血友病的基因诊断PPT文档格式.ppt

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C2%,22,直接基因测序,结果：

直接测序未检测出突变。

原因：

据文献报道FVIII直接基因测序有1%-10%的患者查不到基因突变（HumMutat.2002Oct;

20（4）:

267-74）突变可能在内含子中可能存在大的缺失,23,携带者诊断结果,携带者及待检者F8内含子22倒位均为阴性,24,间接诊断结果BclI酶切图,III-1表姐：

-/-II-2舅妈：

-/-II-3母亲：

+/-II-4父亲：

+/+III-2待检者：

+/+,M,25,BclI酶切图测序图,BclI酶切识别位点T/GATCA图a待检者测序图，含BclI酶切位点图b表姐测序图，不含BclI酶切位点,a,b,26,间接诊断结果ca13基因扫描,III-1表姐：

144/144III-2待检者：

142/142II-3母亲：

142/144II-2舅妈：

140/144II-4父亲：

142/-,27,间接诊断结果ca22基因扫描,III-1表姐：

79/79III-2待检者：

79/83II-3母亲：

83/79II-2舅妈：

79/79II-4父亲：

79/-,28,血友病A携带者间接诊断结果分析,表姐,舅妈,父亲,母亲,待检者,综合A13、CA22及BclI信息，待检者与其表姐有不同的X染色体。

舅舅,女性血友病A的基因及产前诊断,30,标本来源,先证者（II-1），女，21岁，汉族，自幼有踝关节及膝关节有自发出血，临床诊断为血友病A，冷沉淀及浓缩FVIII输注有效，因怀孕要求作基因诊断及产前诊断,？

？

31,基因检测结果,F8内含子22倒位F8内含子1倒位先证者阳性（携带者）阴性胎儿阴性阴性其他人阴性阴性先证者F8基因所有外显子及其侧翼序列扩增测序（-）,32,遗传连锁分析,33,X染色体随机灭活模式检测,先证者来自母系的X染色体大部分被灭活，而来自父系的X染色体保留活性家系其他成员及胎儿为X染色体随机灭活,34,发病机制,先证者一条X染色体发生了F8基因内含子22倒位，而未检测到其它F8基因相关突变遗传连锁分析发现该女性患者的两条X染色体分别遗传自其父母，排除其为单亲二倍体先证者的X染色体灭活呈非随机性灭活，其遗传自父亲的X染色体大部分保留了活性,35,女性血友病A,女性血友病：

（FVIII:

C3.4%,FVIII:

Ag4.2%Leu1975Pro和3637-3638insA,父亲：

C6.9%,FVIII:

Ag7.4%）,Leu1975Promutation,JThrombosisandhaemostasis2006,36,3637-3638insA突变是如何产生的?

PCR扩增患者的cDNA（2809bp，exon14toexon19），该片段含上述两种突变，产物进行TA克隆测序测序结果显示该突变来自患者的母亲,父亲的等位基因,母亲的等位基因,37,3637-3638insA突变是如何产生的?

母亲外周血DNA的F8基因没有检测到基因突变母亲不同组织的DNAF8基因检测也没有检测到突变，说明母亲不是体细胞的嵌和体表明女性血友病患者3637-3638insA是一种自发突变（denovo）,38,框移突变（3637-3638insA）,定量RT-PCR显示：

患者的FVIIImRNA减少,结论：

女性血友病A患者是其F8基因中来自父亲的Leu1975Pro突变和自发突变3637-3638insA，双重杂合突变导致的,39,一个血友病家系，父亲为血友病A，儿子为血友病B,同时存在HA和HB患者家系的基因诊断,HA,HB,40,FVIII（Xq28）,FIX（Xq27）,q,p,染色体X,血友病A、B,41,Resultofphynotypedetection,42,基因诊断结果,F8INV22：

父亲（）其他成员（）F8INV1：

所有成员（）F9测序:

儿子mutation（32772AT，Ser365Cys）,母亲同位置杂合子阿姨、外公（）父亲（）,43,Resultoflinkageanalysis,？

：

FIX基因缺陷,_,_,44,外周血细胞、组织细胞外公体细胞、生殖细胞嵌合体,外公,阿姨,Peripheralblood,buccalcavitycells,Enqomphesisrate:

14.1%,嵌合体检测,45,凝血因子V和VIII联合缺陷；

常染色体隐性遗传性疾病；

发病率为1/100万，男女均可发病致病基因并非F5，F8基因，而是与蛋白转运相关受体的编码基因突变导致：

LMAN1（70%），MCFD2（30%）分子发病机制研究,F5F8D家系基因诊断,46,F5F8D家系基因诊断,先证者1：

10岁女孩，口腔粘膜反复出血患者母亲怀孕要求做产前诊断,47,二、F5F8D家系基因诊断,先证者2：

50岁女性，贫血，凝血功能不佳，长期痔疮出血先证者3：

47岁女性，凝血功能不佳,48,二、F5F8D家系基因诊断,先证者4：

50岁男性，平时无明显的凝血功能异常现象，因痔疮出血难止于术前进行凝血功能筛查,49,F5F8D家系实验室检测结果,50,F5F8D家系基因检测结果,先证者1：

LMAN1：

Exon8nt925-933insA305frameshift编码20个氨基酸后终止LMAN1：

Exon11nt1387CCT（X71661.1）456ArgStop,母亲,父亲,产前诊断：

胎儿女性，且携带了来自父亲的突变,51,先证者2、3：

MCFD2：

Exon4nt501TC，导致第136位氨基酸错义突变，136IleThr,F5F8D家系基因检测结果,52,F5F8D家系基因检测结果,先证者4：

Exon5nt636CT，导致202RStop,先证者4之子（杂合子）：

Exon5nt636CCT,间接诊断中的基因重组,54,HA家系情况,先证者II-3为重型血友病A患者，F8C1.0%II-5要求作携带者诊断,?

55,HA家系检测结果,22倒位：

均为阴性1倒位：

先证者（II-3）为阳性，女性（II-5）为携带者。

56,HA家系遗传连锁分析的结果,5,A1542032031241568086,C1542032031241568496,B1541951951281568086,1,2,3,B1541951951281568086,C154203203,1281568086,A1542032031241568086,？

57,HA家系诊断结果,内含子1倒位是该家系HA发生的致病机制，II-5为内含子1倒位携带者遗传连锁分析发现II-5在ST14，DXS15，DXS9901，G6PD与DXS1073，F8Civs13，CA22，DXS1108间发生染色体的同源重组,58,结论,在应用间接诊断进行HA家系携带者及产前诊断时，不能仅使用单一的位点进行诊断，必须联合应用多个与F8相关的位点来进行遗传连锁分析，尤其是F8基因内的多态性位点,59,结论,遗传连锁分析进行血友病携带者及产前诊断时，要考虑到同源重组的发生可能导致误诊在中国人群中应该开发更多的F8和F9分子内大信息量的多态性位点以提高血友病的携带者及产前诊断的诊断率及准确率,60,血友病携带者和产前诊断流程,PCR扩增,外周血DNA抽提（携带者）,直接核酸测析,间接联锁分析,明确诊断,长链PCR检测内含子1,22倒位,血友病A、,羊水DNA抽提（胎儿）,61,欧美国家利用F9基因内的6个多态性位点，可对89的血友病B作出诊断（BrJHaemato1199384：

101-105）亚洲人这些位点的诊断信息几乎为0（HumHered.1992;

42（3）:

204-5）,血友病B间接连锁分析,62,寻找杂合度较高的F9基因外的6个STR位点，累积识别能力为99.99本项目的诊断率和准确率均为100,本项目血友病B间接连锁分析,DXS1192DXS1211DXS102DXS8013F9DXS1227DXS8094,血友病A/B携带者和产前诊断结果,目前，以46个家系/月，接收来自全国及海外的血友病携带者和产前诊断,