消毒剂消毒效果验证.docx

消毒剂消毒效果验证.docx

《消毒剂消毒效果验证.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《消毒剂消毒效果验证.docx（21页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

消毒剂消毒效果验证

消毒剂消毒效果再验证方案目录

1.概述

2.验证目的

3.验证内容

4.验证组织

5.验证实施步骤

6.验证的主要依据

7．验证合格标准

8．再验证周期

9．附录

9．1验证方案会审记录

9．2漏项和偏差处理记录

9．3验证方案修改申请及批准书

1．概述：

药品卫生是药品质量的重要指标，为保证药品质量，保证用药患者身体健康，必须控制药品中微生物的污染。

因此在生产过程中，对生产环境的控制不仅是对生产区内空气洁净度的控制，对设备、地漏、墙壁等表面清洁程度的控制也是非常重要的。

另外，我公司产品为微生态活菌制剂，活菌数数量巨大，为防止交叉污染，需使用消毒剂对生产环境内不接触物料设备、地漏、墙壁等地方进行有效的消毒，并且要保证我们使用的消毒液能够对控制菌和目的菌起到强抑制作用。

为了确保消毒剂能达到预期的消毒效果，必须对消毒剂的消毒浓度进行验证。

我公司目前所用的消毒剂有新洁尔灭和碘伏，为了确认用此消毒剂消毒后生产环境内物体表面不残留控制菌和目的菌，进行此次再验证。

验证方法为采用将一定直径的滤纸片放入不同浓度、不同种类的消毒液中润湿，然后将滤纸片贴于已接种有七种控制菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、志贺氏菌、梭菌、白色念珠菌）、四种目的菌（长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌）的平板上，通过抑菌环的大小，确认现行消毒剂浓度能够完全抑制七种控制菌、四种目的菌的生长，达到预期的消毒效果，起到对生产环境内物体表面微生物的控制作用，从而达到避免污染或交叉污染的目的。

2．验证目的：

再次对新洁尔灭和碘伏两种消毒剂的消毒浓度进行验证，确认目前所用消毒剂的浓度在使用后能达到预期的消毒效果。

3.验证内容：

我公司目前所用的消毒剂有新洁尔灭和碘伏，为了确认我公司目前所用消毒剂的浓度能够确保清洁后能达到预期的消毒效果，保证用此消毒剂消毒后生产环境内物体表面不残留控制菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、志贺氏菌、梭菌、白色念珠菌）和目的菌（长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌），对这两种消毒剂的消毒效果进行验证。

将圆形滤纸片放入不同种类、不同浓度的消毒剂中润湿，然后将滤纸片分别贴于已接种有七种控制菌、四种目的菌的平板上，根据相应条件培养后，测量抑菌环的大小，从而确认我们生产环境消毒用消毒剂的浓度可以起到良好的消毒效果。

4.验证组织：

4.1　验证小组：

部门

职务

职责

组长

质检部

部门主管

负责组织对样品的检验。

组员

质检部

质检员

负责起草验证方案和验证报告；负责样品的检验；

负责检验数据的收集和整理

设备部

部门经理

负责仪器、仪表、量具的校正。

4.2　验证委员会：

4.2.1人员组成：

由企业质量副总、生产副总以及来自生产部、质量部、设备部的部门经理和主管组成。

4.2.2职责：

4.2.2.1负责验证方案的审批。

4.2.2.2负责验证的总体计划与协调，以确保验证方案的顺利实施，并为验证提供足够的资源。

4.2.2.3负责验证数据及结果的审核。

4.2.2.4负责验证报告的审批。

4.2.2.5负责确定该项验证的再验证周期。

4.2.2.6验证证书的发放。

5.验证实施步骤：

5.1滤纸打成圆形纸片Φ=5.0mm。

5.2放入平皿中（下垫2～4层纱布），包扎后121℃，20min灭菌后烘干备用。

5.3将滤纸片放入不同种类、不同浓度消毒剂中，备用。

5.4控制菌实验准备：

5.4.1将七种控制菌标准菌株（购于中国药品生物制品检定所）金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、志贺氏菌、梭菌、白色念珠菌接种于营养琼脂斜面上35℃培养24～48hr。

5.4.2在每个培养皿中倒入20-25ml营养琼脂，冷却后倒置培养24hr，无杂菌生长时备用。

5.4.3用血球计数板进行计数，根据血球计数板每小格内的活菌数，用0.9%生理盐水调整血球计数板计数的稀释级，保证其每小格内的活菌数在5-10个之间。

制成每毫升含菌10～100CFU的菌悬液，备用。

（血球计数板是一种在特定平面上划有格子的特殊载片。

在划有格子的区域中，有分别用双线和单线分割而成的方格。

其中有以双线为界划成的25中格（或16中格），这种以双线为界的格子称中格，其内有以单线为界的16小格（或25小格）。

因此，用于计数区域的总小格数为：

25×16=400。

（此验证取以双线为界化成25中格，其内有以单线为界的16小格）。

400个小格排成一正方形的大方格，此大方格的每条边的边长为1mm，故400个小格的总面积为1mm2在进行计数前，先取盖玻片于计数方格之上，盖玻片的下平面与刻有方格的血球计数板平面之间留有0.1mm高度的空隙。

含有细菌的供测样液被加注在此空隙中。

加注在400个小格（1mm2）之上的盖玻片之间的空隙中的液体总体积应为：

1.0mm×1.0mm×0.1mm=0.1mm3

一般表示样品细菌浓度的单位为：

亿个/ml。

因此，在计数后，获得在400个小格中的活菌总数，再乘以104，以换算成每mL所含菌数。

其公式如下：

菌液的含菌数/ml=每小格平均菌数×400×104×稀释倍数。

在进行具体操作时，一般取五个中格进行计数，取格的方法一般有两种：

1）.取计数板斜角线相连的5个中格；

2）.取计数板四个角上的四个中格和计数板正中央的一个总格。

对横跨位于方格边上的菌落，在计数时，只计一个方格4条边的2条边线上的菌落，而另两条边线上的菌落则不计；取边的原则是每个方格均取上边线与右边线或下边线与左边线。

5.4.4刮取斜面上菌苔转种于装有50ml营养肉汤的三角瓶中，35℃培养18hr后，用血球计数板检测培养液中目的菌的活菌数。

将培养液5ml加入到5ml0.9%生理盐水中，振荡器振2-3分钟，取一滴滴加到血球计数板上，加盖玻片静置5分钟，在显微镜下选取左上、左下、右上、右下、中间五个中格计数，求和。

一个样品检测三次后算出平均值。

培养液的含菌数/ml=（平均值/80）×400×104×稀释倍数

5.4.5用微量取样器吸取一定量培养液（活菌数约为1×107CFU）于营养琼脂平板上，用“L”棒涂布均匀，将浸有不同种类、不同浓度消毒液的滤纸片贴于平板的不同部位，35℃培养24hr。

5.5目的菌实验准备：

5.5.1根据4种目的菌菌粉的活菌数进行梯度稀释，按各目的菌的培养条件进行培养后，选中稀释的菌液，振荡器振2-3分钟，取一滴滴加到血球计数板上，加盖玻片静置5分钟，在显微镜下选取左上、左下、右上、右下、中间五个中格计数，求和。

一个样品检测三次后算出平均值。

稀释的菌液的含菌数/ml=（平均值/80）×400×104

5.5.2用微量取样器吸取一定量培养液（活菌数约为1×107CFU）于相应的选择培养基平板上，用“L”棒涂布均匀，将浸有不同种类、不同浓度消毒液的滤纸片贴于平板的不同部位，40℃厌氧培养48hr。

5.5.3用直尺测量滤纸周围的抑菌环的大小。

（精确到mm）

6.验证的主要依据：

《进出洁净室管理规程》、《称样操作规程》、《培养基配制操作规程》、《培养基配制、使用管理规程》、《活菌数检测操作规程》、《菌落计数操作规程》、《消毒剂配制操作规程》、《消毒剂的使用操作规程》、《实验器具清洗操作规程》、《实验器具准备操作规程》、《洁净室清场操作规程》。

7．验证合格标准：

7.1消毒剂消毒效果判定标准：

7.2

抑菌区直径（D1）-滤纸片直径（D2）

抑菌环半径（R）=

2

D2

D1

7.3R＜0.5mm不抑制

7.40.5mm≤R＜1.0mm弱抑制

7.51.0mm≤R＜3.0mm抑制

7.6R≥3.0mm强抑制

7.7结果：

按规定的清洁规程清洁后，按上述检测方法进行检测，根据上述公式计算出抑菌环半径，根据抑菌环半径来判断消毒液最适消毒浓度。

检测数据详见“消毒剂消毒效果再验证记录表”。

8.再验证周期：

验证周期为一年。

9.附录：

在验证方案实施过程中，如发生异常情况，使验证方案不能继续实施，可填写《验证方案修改申请及批准书》，由验证委员会审核并根据实际情况修改验证方案。

9.1《验证方案会审记录》

9.2《漏项及偏差处理记录》

9.3《验证方案修改申请及批准书》

验证评价及结论

1.消毒剂消毒效果再验证开展之前，首先成立了验证委员会，并组织人员起草了验证方案，报验证委员会批准后执行。

2.验证试验按批准的验证方案所规定的内容进行，并且详细记录，整个试验过程中未出现任何异常。

3.质检部、质保部收集汇总所有实施记录，内容真实准确，完整无误。

4.结论及评价：

4.1新洁尔灭:

新洁尔灭在2.5‰浓度时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌，志贺氏菌、铜绿假单胞菌、梭菌、白色念珠菌均能起到强抑制作用。

对长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌均能起到强抑制作用。

新洁尔灭在2‰浓度时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌，志贺氏菌、铜绿假单胞菌、梭菌、白色念珠菌均能起到强抑制作用。

对长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌均能起到强抑制作用。

新洁尔灭在1‰浓度时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌，志贺氏菌、铜绿假单胞菌、梭菌、白色念珠菌均能起到抑制作用。

对长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌均能起到抑制作用。

3种浓度的新洁尔灭只有在2‰和2.5‰浓度时，才能对7种控制菌、4种目的菌均起到强抑制作用。

因此，我们用浓度为2‰的新洁尔灭对生产环境内的物体表面进行消毒后，7种控制菌、4种目的菌均能被强烈抑制，能够达到预期的消毒效果，从而能有效防止污染和交叉污染。

4.2碘伏:

碘伏在1‰浓度时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌，志贺氏菌、铜绿假单胞菌、梭菌均能起到强抑制作用。

对长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌均能起到强抑制作用。

碘伏在0.5‰浓度时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌，志贺氏菌、铜绿假单胞菌、梭菌、白色念珠菌均能起到强抑制作用。

对长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌均能起到强抑制作用。

碘伏在0.25‰浓度时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌，志贺氏菌、铜绿假单胞菌、梭菌、白色念珠菌均能起到抑制作用。

对长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌均能起到抑制作用。

3种浓度的碘伏只有在0.5‰和1‰浓度时，才能对7种控制菌、4种目的菌均起到强抑制作用。

因此，我们用浓度为0.5‰的碘伏对生产环境内的物体表面进行消毒后，7种控制菌、4种目的菌均能被强烈抑制，能够达到预期的消毒效果，从而能有效防止污染和交叉污染。

根据验证结果，确认我公司现用消毒剂的浓度（即新洁尔灭：

2‰；碘伏：

0.5‰）对控制菌和目的菌可以起到良好的消毒效果，用此对生产环境进行消毒后，能保证达到防止污染和交叉污染的目的。

5.同意发放验证证书，本证书仅在确认的有效期内有效，接近有效期时，应按有关规定进行再验证。

评价人：

日期：

年月日

消毒剂消毒效果再验证记录（表一）

原菌

液名

培养基

培养温度

培养时间

培养条件

稀释度

活菌数

和

平均值

结果

1

2

3

4

5

金黄色葡萄球菌

营养

肉汤

35℃

18h

好氧

1/2原液

1/2原液

1/2原液

结论

大肠埃希菌

营养

肉汤

35℃

18h

好氧

1/2原液

1/2原液

1/2原液

结论

铜绿假单胞菌

营养

肉汤

35℃

18h

好氧

1/2原液

1/2原液

1/2原液

结论

白色念珠菌

营养

肉汤

35℃

18h

好氧

1/2原液

1/2原液

1/2原液

结论

1．菌液浓度的选择：

试验日期：

年月日

检验人：

复核人：

消毒剂消毒效果再验证记录（表一）

原菌

液名

培养基

培养温度

培养时间

培养条件

稀释度

活菌数

和

平均值

结果

1

2

3

4

5

沙门氏菌

营养

肉汤

35℃

18h

好氧

1/2原液

1/2原液

1/2原液

结论

志贺氏菌

营养

肉汤

35℃

18h

好氧

1/2原液

1/2原液

1/2原液

结论

梭菌

营养

肉汤

35℃

18h

厌氧

1/2原液

1/2原液

1/2原液

结论

1．菌液浓度的选择：

试验日期：

年月日

检验人：

复核人：

消毒剂消毒效果再验证记录（表一）

1．菌液浓度的选择：

试验日期：

年月日

原菌液名

批号

活菌数（CFU/g）

稀释度

活菌数（个）

和

平均值

结果

（CFU/g）

长双歧杆菌

结论

保加利亚乳杆菌

结论

嗜热链球菌

结论

德氏乳杆菌

结论

检验人：

复核人：

验证记录目录

1.文件资料确认记录

2.验证所需仪表确认记录

3.消毒剂消毒效果再验证记录（表一）---第一次

4.消毒剂消毒效果再验证记录（表二）---第一次

5.消毒剂消毒效果再验证记录（表一）---第二次

6.消毒剂消毒效果再验证记录（表二）---第二次

7.消毒剂消毒效果再验证记录（表一）---第三次

8.消毒剂消毒效果再验证记录（表二）---第三次

消毒剂消毒效果再验证报告目录

1.新洁尔灭各浓度抑菌环半径曲线图

2.碘伏各浓度抑菌环半径曲线图

3.验证评价与结论

4.验证证书

1.文件资料确认记录

验证所需文件资料及存放处

资料名称

编号

存放处

活菌数检测操作规程

SOP-ZL-03-505

GMP办公室

菌落计数操作规程

SOP-ZL-03-508

GMP办公室

培养基配制操作规程

SOP-ZL-03-501

GMP办公室

培养基配制、使用管理规程

SMP-ZL-03-007

GMP办公室

消毒液配制操作规程

SOP-WS-04-105

GMP办公室

消毒液使用操作规程

SOP-WS-04-106

GMP办公室

控制菌阳性菌株传代操作规程

SOP-ZL-03-544

GMP办公室

实验器具清洗操作规程

SOP-ZL-03-502

GMP办公室

实验器具准备操作规程

SOP-ZL-03-503

GMP办公室

进出洁净区管理规程

SMP-ZL-03-008

GMP办公室

CHK型显微镜操作规程

SOP-SB-03-523

GMP办公室

YXQ.SG41.280型电热手提式压力

蒸汽灭菌器操作规程

SOP-SB-03-202

GMP办公室

MS1型振荡器操作规程

SOP-SB-03-521

GMP办公室

BL610型电子天平操作规程

SOP-SB-03-013

GMP办公室

SKP-02B型电热恒温箱操作规程

SOP-SB-03-505

GMP办公室

SKP-02B型电热恒温箱清洁规程

SOP-WS-03-505

GMP办公室

洁净室清场操作规程

SOP-WS-03-525

GMP办公室

梭菌检测操作规程

SOP-ZL-03-543

GMP办公室

FE20型PH计操作规程

SOP-SB-03-525

GMP办公室

控制菌阳性菌管理规程

SMP-ZL-03-018

GMP办公室

确认

执行人:

___________

______年___月___日

复核人:

_________

______年___月___日

2.验证所需仪器、仪表确认记录

验证所需仪器、仪表、量具清单及校正情况

名称

规格或型号

校正结果

校正有效期

刻度吸管

1．0ml

合格

一年

刻度吸管

10．0ml

合格

一年

温度计

0~100℃

合格

一年

电子天平

BL610

合格

一年

厌氧罐

-----

合格

一年

电热手提压力蒸汽灭菌器

YXQ.SG41.280

合格

一年

微量取样器

100ul

合格

一年

直尺

20cm

合格

一年

100ml量筒

100ml

合格

一年

500ml量筒

500ml

合格

一年

1000ml量筒

1000ml

合格

一年

确认

执行人:

___________

______年___月___日

复核人:

_________

______年___月___日

消毒剂消毒效果再验证记录（表二）

菌名：

检测日期：

年月日单位：

mm

消毒剂

新洁尔灭

碘伏

平皿编号

消毒剂浓度

2.5‰

2‰

1‰

1‰

0.5‰

0.25‰

纸片号

D1

R

D1

R

D1

R

D1

R

D1

R

D1

R

一

1

2

3

4

5

二

1

2

3

4

5

三

1

2

3

4

5

平均值

结果

备注

R＜0.5mm，不抑制，用“—”表示；0.5mm≤R＜1.0mm，弱抑制，用“+”表示；1.0mm≤R＜3.0mm，抑制，用“++”表示；

R≥3.0mm，强抑制，用“+++”表示。

检验人：

复核人：

抑制

强抑制

弱抑制

弱抑制

抑制

强抑制

强抑制

弱抑制

抑制

强抑制

弱抑制

抑制

强抑制

抑制

强抑制

抑制

弱抑制

强抑制

抑制

弱抑制