临床微生物SOP-链球菌属检验标准操作规程Word文档格式.doc

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1.概述

链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。

该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血，α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。

化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。

2.标本类型

血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。

3.鉴定

3.1形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。

3.2培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：

α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；

β溶血周围有明显较大的完全透明环；

γ溶血（不溶血性）无异常变化。

肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。

3.3生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。

肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环>

14mm）。

3.4鉴定要点

3.4.1本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。

3.4.2根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。

A群链球菌（化脓性链球菌）：

α溶血，杆菌肽敏感。

B群链球菌（无乳链球菌）：

β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。

C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：

马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。

D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：

胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验阳性，45℃生长。

现归属于肠球菌属。

C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。

非β溶血链球菌的鉴别见表

菌名

Optochin试验

胆汁溶菌试验

胆汁七叶苷试验

肺炎链球菌

+

-

牛链球菌

其他草绿色链球菌群

3.5操作步骤

3.5.1涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。

3.5.2触媒试验参见《触媒试验标准操作规程》

3.5.3鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。

4.药敏

参见《抗菌药物敏感试验标准操作规程》及CLSI最新版本文件。

5.质量控制

参见《质量管理程序》。

6.检验结果解释与分析

6.1草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常是不致病的，只有当草绿色链球菌出现在血液等无菌液体中时，鉴定才有意义。

6.2如果检测出链球菌对青霉素敏感，同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头孢唑林、头孢地尼、头孢布坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感，则不必进行上述抗生素的药敏试验。

如果检测出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈≤19mm，应当检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC，因为可能发生青霉素耐药或中介现象。

如果检测出链球菌对红霉素敏感或耐药，则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地

红霉素敏感或耐药。

近年来青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）及多重耐药（MDRSP）菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。

7.临床意义

化脓性链球菌（A群链球菌）是引起化脓性感染的主要病原菌，致病力最强，可引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。

此外其感染后也可发生急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性并发症。

无乳链球菌（B群）正常寄居于妇女阴道和人体肠道，带菌率可达30%左右，此菌可引起新生儿感染。

肺炎链球菌存在于正常人群的口腔、鼻咽部，属正常菌群，可引起大叶性肺炎或支气管炎。

草绿色链球菌是人体上呼吸道正常

菌群，通常不致病。

如果在血液内或无菌体液中检出草绿色链球菌，有临床意义。

8.鉴定流程

链球菌科（链球菌属和肠球菌属）的鉴定索引

菌落观察：

灰暗色、扁平、干燥，溶血或不溶血

涂片染色：

GPC球菌，单个、成双或短链状排列

触酶（-）

α溶血β溶血γ溶血

菌落、菌体特征胆汁七叶苷

胆汁溶菌试验杆菌肽CAMP七叶苷-+

Optochin（5ug）S黄色素+草链D群

A链马尿酸钠胆汁七叶苷6.5%NaCl

S（溶菌,>

15）R+

肺链胆汁七叶苷B链+-+-

--D群G链肠球菌属D链

草绿链球菌群D群

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会．CNAS-GL23:

2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南．2008

[2]周庭银编著．临床微生物学诊断与图解．第二版．上海：

上海科学技术出版社，2007

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编．全国临床检验操作规程．第三版．南京：

东南大学出版社，2006

[4]MurrayPR.Manual0/FClinicalMicrobilogy.9thed.Washington:

ASMPress，2007

[5]IS015189:

2007医学实验室一质量和能力认可准则．2007

编写人签名

复审人签名

审批人签名

生效日期

姓名：

XXX

编写日期:

2011-05

姓名：

复审日期：

2011-06

批准日期：

2011-07