HIV初筛实验室工作制度及操作规范.docx

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HIV初筛实验室工作制度及操作规范

HIV快速检测实验室操作规范及工作制度

一、抽血标准操作规程  

  1、适用范围  

  需做血液检测的对象。

  2 、试剂与材料

  碘酒、酒精棉、棉签、橡皮止血带、注射器（一次性采血器）、试管、止血棉。

  3 、操作步骤

  3.1核对被检者姓名并标价试管；

  3.2请被检者入座，伸出手臂放在采血垫上；

  3.3用橡皮止血带扎紧并请被检者握紧拳头；

  3.4选择静脉，用碘酒棉在采血部位由里向外擦拭（直径约6cm左右）消毒；

  3.5用酒精棉脱碘；

  3.6把一次性注射器（一次性采血器）打开，在采血部位穿刺静脉，抽取血液；

 3.7放松橡皮止血带，拔出针头，同时请被检者用止血棉压迫止血。

二、酒精棉球的制备

1.试剂与材料    

无水乙醇（分析纯）、  消毒蒸馏水若干、消毒量筒（1000ml）、消毒盛器

 2.操作步骤

 2.1把消毒棉放入消毒盛器中待用。

 2.2取165ml消毒蒸馏水到入消毒好的量筒中，再加入一瓶500ml无水乙醇充分 混匀。

2.3把配好的75％酒精到入放有消毒棉的盛器中    

三、样品的采集和处理            

1.  范围  

    本章规定了用于艾滋病病毒（HIV）检测的血清、浆和全血样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、CD4+/CD8+T淋巴细胞测定和HIV分离培养。

2.  操作步骤

2.1  样品的采集和处理

    艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。

唾液或尿液有时也可作为测试样品。

常用的血液样品的采集和处理方法如下：

2.1.1血清样品采集和处理

2.1.1.1用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1~2小时，待血液凝固、血块收缩后再用3、000r/min离心15min，吸出血请备用。

2.1.1.2如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。

采血后要待血样干燥后再包装送检。

2.1.2  抗凝血样品采集和处理

2.1.2.1用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽去静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。

2.1.2.2应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或柠檬酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。

2.1.2.3用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4~8h内分离PBMC和血浆，否则应在24~48h内分离血浆和血细胞。

（病毒载量测定不同方法对样品的要求见第四章4.1中表2；CD4+/CD8+T淋巴细胞测定样品采集要求见第五章4.1。

）

2.1.3采集样品注意事项

2.1.3.1采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒有特殊要求）。

2.1.3.2采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作，应带双层手套。

2.2  样品的保存

2.2.1用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20度以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8度。

2.2.2用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80度。

2.2.3用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。

2.3  样品的运送

2.3.1  实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。

2.3.2应采用WHO提出的三级包装系统

2.3.2.1第一层容器：

装样品，要求防渗漏。

样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。

在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。

随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。

2.3.2.2第二层容器：

要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。

将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。

2.3.2.3第三层容器：

放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。

在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。

2.3.3  血清和血浆样品应在2~8度条件下由专人运送。

用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下18~23度运送。

每一包装的体积以不超过50ml为宜。

2.3.4  运送感染性材料必须有记录。

2.3.5  如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20度以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免冻融。

2.3.6  特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。

2.4  样品的接收

2.4.1  含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。

2.4.2  核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。

如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。

2.4.3  检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。

如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。

并要将样品情况立即通知送样人。

2.4.4  打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。

样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。

同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。

2.4.5  因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。

2.4.6接受样品时应填写样品接受单。

四、 电热恒温水浴箱操作规程

1.  概述：

    本电热恒温水浴箱主要用于科研单位、医疗单位及化验所检查化验病理血清等用。

2.  技术性能：

   工作环境：

常温常压条件下正常工作。

   技术指标：

温度调节范围：

37℃~65℃

   温度波动：

    ±  1℃

   温度均匀性：

  ±  1℃

3.  使用方法：

3.1使用是必须加入温水，可缩短加热时间和节约用电。

3.2打开电源开关，电源指示灯亮表示电源接通。

3.3旋转恒温控制器旋钮，加热指示灯亮表示电源接通，当温度表上的温度达到所需使用的温度时，将恒温控制器的旋钮调整在恒温指示灯忽亮忽熄点，待数分钟后即能自动恒温控制。

 3.4恒温控制器的刻度，仅可作温度对照指示，并非温度指示刻度。

4.点检程序：

 4.1为保证水浴箱温度的准确性必须每日使用温度计测量水浴箱内水温，并做好日温度记录。

 4.2每半年由设备科检测校正一次，且附有原始记录。

5.注意事项：

 5.1箱外壳必须有效接地。

 5.2在未加水前，切勿开电源，以防止电热管内的电热丝烧坏。

 5.3非必要时，请勿拆开右册盖板，以利安全。

五、生物安全防护实验室操作规程  

（一）、适用范围：

     生物安全防护实验室分为四个等级（本文涉及一、二级），上一级实验室操作规程除了必须遵守一级实验室的所有操作规程外还必须遵守本级所特有的操作规程。

（二）、操作步骤：

 一级生物安全防护要点

    1、常规微生物安全操作要点

    1）禁止非工作人员进入实验室，参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入。

    2）接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套离开实验室前要洗手。

    3）禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼睛、化妆及储存食物。

    4）用移液器吸取液体，禁止口吸。

    5）应制定尖锐器具的安全操作规程。

    6）按照实验室安全操作规程操作，以降低溅出和汽溶胶的产生。

    7）每天工作前后至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要及时消毒。

    8）所有培养物、储存物及规定的废弃物在运出实验室之前必须进行消毒，如高压消毒。

需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭容器内。

    9）制定有效的防鼠防虫措施。

    2、特殊的安全操作规程`

      无特殊的安全操作规程

二级生物安全防护实验室

    1、常规微生物安全操作要点

    与一级生物安全防护实验室

（一）相同。

    2、特殊的安全操作规程

    1）进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。

  2）实验室主任有权决定进入实验室工作人员的名单，并负有最终责任。

进入实验室的工作人员应了解潜在风险并符合进入实验室的特殊要求（如，经过免疫接种）。

免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室内工作。

  3）实验室入口必须贴上国际通用的生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、需要的免疫、负责姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。

    4）工作人员应接受必须的免疫接种和相应的抗体检测（如乙型肝炎疫苗、卡介苗等）。

    5）收集保留从事危险性工作人员的基础血清并定期检测，如有问题及时处理。

六、移液器的使用与校准的标准操作程序

一、移液器是生物实验室常用工具，它以使用方便、安全性好的性能适宜于各种实验，保养好移液器是保证实验准确、可靠的重要条件。

因此特制定此标准操作程序：

（一）、移液器的体积类别：

可分为5种

    0.5~10.0μl（分刻度为0.1μl）

    5~40μl（分刻度为0.5μl）

    40~200μl（分刻度为1.0μl）

    200~1000μl（分刻度为5.0μl）

    1~5ml（分刻度为50μl）

（二）、移液器的使用方法

    首先应选择或按说明书要求调节好所需要的体积，装上配套的加样头，以下所有操作都必须将移液器保持垂直状态。

  1、前进法

  （！

）将移液器按钮压到第一定点位置。

（2）将移液器加样头插到所需要移液样品液面下2~3mm，慢慢松开。

  （3）将加样头伸入需要样品的容器，尽量将按钮推至最后档。

  （4）松开按钮，回到起点，退掉加样头。

  2、倒退法

  本方法适用于高黏度或易起泡沫的样品加样，也推荐用于极小量液体的加样。

（1）将按钮下压至第二定点位置。

（2）将移液器的加样头插入所需要移液样品液面下2~3mm，慢慢松开吸入液体。

  （3）将加样头伸入需