细菌检验的商品化自动化设备.docx

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细菌检验的商品化自动化设备

第十七章　细菌检验的商品化、自动化设备

本章考点：

（1）微量生化反应系统

（2）自动化装置

第一节　微量生化反应系统

　　一、常用的微量生化反应系统

　　根据细菌的不同生物学性状及其代谢产物的差异，可采用多种生化反应系统鉴定细菌，现已有商品化的成套产品，它多由10～24项生化指标组合而成，通过对结果的判定，得出一个3～7位的数据，查阅编码手册即可获得相应的细菌名称。

常用的微量生化反应系统有以下几种：

（一）Micro-ID系统

　　本系统主要用于肠杆菌科的细菌鉴定。

它是一块带有15个反应池的塑料板，每个反应池含有一种生化反应培养基及试剂。

（二）API系统（目前较常用的微量生化鉴定系统）

　　API系统为一块塑料板，上有20个小杯，每个小杯装有不同的生化反应培养基和指示剂。

API系统

鉴定范围

API-20E

肠杆菌科细菌

API-20NE

非肠杆菌科细菌

APIStaph

葡萄球菌属和微球菌属细菌

APIStrep

链球菌属细菌

APICoryne

棒状杆菌属细菌

API50CHB

芽胞杆菌属等革兰阳性杆菌

APINH

奈瑟菌属、布兰汉菌属和嗜血杆菌属细菌

APICanpy

弯曲菌和螺杆菌

API-20A

厌氧菌

　　（三）Minitek系统

　　该系统为带有l2个凹孔的塑料盘。

包括34种生化反应培养基及指示剂的滤纸片。

　　（四）肠杆菌-MBl2E系统

　　该系统为一块96个凹孔的塑料板，分8排。

可同时鉴定8份标本。

每孔含有一种干燥生化培养基，可提供12项生化反应。

　　（五）氧化发酵鉴定系统

　　该系统主要有氧化发酵管可应用于非发酵菌，也可用于气单胞菌等一部分发酵型细菌的鉴定。

　　二、自动化装置

（一）半自动微生物鉴定和药敏系统

　　1.VITEK—ATB（Automicrobic系统）

（1）原理：

将肉眼观察的结果输入电脑，结果与数据库内的细菌条目比较，自动得到鉴定结果。

ATB敏感试验采用半固体培养基，不同的药敏试条含有不同种类抗生素。

在24小时内通过观察有无细菌生长以判断药敏试验结果。

（2）操作方法：

挑取1至数个纯菌落制备为0.5麦氏单位菌悬液，接种试剂条，经35℃孵育18～24小时，观察结果。

　　2.MicroscanPanel使用测试板及快速接种系统，人工判读后将其结果输入电脑，得出结果。

（二）全自动微生物鉴定和药敏系统

　　1.VITEK系统：

该系统可鉴定各种细菌（包括厌氧菌）、酵母菌及细菌的药敏试验。

类型有Vitek-32及Vitek-60及VitekⅡ（有两种规格）。

　　仪器采用数码鉴定原理，每个鉴定卡有30项反应，每3个反应为一组，可得一组10位数的数码。

VitekⅡ采用快速荧光法测定细菌。

Vitek系统有高级专家系统，对药敏结果进行解释性判读。

　　2.MicroScan自动微生物分析系统：

该系统可鉴定各种细菌（包括厌氧菌）、酵母菌及细菌的药敏试验。

类型有WalkAway-40，WalkAway-96。

　　仪器应用传统呈色反应法，采用快速荧光法测定细菌。

药敏部分采用比浊法进行测定。

鉴定板有普通和快速两种，后者采用更为敏感的荧光底物，采用酶学方法分析。

第二节　血培养系统

　　一、半自动培养仪

　　BACTECA60系统专用于快检血液、脑脊液、胸水及其他正常无菌体液中的细菌。

将待测标本接种于含14C-底物的培养瓶中，活菌将利用14C-标记底物而产生14C02，测定气体量并换算成数值。

　　培养瓶种类有需氧培养瓶、厌氧培养瓶、L型菌培养瓶、结核菌药敏瓶等。

缺点是放射性废弃物的处理较为困难。

　　二、全自动血培养仪

　　全自动血培养仪软件功能全，操作简便，具有数据连网共享功能。

培养瓶放入仪器后即开始连续孵育、轻度震荡培养和自动检测的全自动过程。

　　1.BACTEC9000系列：

包括9240型（240瓶）、9120型（120瓶）和9050型（50瓶）三种。

　　BACTEC9000系列利用荧光探测技术（荧光增强法）：

全自动连续检测培养瓶内微生物代谢引起的CO2浓度变化，而CO2浓度的改变可直接激活培养瓶底部包埋的对CO2浓度变化高度敏感的荧光物质，在二极管的激发下荧光物质释放荧光，荧光强度变化可直接反应培养瓶内CO2浓度变化。

以判定是否有微生物生长繁殖，仪器每十分钟自动进行质控校正，由电脑分析判断细菌培养阴阳性，阳性者发出警报。

培养瓶有标准及含树脂（有吸附抗生素作用）的需氧、厌氧瓶、儿童瓶，有真菌培养瓶、分枝杆菌培养瓶。

　　2.BacT／Alert系统：

该系统为一种全自动微生物培养和监测系统，有120瓶和240瓶两种规格。

培养瓶种类有需氧培养瓶、厌氧培养瓶、小儿培养瓶和抗生素中和瓶等。

　　培养瓶底部有特殊的NovelC02感应器，有半渗透性薄膜，将培养基与感应器隔离，只有C02能通过薄膜。

当有微生物生长释出C02可渗透至感应器，pH改变使其颜色也改变。

仪器每十分种自动检测一次，由电脑分析判断阴阳性。

阳性者发出警报。

　　3.VITAL:

有VITAL和mini—VITAL两种规格。

培养瓶有需氧和厌氧培养瓶等。

仪器采用荧光法（荧光递减）全自动检测，每隔l5分钟读取每一瓶的荧光读数。

自动处理数据，当荧光的光度与对应时间的曲线出现明显倾斜时，检出阳性血培养瓶。

　　本章练习题：

　　A.Micro-ID系统

　　B.API系统

　　C.Minitek系统

　　D.肠杆菌-MB12E系统

　　E.Automicrobic系统（AMS）

　　那一项不属于细菌检验微量生化反应系统

　　[答疑编号500735170101]

　　『正确答案』E

　　既可鉴定肠道杆菌又能鉴定厌氧菌的有

　　[答疑编号500735170102]

　　『正确答案』B

第十八章　病原性球菌及检验

本章考点：

（掌握，熟练掌握）

（1）概念

（2）生物学性状

　　（3）微生物学检查方法与原理

　　（4）临床意义（致病性、所致疾病）

　　普及共性，单记个性

　　生物学性状

　　形态与结构：

革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。

　　培养特性：

对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。

　　生化反应：

特殊生化。

　　抗原：

　　分类：

　　致病性

　　致病物质

　　所致疾病

　　微生物学检查：

针对生物学性状和致病性

　　一、葡萄球菌属

（一）概念

　　一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。

（二）生物学特性

　　1.形态与结构：

本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5／μm，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。

无鞭毛和芽胞，有些细菌能形成荚膜。

　　2.培养特性：

需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。

最适pH为7.4，最适温度为35℃～37℃。

　　在普通琼脂平板上经35℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。

可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。

　　在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。

对人致病的主要是α溶血素。

　　在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。

　　3.生化反应：

触酶试验（+），对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。

多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。

　　4.抗原：

葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。

（1）蛋白抗原：

为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。

存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。

（2）多糖抗原：

是半抗原，具有型特异性，有三种：

①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。

　　5.分类

　　6.抵抗力：

对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。

　　（三）致病性及临床意义

　　葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。

金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。

　　1）金黄葡萄球菌

　　2）表皮葡萄球菌是存在于皮肤的正常栖居菌，为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。

　　3）腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。

　　（四）微生物学检验方法与原理

　　1.标本采集：

根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。

（不同疾病采集不同标本）

　　2.检验方法及鉴定

（1）直接镜检：

无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为：

“找到革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”。

（2）分离培养：

血液标本（静脉血约5ml）注入50ml葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，迅速摇匀，以防凝固，置35℃，一般于24h后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于48～72h后自行观察（一般以7天为限），并接种血琼脂，以确定有无细菌生长。

血液标本也可注入商品血培养瓶培养。

　　脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物，通常可直接接种血琼脂。

35℃18～24h培养，可见直径2～3mm，产生不同色素的菌落。

金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。

　　尿液标本，必要时作细菌菌落计数。

　　粪便、呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

　　（3）鉴定试验

　　金黄色葡萄球菌

　　表皮葡萄球菌

　　腐生葡萄球菌

　　触酶

　　+

　　+

　　+

　　血浆凝固酶

　　+

　　-

　　-

　　甘露醇发酵试验

　　+

　　-

　　-

　　新生霉素敏感试验

　　S

　　S

　　R

　　报告：

检出“XXX葡萄球菌”

　　（4）耐药性检测：

检测耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。

NCCLS／CLSI推荐用头孢西丁纸片法检测对苯唑西林耐药的葡萄球菌。

　　二、链球菌属

（一）概念

　　链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。

（二）生物学特性

　　1.形态与染色：

革兰染色阳性。

菌体呈圆形，直径为0.8～1.0μm，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。

在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。

无鞭毛、无芽胞、某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。

　　2.培养特性：

本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。

营养要求较高，在含有腹水的培养基上生长良好。

最适温度为35℃～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5%C02环境下生长更好。

在血琼脂平板上，经35℃18～24h培养后可形成灰白色、圆形、

　　凸起、直径为0.1～0.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。

　　3.生化反应：

本属细菌触酶试验阴性（与葡萄球菌属鉴别）

　　4.分类

（1）根据溶血能力分类：

利用链球菌在血平板上溶血情况分为三类，

　　1）甲型（α）溶血性链球菌：

又称草绿色链球菌。

本菌为条件致病菌。

　　2）乙型（β）溶