FDA沙门氏菌检验.docx

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FDA沙门氏菌检验

FDA沙门氏菌检验标准中文版

（一）

U.S.DepartmentofHealthandHumanServices

U.S.Food&DrugAdministration

CenterforFoodSafety&AppliedNutrition

BacteriologicalAnalyticalManual

April2003

沙门氏菌检测

FDA分析手册（2003年3月）

第5章

章节内容

1、简介

2、设备和材料

3、培养基和试剂

4、样品的制备

5、沙门氏菌的分离培养

6、沙门氏菌的鉴定

7、快速检测方法（附录1）

8、参考文献

简介

在第8版的BAM手册中，沙门氏菌的检测方法有了几个改变。

第一个改变是RV培养基的广泛使用，即可用于检测含沙门氏菌量高的食品，又可于检测含沙门氏菌量低的食品，以前的版本中，RV培养基仅用于虾类的检测。

依据AOAC反复研究的结果，RV培养基即可用于检测含沙门氏菌量高的食品，又可于检测含沙门氏菌量低的食品。

除口香糖外的所有食品，RV培养基替代了SC培养基。

此外，RV培养基取代了必须含有活性干酵母的LST肉汤培养基。

TTB肉汤继续用于第二种选择性增菌培养基，包括口香糖在内的食品，在检测含菌量高的食品时需进行43℃培养；在检测含菌量低的食品时需进行35℃培养。

第二个改变是对于冷藏食品前增菌和低水份食品选择性增菌培养的时间为72小时以内，这样，样品检测的时间最迟星期三或星期四可以开始，周末也不用加班。

第三个改变是缩短了在LIA斜面上的培养时间，在以前的版本（BAM-7）中，TSI和LIA斜面在35℃培养的时间分别为24±2h和48±2h。

未公布的一些资料表明，48小时后观察LIA斜面结果是没有任何诊断价值。

对193个LIA斜面进行试验，培养24±2h后，所有的斜面都给出了正确的结果。

再培养24h后，试验的结果没有什么重大的改变。

所以，TSI和LIA斜面培养基现在改为培养24±2h。

第四个改变是蛋壳表面灭菌步骤的改变。

在以前的版本（BAM-7）中，蛋壳表面灭菌的方法是在0.1%的HgCl2溶液中浸泡1h，然后在70%的乙醇溶液中浸泡30分钟。

HgCl2对人体是有害的，依据环境保护组织的要求进行处理，费用是非常昂贵的。

在新版的手册（BAM-7）中，蛋壳表面的消毒只需通过浸泡在含0.1%SDS的次氯酸钠溶液（含Cl-200PPM）中30分钟。

第五个改变是蛋类样品的制备。

在检测前，蛋的内容物（蛋黄和蛋白）需进行完全混匀。

之后，取25ml加入含硫酸铁的胰酪胨大豆肉汤中。

本版中，制定了口香糖的检测方法。

口香糖样品和增菌肉汤以1：

9的比例进行混合，得到的混合物非常粘，不易被吸管吸出。

另外添加纤维素酶时，容易被吸管吸出。

由于最近桔子汁相关事件的发生，其检验方法也己制定出，被检的桔子汁包括经巴氏消毒和未经巴氏消毒的。

从选择性平板上挑菌落说明更明白和科学。

如果在选择性平板上没有可疑的典型菌落，建议挑取几个非典型菌落接种到TSI和LIA培养基上。

由于在过去的几年里，FDA的科学家们从一些食品中，特别是从海产品中分离出沙门氏菌，其中4%左右在选择性平板是非典型菌落。

最后，自成BAM-7发行以来，已经制定出6种培养基的使用说明。

包括3种选择性培养基（BS琼脂、HE琼脂和XLD琼脂）和3种比较新的培养基（EF-18、XLT、Rambach琼脂）。

我们的实验结果证实，用一种或几种新的培养基来取代BAM中推荐的培养基是不理想的。

因些，我们一直保留下来。

A、设备和材料

1、搅拌器和无菌搅拌杯

2、无菌500ML广口螺口三角瓶、无菌500ML长颈三角瓶、无菌250ML烧杯、无菌玻璃漏斗、无菌采样器

3、无菌玻璃涂布捧或塑料涂布捧

4、电子天平，精度0.1g，最大量称2000g

5、电子天平，精度5mg，最大量称120g

6、培养箱：

35±2℃

7、冰箱：

4±2℃

8、水浴箱：

49±1℃

9、循环的、温度可调的水浴箱：

43±0.2℃

10、循环的、温度可调的水浴箱：

42±0.2℃

11、无菌药匙或其它合适的工具：

用于称样品

12、无菌培养皿：

15X100MM，玻璃或一次性的

13、1ml无菌吸管,刻度0.01ml、5ml和10ml无菌吸管,刻度0.1ml

14、接种针和接种环

15、无菌试验试管或培养试管：

16X150MM和20X150MM

血清学鉴定管：

10X75MM或13X100MM

16、试管架

17、旋转混合器

18、无菌剪刀、大剪刀、解剖刀及镊子

19、灯：

用于观察生化反应

20、电炉

21、PH试纸：

PH值6-8，最大变色范围在0.4PH单位

22、PH计

23、28X37CM的无菌塑料袋，易拉口（在第23-24节中，检测蛙腿和兔体时用）

24、塑料烧杯：

能耐高温高压，用于振荡培养过程中，固定塑料袋

B、培养基和试剂

1、乳糖肉汤（M74）

2、脱脂奶粉（M111）

3、SC肉汤（M134）

4、TTB肉汤（M145）

5、RV培养基（M132）

6、XLD琼脂（M179）

7、HE琼脂（M61）

8、BS琼脂（M19）

9、TSI琼脂（M149）

10、色氨酸肉汤（M164）

11、胰酪胨大豆肉汤（M154）

12、含硫酸铁的胰酪胨大豆肉汤（M186）

13、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（M76）

14、胰酪胨示胨大豆肉汤（M160）

15、MR-VP肉汤（M104）

16、西蒙氏枸橼酸盐培养基M138

17、尿素肉汤（M171）

18、尿素肉汤（快速）（M172）

19、丙二酸钠培养基（M92）

20、LIA培养基（M89）

21、赖氨酸脱羧酶肉汤（M87）

22、动力培养基（M103）

23、KCN培养基（M126）

24、苯酚红糖类发酵肉汤（M121）

25、紫色糖类发酵肉汤（M130）

26、麦康凯琼脂（M91）

27、营养肉汤（M114）

28、BHI肉汤（M24）

29、5%木瓜蛋白酶溶液（M56a）

30、1%纤维素酶溶液（M187）

31、月示胨羊血琼脂基础（M166）

32、通用前增菌肉汤（UPM,M188）

33、无水亚硫酸钾粉末

34、200ppm次氯酸钠溶液，含0.1%SDS（R12a）

35、70%乙醇溶液（R23）

36、靛基质试剂（R38）

37、V-P试剂（R89）

38、肌酸晶体

39、40%KOH溶液（R65）

40、1NNaOH溶液（R73）

41、1NHCl溶液（R36）

42、1%煌绿溶液（R8）

43、溴甲酚紫溶液,0.2%（R9）

44、甲基红指示剂（R44）

45、无菌蒸馏水

46、Tergitol-7（R78）

47、TritonX-100（R86）

48、0.85%生理盐水（R63）

49、适当浓度的生理盐水（R27）

50、沙门氏菌多价O血清

51、沙门氏菌多价H血清

52、沙门氏菌多价O群血清：

A、B、C1、C2、C3、D1、D2、E1、E2、E3、E4、F、G、H、I、Vi和其它相应血清

53、沙门氏菌Spicer-EdwardsH血清

C、样品制备

以下的方法均以25g样品作为抽检单位，样品与肉汤培养液的比例为1:

9。

根据样品的组成成份不同，添加足够的肉汤培养基保持1:

9的比例，除非特殊说明，例如，蛙腿等不需准确称量检测的样品，需采用特殊的方法。

1、干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液体牛奶（脱脂牛奶、含2%脂肪牛奶、全牛奶和脱脂奶粉），粉状调制食品（蛋糕、甜饼、炸面圈、饼干和面包）、婴儿食品、口食或软管进食的含蛋食品。

检验前的冷冻食品最好不要解冻。

如果冷冻样品必须软化来获得待检部分，尽可能

缩短解冻的时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤。

解冻需在45℃以下进行，置于能自动控温的水浴锅内，不断搅拌15分钟或在2-5℃解冻18小时。

无菌称取25克样品，放入无菌带螺旋帽的广口瓶中（500ML）或其它合适的容器内。

对于非粉末状的样品，加入225ml无菌的乳糖肉汤；对于粉末状的样品，先加入约15ml无菌的乳糖肉汤，用无菌的玻璃捧、药匙或舌状器具搅拌，使其均匀悬浮，再加入3份无菌乳糖肉汤，分别为10ml、10ml和190ml,使总量为225ml。

充分搅拌，直到样品完全悬浮，没有块状物。

小心地盖紧瓶盖，室温静置60±5min。

振荡混匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

把瓶盖松开约1/4圈，置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

2、蛋类

a、含壳蛋。

用硬刷子洗蛋并使其干燥，然后浸泡于含0.1%SDS的200ppm氯离子溶液中30分钟。

此溶液的配制如下：

取8ml5.25%的次氯酸钠溶液和1gSDS加入992ml蒸馏水中溶解即可。

这种消毒液需在使用前配制。

无菌打开蛋壳置于无菌的容器内，用无菌的药匙或其它工具混合蛋清和蛋黄。

无菌称取25g于无菌的三角瓶中或其它合适的容器内，加入225ml含硫酸铁的TSB肉汤（1LTSB中加入35mg硫酸铁），混匀，室温静置60±5min。

振荡混匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

b、液全蛋（均匀状）。

无菌称取25g于无菌的三角瓶或其他适宜的容器内，加入225ml含硫酸铁的TSB充分摇匀，按上面的方法继续。

c、煮硬的蛋（鸡蛋、鸭蛋或其他种类的蛋）。

如果蛋壳完整，向上述方法进行消毒，无菌分离蛋壳，弄碎蛋黄和蛋白，称取25g与无菌的500ml的锥形瓶中或其他的容器内，加入225mlTSB，并且摇匀，按上述方法继续。

3、脱脂干奶粉

a、速溶型。

无菌称取25g样品于无菌的烧杯或其他适宜的容器内，用灭菌的玻璃或纸质的漏斗（用带卷好以便高压灭菌）将样液25ml慢慢注入灭菌的500ml的含225ml的煌绿水的锥形瓶中或其他适宜的容器内，使样液覆盖在煌绿水的表面，也可多个25g检测单位混合倒入含有相应比例煌绿水的容器内，使样品覆盖在煌绿水的表面，按每1000ml灭菌蒸馏水中加入2ml2%的煌绿溶液进行配制，将样品容器室温静置60±5min，旋松塞子，不需混匀和调整PH，35℃培养24±2h，按D1-11继续。

b、非速溶。

按上述速溶脱脂干奶粉的检测方法进行，但不允许将多个25g样品检测单位混合。

4、全脂奶粉。

按上述速溶脱脂干奶粉的检测方法进行，但不允许将多个25g样品检测单位混合。

5、酪蛋白

a、乳酪。

无菌称取25g样品于无菌的250ml烧杯或其他适宜的容器内，用灭菌的玻璃或纸质的漏斗（用带卷好以便高压灭菌）将样液25ml慢慢注入灭菌的500ml的含225ml的普通肉汤的锥形瓶中或其他适宜的容器内，使其覆盖在普通肉汤的表面，也可多个25g检测单位混合倒入含有相应比例普通肉汤的容器内，使样品覆盖在普通肉汤的表面，将样品容器室温静置60±5min，旋松塞子，不需混匀和调整PH，35℃培养24±2h，按D1-11继续。

b、凝乳酪。

无菌称取25g样品于无菌的250ml烧杯或其他适宜的容器内，用灭菌的玻璃或纸质的漏斗（用带卷好以便高压灭菌）将样液25ml慢慢注入灭菌的500ml的含225ml的乳糖肉汤的锥形瓶中或其他适宜的容器内，使其覆盖在乳糖肉汤的表面，也可多个25g检测单位混合倒入含有相应比例乳糖肉汤的容器内，使样品覆盖在乳糖肉汤的表面，将样品容器室温静置60±5min，旋松塞子，不需混匀和调整PH，35℃培养24±2h，按D1-11继续。

c、咸乳酪。

无菌称取25g样品于无菌的带螺旋帽的广口瓶中或其他合适的容器内，添加225ml无菌的乳糖肉汤并且混匀，多个25g样品检测单位可以混合，旋紧瓶塞，室温下静置60±5min，然后摇匀，用PH试纸检测PH，如果必要调PH值至6.8±0.2。

把瓶盖松开约1/4圈，置于35℃培养24±2h。

以下试验接D,1-11进行。

6、豆粉。

按上述凝乳酪和咸乳酪的方法进行检测，但多个25g样品不能混合。

7、含蛋制品（面条、蛋卷、空心粉、意大利面条）、干酪、面团、调制色拉（火腿、蛋、鸡肉、金枪鱼、火鸡）、新鲜的、冷冻的或干的水果和蔬菜、果仁和甲壳类动物（小虾、蟹、小龙虾、大虾、大龙虾）和鱼。

检测前最好不要解冻，如检测样品必须解冻，需在45℃以下进行，置于能自动控温的水浴锅内，不断搅拌15分钟或在2-5℃解冻18小时。

无菌称取25克样品，放入无菌的均质器内。

加入225ml无菌的乳糖肉汤均质2

分钟。

再无菌转移均质混合物于无菌的广口的带有旋螺帽的锥型瓶或其它合适的容器中，盖紧瓶盖，室温静置60±5min。

振荡混匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

8、干酵母（活性和无活性酵母）

无菌称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500ml）或其它合适的容器内，加入225ml灭菌的胰酪胨大豆肉汤，充分混匀形成悬液，盖紧瓶塞，室温下静置60min。

摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

9、冷冻和高级混合食品

无菌称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500ml）或其它合适的容器内，加入225ml灭菌的营养肉汤，充分混匀形成悬液，盖紧瓶塞，室温下静置60min。

摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

10、调料

a、黑胡椒、白胡椒、芹菜种子或芹菜叶片、干辣椒粉、红辣椒、茴香、皱叶欧芹片、迷迭香、芝麻、百里香和蔬菜片。

无菌称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500ml）或其它合适的容器内，加入225ml灭菌的TSB肉汤，充分混匀形成悬液，盖紧瓶塞，室温下静置60min。

摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

b、洋葱片、洋葱粉和大蒜片。

无菌称取25g样品于灭菌的带螺旋帽的广口瓶或其它合适的容器内，样品的前增菌培养基用含K2SO4的TSB肉汤（1000mlTSB肉汤中加入5gK2SO4，最终浓度为0.5%），将K2SO4加入TSB肉汤中，分装每瓶225ml，121℃高压灭菌15min，灭菌后，无菌测定其容量。

如果必须，调整容量至225ml，将225ml含有K2SO4的TSB加入样品中混匀，以下按C-10a进行。

c、多香果粉、肉桂、丁香及薄荷调味料

目前还没有方法可以中和这4种调料的毒性。

将它们稀释至无毒的程度后，再进行检测。

检测多香果粉、肉桂和薄荷时，样品与肉汤的比例为1:

100，而丁香与肉汤的比例为1:

1000；检验叶状调味品时，由于是脱水产品，可吸收部分肉汤，在实际检测中样品与肉汤的比例大于1:

10，检测这些调味品时，按以上C-10a进行，保持推荐的样品与肉汤的比例。

11、密饯和糖衣（包括巧克力）

无菌操作称取25g样品于灭菌的搅拌器内，加入225ml重溶的脱脂奶粉，搅拌2分钟，再无菌操作移取样品液到灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500ml）或其它合适的容器内，盖紧瓶塞，室温下静置60±5min。

摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

加入0.45ml1%亮绿水溶液，混匀，把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

12、椰子

无菌操作称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500ml）或其它合适的容器内，盖紧瓶塞，室温下静置60±5min。

摇匀的搅拌器内，加入225ml乳糖肉汤，搅拌2分钟，再无菌操作移取样品液到，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1NNaOH或1NHCl调PH值至6.8±0.2。

加入2.25ml已蒸过的Tergitol-7溶液，混匀。

也可用已蒸过的Triton-100。

这些表面活性剂要使用最少的量，刚好产生气泡。

Triton-100滴上2-3小滴即可。

把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,1-11进行。

13、食品染料和食品色素

PH值6.0或以上的染料（10%的水悬浮液），按上述干全蛋方法（以上C-1法）进行检测。

沉淀染料或PH值低于6.0的染料，无菌操作称取25g样品，放入灭菌的带螺旋帽的500ml广口瓶内，加入225ml不含煌绿的TTB肉汤混匀，盖紧瓶塞，室温下静止60±5min。

用PH计调整PH值至6.8±0.2，加入2.25ml1%的煌绿溶液，摇匀，把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。

以下试验按D,3-11进行。

14、明胶

无菌操作称取25g样品，放入灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他合适的容器内。

加入225mL灭菌的乳糖肉汤和5mL5%明胶酶水溶液。

混合均匀，盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。

转动混匀，用试纸测定pH值。

必要时调节pH值至6.8±0.2。

将瓶盖旋松1/4转，置35℃培养24±2小时。

以下试验按D,1-11进行。

15、肉、肉代用品、肉副产品、动物产品、腺体制品和粗粉（鱼，肉，骨）

无菌操作称取25g样品放入灭菌的搅拌器中。

加入225mL灭菌的乳糖肉汤，搅拌2分钟。

再无菌操作转移已搅拌的混合物到灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他合适的容器内。

盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。

如果混合物为粉状，研磨过或已粉碎的，则不用搅拌。

不需要搅拌的样品，加入乳糖肉汤，并充分混匀；盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。

旋动使充分混匀，用试纸测定pH值。

必要时调节pH值至6.8±0.2。

总计加入2.25mL已蒸过（15分钟）的Tergitol-7，混匀。

也可用已蒸过（15分钟）的Triton-100来代替。

控制使用这些表面活性剂剂量，刚刚起泡沫即可。

实际用量取决于试验材料的成分；分析粉状腺体制品，不需要用表面活性剂。

将瓶盖旋松1/4转后，将样品混合物置35℃培养24±2小时。

以下试验按D,1-11进行。

16、田鸡腿（此方法用于国内的和国外的所有田鸡腿检验）

将15对田鸡腿放入灭菌塑料袋内，并用灭菌乳糖肉汤浸没，其比例样品比乳糖肉汤为1:

9（见以上A，23-24）。

如果单个腿估计平均重在25g或以上，则只需检查15对的每对中的一条腿。

把袋放入大塑料烧杯内或其它合适的容器中，在机械荡器上震荡15min，以4cm（1-1/2in）机械振荡100次/分钟。

从袋中倾倒出乳糖肉汤于另一个灭菌塑料袋内。

加更多的乳糖肉汤，使总量为3500mL。

充分混匀，于室温下静置60分钟。

必要时调节pH值至6.8±0.2。

再把装有乳糖肉汤的塑料袋放入塑料烧杯或其它合适的容器内，于35℃培养24±2小时。

接下去按下面的D，1-11进行。

17、野兔骨架（此方法用于国内的和国外的所有的野兔骨架）

取3只野兔骨架放入灭菌塑料袋内，并用灭菌乳糖肉汤浸没，其比例：

样品比乳糖肉汤为1:

9（见上述A，23-24），把袋放入大塑料烧杯内或其它合适的容器中，在机械震荡器上以4cm（1-1/2in）幅度振荡100次/分钟，震荡15min。

从袋中倾倒出乳糖肉汤混合物于另一个灭菌塑料袋内，加更多的乳糖肉汤，使总量为3500mL。

充分混匀，于室温静置60分钟。

必要时用pH试纸调置6.8±0.2，于35℃培养24±2小时。

接下去按下面D，1-11进行。

18、口香糖

无菌操作称取25g样品到灭菌烧杯（250mL）或其他合适容器中。

制备过滤除菌的1.0%纤维素酶溶液（加1g纤维素酶到99mL无菌水中），用0.45um膜过滤除菌，置于150mL瓶中。

（纤维素酶溶液在2-5℃可保存最长2周时间）。

加入225mL无菌乳糖肉汤和2.25mL无菌1%纤维素酶溶液于500mL无菌带螺旋盖的广口瓶或其他合适容器。

用磁力搅拌器剧烈搅拌酶/肉汤混合物时，通过无菌玻璃漏斗迅速倒入25g待检样品。

旋好瓶盖，室温下静置60分钟，无须调pH值。

旋松瓶盖，35℃培养24±2小时。

以下按D，1-11进行。

19、桔子汁、苹果汁（经巴氏消毒或未经巴氏消毒）和果酒（经巴氏消毒）

无菌称取25ml样品加入到含有225mlUPB肉汤中，放入灭菌的带螺旋帽的500ml广口瓶内或其它合适的容器内，盖紧瓶塞，充分摇匀，室温下静止60±5min。

不用调PH值，旋松瓶盖，35℃培养24±2小时。

以下按D，1-11进行（按低含量微生物进行处理）。

20、猪耳和狗颚类

从每个样品中挑出一片（尺寸小的可挑2-3片）置于无菌的塑料袋中，将塑料袋置于大烧杯中或其它合适的容器内，按1:

9的比例（g/L）（见以上A，23-24）加入无菌的乳糖肉汤，浸没样品。

盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。

旋动使充分混匀，用试纸测定pH值。

必要时调节pH值至6.8±0.2。

加入0-1%已蒸过（15分钟）的Tergitol-7或已蒸过（15分钟）的Triton-100来代替。

控制使用这些表面活性剂剂量，刚刚起泡沫即可。

例如，225ml乳糖肉汤加入最大体积为2.25ml。

将样品混合物置35℃培养24±2小时。

接下来的试验按D,1-11进行。

D、沙门氏菌的分离培养

1、拧紧瓶盖并轻轻振荡培养过的样品混合物。

口香糖：

吸取1ml样品液到10ml的SC肉汤中，另取1ml样品液到10mlTTB肉汤中，混匀。

所有其它食品：

吸取0.1ml样品液到10ml的RV培养基中，另取0.1ml样品液到10mlTTB肉汤中，混匀。

2、选择性增菌按如下步骤进行：

含菌量高的食品：

RV培养基在42±0.2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。

TTB肉汤在43±0.2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。

含菌量低的食品（口香糖除外）：

RV培养基在42±0.2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。

TTB肉汤在35±2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。

口香糖：

SC和TTB肉汤在35℃培养24±2小时。

3、混合均匀（如果是试管，涡旋式混合），用3mm直径的接种环，满环（10μl）划线接种TTB肉汤于亚硫酸铋（BS）琼脂，XLD琼脂和HE琼脂平板上。

BS琼脂平板于划线接种的前一天制备好储存在室温暗处。

4、再用3mm直径的接种环，从RV培养基（样品为含菌量高的食品和菌量高的食品）和SC肉汤（样品为口香糖）取满环（10μl），划线接种于上述平板上。

5、参考官方检测方法994.04，对于冷藏食品的前增菌和低水份食品的选择性增菌（仅SC和TTB肉汤）方法。

这样样品的检测最迟可从星期四开始，周末不用加班工作。

6、把选择性平板置35℃培养24±2小时。

7、检查平板中可疑沙门氏菌菌落的存在。

FDA沙门氏菌检验标准中文版

（二）

典型的沙门氏菌菌落形态：

从每个经过24±2小时培养后选择性平板上挑取2个或更多个菌落。

典型的

沙门氏菌菌落如下：

a、在HEKTOEN氏肠道菌（HE）琼脂上。

菌落呈兰绿至兰色，带或不带黑色中心。

许多沙门氏菌培养物可呈现大的光泽黑色中心或几乎全部黑色的菌落。

b、在木糖赖氨酸去氧胆酸盐（XLD）琼脂上.粉色菌落，带或不带黑色中心。

许多沙门氏菌培养物可有大的光泽黑色中心或呈几乎全部黑色的菌落。

c、亚硫酸铋（BS）琼脂上。

呈褐色，灰色或黑色，有时带有金属