分彼此分离，分配系数小者最先从塔顶逸出。

塔板理论,由Y1/22.354和Y4可证明,由于死时间tM（VM）的存在，它又包括在tR（VR）中，而tM（VM）并不参加色谱柱内的分配，故理论塔板数n理和理论塔板高度H理并不能真实反映出色谱柱分离效果的好坏。

为了准确评价色谱柱效能，宜采用有效塔板数n有效和有效塔板高度H有效,有效塔板数和有效塔板高度,第三章气相色谱法,分离原理：

当待测各组分随载气进入色谱柱后，气相中的待测组分立即吸附溶解到固定相中去。

载气连续不断的流经色谱柱时，固定相中的待测组分又经脱附挥发回到气相中去。

随着载气的流动，脱附挥发到气相中的待测组分又吸附溶解到前面的固定液中。

由于各组分在固定相中的溶解、挥发能力不同，在反复多次的吸附脱附、溶解挥发过程中，溶解度大的组分在柱中停留的时间长，向前移动慢；

溶解度小的组分在柱中停留的时间短，向前移动快经过一定时间待测物质中的各个组分就彼此分离,先后流出色谱柱。

先根据样品沸程选择温度范围适宜的固定液，然后根据“相似互溶”原则，即固定液的性质和待测组分的性质有某些相似时，其溶解度就大，分配系数也大，选择性就高。

通常可按下述六点来选择固定液：

1分离非极性物质，一般选用非极性固定液，此时试样中各组分按沸点顺序先后流出色谱柱沸点低的先流出，沸点高的后流出。

2分离极性物质，一般选用极性固定液此时试样中各组分主要按极性顺序分离，极性小的先流出，极性大的后流出。

固定液选择的总原则,分离非极性和极性混合物时，一般选用极性固定液。

此时非极性组分先流出，极性组分后流出。

4对于能形成氢键的试样，如醇、酚、胺和水等的分离，一般选极性的或氢键型固定液，此时试样中各组分按与固定液分子间形成氢键的能力大小先后流出。

不易形成氧键的先流出，最易形成氢键的后流出。

5对于复杂的难分离的物质，可以用两种以上的混合固定液。

3.3.3色谱柱的老化,目的：

去除残留的溶剂（涂固定相时引入）及其它有机物，促进柱内固定液以及固定相均匀分布，提高柱效。

操作条件1.色谱柱放空（即不接通检测器）2.通载气min3.柱温高于工作温度,低于固定液最高使用温度4.加热h,浓度型检测器测量的是载气中某组分浓度的瞬间变化，即检测器的响应值和组分的浓度成正比.RC;

R=ScC例如：

热导池检测器电子捕获检测器,检测器,质量型检测器测量的是载气中某组分进入检测器的速度变化,即检测器的响应值和单位时间内进入检测器的某组分的量成正比.Rm;

R=Sm（dm/dt）例如:

氢火焰离子化检测器火焰光度检测器,气相色谱的定性分析方法,一.保留值定性单柱直接对照双柱峰高加入法二.保留值的经验规律定性三.保留指数定性四.与其它仪器分析方法结合定性,二.利用保留值的经验规律定性,1.同系物,2.同碳数的同族化合物（异构体）,三.利用保留指数定性,一定操作条件下，组分i的重量（mi）摩尔数（Mi）或体积（Vi）与检测器的响应信号（谱图的峰面积Ai或峰高hi）成正比峰面积在定量分析中准确度好，常用于定量分析定量分析要求：

准确测定峰面积Ai准确求出比例常数fi（定量校正因子）正确选用定量方法，把测得的峰面积换算为百分含量,3.气相色谱定量分析,最好有色谱纯试剂，如没有纯品，要确知该物质的百分含量。

测定时先准确称量标准物和待测物，再将它们混合均匀进样，测出它们的峰面积，按下式计算：

2.校正因子的测定,1.标准曲线法（外标法）又叫定量进样标准曲线法：

将待测组分的纯物质配成不同浓度的标准溶液（液体样品用溶剂稀释，气体样品用载气稀释）然后取固定量的标准溶液进行分析，从所得色谱图上测出峰面积和峰高，然后绘制响应信号（纵坐标）对浓度（横坐标）的标准曲线。

分析样品时，取与制标准曲线同量的试样（定量进样），测得该试样的响应信号，由标准曲线查其浓度。

2.内标法当只需测定试样中某几个组分，且试样中所有组分不能全部出峰时，可采用此法。

内标法：

将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称取的试样中，根据待测物和内标物的重量及其在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的含量。

例如，要测定试样中组分（重量为m）的百分含量m%时，可于试样中加入重量为mr的内标物r，试样重为m，则,以内标物为基准，则s=1，计算可简化为内标法优点：

定量准确缺点：

每次分析都要称取样品和内标物的重量，不适于作快速控制分析。

标准为别人，注意mi、mr、m三者的区别,3归一化法当试样中各组分都能流出色谱柱，并在色谱图上显示色谱峰时，可用此法进行定量计算。

设试样中有n个组分，各组分的量分别为m1，m2，mn，各组分含量的总和m为100，其中组分的百分含量m%可按下式计,基础:

经典液相色谱法高压泵，高效固定相，高灵敏度检测器高效分离、快速、自动分析理论:

气相色谱法,第四章高效液相色谱法（HPLC）,GC分析速度快、柱子长、柱效和灵敏度高、便宜。

流动相廉价无毒，对分离基本不起作用，故一般不用更换流动相，而只换柱子，但流动相不能回收只能分析热稳定性好、分子量小于400、沸点低于500的组分。

可分析的化合物很有限（150）检测器种类有限。

HPLC分析对象广，几乎所有化合物都能分析。

可用的检测器种类很多。

流动相对分离起很大作用检测时，一般不更换柱子，而是广泛改变流动相的组成或比例流动相可回收,HPLC与GC相比,HPLC经典液相色谱柱寿命：

可用12年仅用1次分析时间：

XX0minXX0hr在线检测离线检测进样量：

XX0lXX0ml柱效和工作压低高,HPLC与经典液相色谱法相比,化学键合固定相的优点：

传质速度快。

固定液不会流失，增加色谱柱稳定性和使用寿命。

可键合不同官能团，可灵活地改变选择性。

利于梯度洗提，利于配用灵敏的检测器和收集所需的馏分。

液液分配色谱常用的固定液：

如氧二丙晴、聚乙二醇、聚酰胺、三甲撑乙二醇、氢乙基硅酮、正十八烷和角鲨烷等。

1色谱柱的柱效n由那些因素决定？

如何提高柱效？

柱效影响因素：

载气种类及性质、色谱柱填充物的直径及填充的均匀度、填充物表面液膜厚度和载气流速。

提高柱效方法：

使用颗粒均匀、粒度适当的担体，均匀填充，采用分子量大的载气，高流速低柱温分离，减小液膜厚度，增大组分在液相中扩散系数等。

第二章色谱法的基本原理,2.5高效液相色谱法分离两个组分，色谱柱长为30cm。

已知在实验条件下，色谱柱对组分2的柱效能为26800m-1，死时间tM=1.50min，组分的保留时间tR1=4.15min，tR2=4.55min。

计算：

（a）两组分在固定相中的保留时间；

（b）两个组分的分配比k1，k2；

（c）选择性因子；

（d）30cm长色谱柱的理论塔板数n。

解：

（a）,（b）,（c）,（d）,2.20在HPLC柱上分离药物制剂，甲醇水为流动相，药物A、B及甲醇的保留时间分别为2.0min、5.0min和1.0min，甲醇的保留时间为死时间，计算：

（a）药物B停留在固定相中的时间是A的几倍？

（b）药物B在流动相上消耗的时间是A的几倍？

（c）药物B的分配系数是A的几倍？

（d）药物B在柱中的线速度是A的几倍？

（a）,（b）,（c）,（d）,2.22在液相色谱分析中，含A，B和C三种组分的混合物在30cm长的色谱柱上分离，测得不保留组分A的出峰时间是1.3min，组分B和C的保留时间分别是16.40min和17.36min，峰底宽分别为1.11min和1.21min。

（a）组分A和B的分离度；

（b）色谱柱的平均理论塔板数和理论塔板高度；

（c）若使组分A和B的分离度达到1.5，假设理论塔板高度不变，需要多长的色谱柱？

（d）使用较长色谱柱后，组分B的保留时间为多少（流动相线流速不变）？

（e）如果仍使用30cm长的色谱柱,要使分离度达到1.5，理论塔板高度为多少？

（a）,（b）,（c）,（d）,第一种方法,第二种方法,（e）,第一种方法,第二种方法,k2,13121,13141,0.0023cm,第三章气相色谱法,3.14采用内标法测定燕麦敌1号试样中燕麦敌含量时，称取燕麦敌试样18.2g，加入正十八烷1.88g，测得峰面积A燕麦敌=68.0mVmin，A正十八烷=87.0mVmin，已知燕麦敌以正十八烷为标准的相对校正因子为2.40，计算试样中燕麦敌含量？

19.38%,3.11气相色谱固定相为聚乙二醇，当柱温为100时，把含有A和B的样品以及相隔两个碳的两种正构烷烃的混合物注入色谱柱分析，A在两种正构烷烃之间流出，它们的保留时间分别为10.62min，12.62min，14.82min，测得甲烷的保留时间为0.62min，最先流出的正构烷烃的保留指数为900，而组分B的保留指数为958.2，求组分A的保留指数，试问A和B有可能是同系物吗（提示：

据题意n=9，m=2，计算保留指数时需用调整保留时间）？

（a）,（b）,A和B不是同系物，因为45.79不是100的整数倍,3.18用GC测定废水中的二甲苯，以苯为内标物，检测器为火焰离子化检测器。

取1L废水（不含苯），加入0.5mg苯，经二氯甲烷溶剂萃取和浓缩后，得到1mL样品。

取1L进样分析，测定四个组分的峰面积如下表（fis是组分的相对校正因子）：

请用内标法计算此废水样品中三种二甲苯异构体的物质的摩尔浓度。

3.18用GC测定废水中的二甲苯，以苯为内标物，检测器为火焰离子化检测器。

第四章高效液相色谱法,4.11利用HPLC内标法测定生物碱试样中黄连碱和小檗碱的含量，称取内标物、黄连碱和小檗碱对照品各0.2500g配置成混合溶液，测得峰面积分别为450.0，430.0和512.5mVmin。

称取0.3000g内标物和0.5120g试样，同法制成混合溶液后，在相同的色谱条件下，测得内标物、黄连碱和小檗碱的峰面积分别为520.0，462.5和567.5mVmin，计算样品中黄连碱和小檗碱的百分含量。

4.13用高效液相色谱法分离两个