04PCT测定试剂盒荧光免疫层析法工艺规程.docx
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04PCT测定试剂盒荧光免疫层析法工艺规程
文件类型：
技术标准
文件名称:
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
文件编号：
版本/修改状态：
V1.0/00
受控状态：
受控
编制人：
日期：
年月日
审核人：
日期：
年月日
批准人：
日期：
年月日
生效日期：
年月日
颁发部门：
质量部
颁发份数：
2份
分发部门：
生产部、质量部
受控编号：
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）
1.产品名称、剂型、注册分类、规格、定义、组成及用途
中文名称：
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）
规格：
25人份/盒、40人份/盒
剂型：
诊断试剂
注册分类：
二类6840体外诊断试剂
定义、组成及预期用途：
本产品采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析分析技术，通过夹心法检测原理来体外定量测定人血清、血浆样本中降钙素原（PCT）的含量。
依据：
《降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）产品技术要求》
文件类型：
技术标准
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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V1.0/00
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受控
1.生产工艺流程图
2.试剂卡制备生产工艺
3.质量控制点
4.主要原辅料、包装材料消耗定额、能源消耗定额、物料平衡的计算方法
5.包装要求、标签、说明书（附样本）与产品贮存方法及有效期
6.设备一览表
7.技术安全及劳动保护
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技术标准
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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V1.0/00
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受控
1.
PCT生产工艺流程图
文件名称:
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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V1.0/00
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受控
2.试剂卡制备生产工艺
2.1工序一：
样品垫制作
2.2工序二：
ＮＣ膜制备
2.3工序三：
样本稀释液制备
2.4工序四：
贴膜组装
2.5工序五：
切条
2.6工序六：
压卡装袋
2.7工序七：
烧数据卡
2.8工序八：
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）试剂盒组装
2.1工序一：
样品垫制作
2.1.1探针稀释液
2.1.1.1标准配方
名称
物料名称
配制1000ml使用量
75人份使用量
探针稀释液
三羟甲基氨基甲烷
2.4228g
0.12ml
调节PH=8.4±0.2
蔗糖
150g
牛血清白蛋白
5g
吐温-20
5ml
Proclin300
0.3ml
纯化水定容至1000ml
2.1.1.2配制方法
按照标准配方准确称取三羟甲基氨基甲烷2.4228g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在8.4±0.2范围内，再依次加入蔗糖150g、牛血清白蛋白5g、吐温-205ml、Proclin3000.3ml，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml。
混合均匀4～30℃保存备用，有效期7天。
2.1.2样品垫处理液
文件名称:
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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受控状态：
受控
2.1.2.1标准配方
名称
物料名称
配制1000ml使用量
75人份使用量
样品垫处理液
十二水合磷酸氢二钠
5.73g
40ml
二水合磷酸二氢钠
0.62g
调节PH=7.4±0.2
纯化水定容至1000ml
2.1.2.2配制方法
按照标准配方分别准确称取十二水合磷酸氢二钠5.73g、二水合磷酸二氢钠0.62g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7.4±0.2范围内，将充分溶解并调好pH的溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml，混合均匀4～30℃保存备用，有效期7天。
2.1.3样品垫制作
2.1.3.1样品垫处理
（1）将玻璃纤维平铺到水平槽内，倒入足量样品垫处理液，应让玻璃纤维完全浸泡入样品垫处理液中；
（2）浸泡至少15分钟，保证玻璃纤维完全浸透，玻璃纤维表面无气泡；
（3）玻璃纤维浸透后，将玻璃纤维取出，45度恒温干燥4-6小时；
（4）干燥完成后4～30℃封存备用，有效期7天。
2.1.3.2样品垫制作
（1）处理后的样品垫裁切成29mm宽度；
（2）兔IgG抗体微球偶联物：
鼠抗人NT抗体微球偶联物：
探针稀释液=1:
3:
20的比例配制探针溶液；
（3）按4μl/cm喷量，将配制好的探针溶液均匀喷点到已裁切的样品垫上。
（4）在45度恒温干燥、湿度小于30%的环境下干燥4-6小时。
注：
干燥湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在30%以下。
（5）干燥完成后4～30℃封存备用，有效期14个月。
注：
干燥后应避免长时间放置于4～30℃环境。
2.2工序二：
ＮＣ膜制备
2.2.1包被液
2.2.1.1标准配方
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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受控
名称
物料名称
配制1000ml使用量
75人份使用量
包被液
磷酸氢二钾
1.82g
0.06ml
二水合磷酸二氢钠
0.22g
氯化钠
8.76g
调节PH=7.2±0.2
蔗糖
30g
纯化水定容至1000ml
2.2.1.2配制方法
按照标准配方分别准确称取磷酸氢二钾1.82g、二水合磷酸二氢钠0.22g、氯化钠8.76g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7.2±0.2范围内，再加入蔗糖30g，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将充分溶解并调好pH的溶液缓缓倒入容积为
1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml，混合均匀4～
30℃保存备用，有效期7天。
2.2.2C线包被液使用包被液将羊抗兔IgG抗体稀释成终浓度为1mg/ml。
充分混合后保存备用。
注：
现用现配
2.2.3T线包被液使用包被液将鼠抗人PCT抗体稀释成终浓度为1mg/ml。
充分混合后保存备用。
注：
现用现配
2.2.4NC膜划线
（1）按左图所示，将PVC底板摆好；除去PVC底板中间25mm处的保护纸，沿上面保护纸的下边缘，将硝酸纤维素膜（NC膜）贴在该区；
注：
1.粘贴上下边缘与相邻区上下边缘齐平；
2.粘贴时注意动作轻柔，避免用手直接按压硝酸纤维素膜（NC膜）表面。
（2）贴吸水滤纸：
按27mm的宽度将吸水滤纸切割成条，除去PVC底板上端25mm
处的保护纸，将切好的吸水滤纸贴在该区；
注：
吸水滤纸下边缘超出该区2mm覆盖硝酸纤维素膜（NC膜）；上边缘与底板边缘齐平。
（3）使用划线包被机按照1μl/cm包被量将C线包被液及T线包被液包被至NC
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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V1.0/00
受控状态：
受控
膜适当位置；
（4）C、T线区域间距应调节足够宽度以保证检测仪可以显著区分，习惯上C线距NC膜上边缘距离为10mm，
CT线之间间距为6mm，T线与NC膜下边缘间距为9mm。
注：
1、贴膜和包被过程应注意避免膜的污染。
2、划线时的湿度条件是NC膜制备的要点之一，湿度应控制在45％～65%。
3、制备前需将C线包被液、T线包被液与硝酸纤维素膜（NC膜）平衡至相同温度。
2.2.5NC膜干燥
将包被的NC膜放置在相对湿度≤30%（环境温度18℃～26℃）条件下干燥。
NC膜干燥时间至少6小时。
干燥完成后封存备用，有效期14个月。
注：
1、干燥时，湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在≤30%。
干燥后应避免长时间放置于4～30℃环境。
2.3工序三：
样本稀释液制备
2.3.1标准配方
名称
物料名称
配制1000ml使用量
75人份使用量
样本稀释液
磷酸氢二钾
1.82g
22.5ml
二水合磷酸二氢钠
0.22g
氯化钠
8.76g
调PH至7.4±0.2
S9
10g
Proclin300
0.3ml
牛血清白蛋白
5g
2.3.2配制方法
按照标准配方分别准确称取磷酸氢二钾1.82g、二水合磷酸二氢钠0.22g、氯化钠8.76g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7.4±0.2范围内，再依次加入S910g、Proclin3000.3ml、牛血清白蛋白5g，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml，混合均匀后4-30℃保存备用，有效期7天。
2.3.3分装
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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受控状态：
受控
将上面配制好的样本稀释液按照300μl/支的装量进行分装，4-30℃条件下保存，有效期12个月。
2.3.4标签打印、贴签
2.3.5质控项目和标准
项目
标准
外观
样本稀释液为无色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
净含量
样本稀释液净含量应在标示值的90%～110%之间。
pH
在7.4±0.2范围内。
2.4工序四：
贴膜组装（湿度≤30%）
1）贴样品垫：
将样品垫贴在已包被好的NC膜底板28mm处；
注：
样品垫上边缘1mm覆盖NC膜；下边缘与底板边缘齐平。
2）贴好后，应如下图所示；
注：
1、避免混淆是本工序的要点，确保指令、样品垫标示和包被好的NC膜三者之间的完全一致。
未经清场，不
2、清场在本岗位必须得到强调。
3、湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在湿度≤30%。
2.5工序五：
切条
（1）接通切条机电源，设定切条程序，设定切割宽度为4mm；
（2）将大卡平放入切条机平台轨道中，正面朝上，调节切条机上的螺丝，调节卡槽宽度与大卡宽度相同按操作面板上“连动”键，开始切条；
（4）将所有大卡头尾相接，慢慢放于切条机上，收集切好的条子，除去有标记（不合格）的条子。
注：
湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在≤30%。
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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版本/修改状态：
V1.0/00
受控状态：
受控
2.6工序六：
压卡装袋
（1）装条：
将切好的条子放置在底卡的卡槽内，面板加样孔位置对应样本垫；注：
不得直接按压中间部位，如条子上出现划痕，按不合格品处理。
（2）盖面板：
将面板与底板对合，用力按压，使面板与底板吻合。
（3）压卡：
按《平板压壳机操作规程》压卡注：
压卡时应使卡竖向排列在传送带上，并严禁将卡重叠放置。
（4）装袋：
将1份试剂卡、1袋干燥剂装入铝箔袋中，按《封口机操作规程》封好铝箔袋。
（5）标签打印、贴签。
4-30℃条件下保存，有效期12个月。
（6）质控项目和标准。
项目
标准
线性范围
试剂的线性范围为（不小于0.990。
0.1-60）ng/mL，在此线性范围内，线性相关系数
r应
准确度
回收率在85%～115%之间。
注：
1、避免混淆是本工序的要点。
确保指令、包装物标示和待包装产品三者之间的完全一致。
未经清场，不得包装不同批号、规格、品种的产品。
2、清场在本岗位必须得到强调。
3、湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在≤30%。
2.7工序七：
烧数据卡
2.7.1产品校准品赋值
用PCT工作校准品检测我公司的PCT试剂，使用10个浓度点工作校准品，每个浓度点重复检测3次，分别求出测定结果的均值，以浓度点为自变量，以测定结果均值为因变量求出线性回归方程，做曲线。
随机抽取的同一批号的不同浓度的PCT产品校准品各重复测定10次，分别计算每个浓度的平均值，即为该批PCT产品校准品的值。
测
量不确定度：
U=Uc（y）*K，包含因子K=2，置信水平约95%。
2.7.2产品校准品确认
用PCT工作校准品和PCT产品校准品同时定标我公司相同批号的PCT试剂后，分别测定30例血清样本，并计算
两组测定数值间的相关系数r及系统偏差，要求相关系数r应不低于0.975，且系统偏差应不超过15%
若满足以上要求，则该批PCT产品校准品的值确定；若无法满足，则需重复赋值过程，以确定该批PCT产品校
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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V1.0/00
受控状态：
受控
准品的值。
2.7.3产品校准品做曲线用产品校准品检测待检半成品试剂盒，每个浓度点分别在四台荧光仪上【信号测试】模块平行检测三次并点
击【EXCEL】即保存成EXCEL格式，将所得每个浓度12个检测卡的T/C数值汇总到一个EXCEL中并计算每个浓度点的T/C平均值；然后将每个浓度点的浓度值和T/C平均值复制到四台荧光仪中的任一个荧光仪软件【测试实验】模块中，根据需要在【拟合算法】中选择拟合方式并点击【拟合】即生成曲线。
2.7.4数据卡的生成
在【生成ID文件】模块中点击左下方【生成ID文件】；然后在【HEX查看】中点击【写ID】，此曲线即烧制到数据卡（ID卡）中。
2.7.5烧制工序
用SnartPRO智能通用编辑器烧数据卡，具体见相关SOP。
2.7.6质控项目和标准
项目
标准
线性范围
试剂的线性范围为（不小于0.990。
0.1-60）ng/mL，在此线性范围内，线性相关系数
r应
准确度
回收率在85%～115%之间。
2.8工序八：
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）试剂盒组装
2.8.1本试剂盒内容物由以下组分构成：
组分
25人份/盒
40人份/盒
试剂卡
1人份/袋25袋/盒
1人份/袋40袋/盒
样本稀释液
300μl/瓶25瓶/盒
300μl/瓶40瓶/盒
数据卡
1张
1张
说明书
1份
1份
1、避免混淆是本工序的要点。
确保指令、包装物标示和待包装产品三者之间的完全一致。
未经清场，不得包装不同批号、规格、品种的产品。
2、清场在本岗位必须得到强调。
2.8.2质控项目和标准
文件名称:
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
文件编号：
版本/修改状态：
V1.0/00
受控状态：
受控
项目
标准
物理
性状
外观
试剂卡外观平整，材料附着牢固；
样本稀释液为无色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
净含量
样本稀释液净含量应在标示值的90%～110%之间。
膜条宽度
膜条宽度应不小于3.9mm。
液体移行速度
液体移行速度应不低于25mm/min。
空白限
≤0.1ng/mL。
线性范围
试剂的线性范围为（0.1-60）ng/mL，在此线性范围内，线性相关系数r应不小于0.990。
准确度
回收率在85%～115%之间。
测量精密
度
重复性
用质控品重复测试，所得结果的变异系数（CV）≤15%。
批间差
用质控品重复测试3个批号的试剂盒，所得结果的变异系数（CV）≤15%。
稳定性
试剂在4℃～30℃密封避光保存，原包装存放的试剂有效期为12个月；取效期
末的样品检测外观、膜条宽度、液体移行速度、空白限、线性范围、重复性、准确度，应分别符合其要求。
3.质量控制点
工序
质量控制点
质量控制项
频次
生产过程
中间产品
1、样
称量
重量
性状
每批
加样
体积
外观
品垫制作
混合
装量、时间、转速
均匀度
喷探针
速度、喷量
均匀度
2、Ｎ
称量
重量
性状
每批
Ｃ膜制备
加样
体积
外观
混合
装量、时间、转速
均匀度
文件类型：
技术标准
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
文件编号：
版本/修改状态：
V1.0/00
受控状态：
受控
划线
速度
均匀度
3、样本稀释液制备
称量
重量
性状
每批
加样
体积
外观
贴签
品名、位置
端正、牢固、无皱褶
摆管
数量与装配数目核对
外观
分装
体积
外观、体积准确度
封盖
紧密度、外漏
紧密、无外漏物
标签打印
速度、位置
位正、字迹清晰，无错印、
漏印
贴签
品名、位置
端正、牢固、无皱褶
4、贴膜组装
贴膜
位置
端正、牢固
每批
5、切条
切条
速度、位置
宽度
每批
6、压卡装袋
压卡
速度、位置
过紧、过松
每批
封口
速度、位置
漏气
标签打印
速度、位置
位正、字迹清晰，无错印、
贴签
品名、位置
漏印端正、牢固、无皱褶
7、烧数据卡
标准曲线制作
精确、按照操作规程操作、需要复核
准确写入数据、复核无误
每批
8、试剂盒组装
装盒
速度、组分
组分齐全、无缺漏
每批
标签打印
速度、位置
位正、字迹清晰，无错印、
漏印
贴签
品名、位置
端正、牢固、无皱褶
4.生产过程物料平衡的计算方法、数据处理
4.1各工序分步收率本产品每个批次，每个关键工序生产结束都必须物料平衡，进行物料平衡是避免或及时发现差错与混淆的有效措施。
4.1.1NC膜物料平衡
NC膜物料平衡=实际反应膜制备量/理论反应膜制备量×100%
物料平衡限定范围95-100%。
注：
理论反应膜制备量=液体配制量/30μl（板）
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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版本/修改状态：
V1.0/00
受控状态：
受控
4.1.2样品垫物料平衡样品垫物料平衡率=实际样品垫量/理论样品垫量×100%物料平衡限定范围95-100%。
注：
理论样品垫量=液体配制量/120μl（板）
4.1.3稀释液物料平衡稀释液物料平衡=实际分装瓶量/理论分装瓶量×100%物料平衡限定范围95-100%。
注：
理论分装瓶量=稀释液总量/300μl
4.1.4数据卡物料平衡数据卡物料平衡=实际烧数据卡量/理论烧数据卡量×100%物料平衡限定范围95-100%
4.1.5包材物料平衡包材物料平衡=实际包材用量/理论包材用量×100%物料平衡限定范围95-100%
4.1.6成品物料平衡成品物料平衡=实际产量/理论产量×100%物料平衡限定范围95-105%。
4.2数据处理
4.2.1凡收率在合格范围内的，方可“流转”投入下一工序。
4.2.2凡收率高于或低于合格范围内，应立即贴“待验”标志，不能递交下工序，并由发现人填写偏差处理单，经质量管理部门按“生产过程偏差处理管理规程”进行调查，采取处理措施，直至调查确认不影响产品最终质量的情况下，方可放行。
5.包装要求、标签、说明书（附样本）与产品贮存方法及有效期
5.1包装规格：
25人份/盒、40人份/盒。
5.1.1铝箔袋规格：
1人份/袋。
5.1.2试剂盒装量
25T:
检测卡25袋，说明书1张、样本稀释液25人份、数据卡1张。
40T:
检测卡40袋，说明书1张、样本稀释液40人份、数据卡1张。
5.2包装材料、试剂盒及说明书要求（附样本）
5.3产品贮存方法及有效期
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降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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版本/修改状态：
V1.0/00
受控状态：
受控
产品的储存条件：
4-30℃，干燥，有效期：
12个月。
6.设备一览表
序号
设备名称
生产区域/岗位
规格型号
用途
备注
1
纯水机
制水间
CSR-2-500
纯化水
2
切条机
切条间
CM1010
切条
3
封口机
半成品包装间
900
半成品生产
4
三维平面点膜喷金仪
膜包被间
HM3030
包被NC膜
5
裁切机
贴膜间
CT300
生产辅助
6
多参数测试仪
配液间
S220
调节pH
7
电子分析天平
称量间
MS204S-01
称量
8
平板压壳机
半成品组装间
AR100
生产
9
除湿机组
空调机房
FLC-3000-6000
P
除湿
10
磁力搅拌器
配液间
MS-S
配液辅助
11
恒温干燥箱
？
？
样品垫处理
12
恒温干燥箱
？
？
样品垫制作
13
SnartPRO智能通用编辑器
成品组装间
5000U-Plus
烧卡
14
广州蓝勃生物科技有限公司手动干式荧光免疫分析仪
？
AFS-1000型
实验
15
广州蓝勃生物科技有限公司半自动干式荧光免疫分析仪
？
AFS2000A型
实验
文件类型：
技术标准
文件名称:
降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）工艺规程
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V1.0/00
受控状态：
受控
16
升级会员 