甘草中总黄酮的提取及含量测定.docx

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甘草中总黄酮的提取及含量测定

甘草中总黄酮的提取及含量测定

前言

甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源⋯。

甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强一t5血管功能、增强免疫力等作用。

因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增加资源的附加值，前景十分可观。

为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘草黄酮提取的最佳工艺条件。

1材料与方法

1.1材料

甘草，市售；

试剂：

亚硝酸钠、碳酸钠、石油醚、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、芦丁；

仪器：

烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH-4数显恒温水浴锅、分析天平、AB104．N电子天平、布氏漏斗、SHZ—C型循环水多用真空泵、分光光度计。

1.2方法

1.2.1标准曲线的绘制

称取芦丁对照品10mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10ml，使之成为浓度为1mg/ml的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用。

量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，分别加水至3ml，加5%亚硝酸钠溶液0.5ml，放置6min，加10%的硝酸铝溶液0.5m1，摇匀、放置6min后加5%的氢氧化钠溶液2.5m1，混匀、放置15min后蒸馏水定容至10ml。

用紫外分光光度计在500nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。

1.2.2材料处理

取甘草根茎粉（粉碎过40-60目筛）3g置于烧杯中,按甘草粉末:

乙醇（1:

30）加入90ml浓度为70%的乙醇混合均匀.

1.2.3试验设计（按每组自己做的时候用的方法的具体过程写）

第五组：

1.配置芦丁标液：

2.配置标准曲线所需不同浓度溶液

3.测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。

4.处理样品

5.测出样品吸光度，按照标准曲线，得出样品总黄酮含量

1.2.4甘草黄酮含量测定

收集滤液并测量滤液体积，取样按绘制标准曲线的方法测定其吸光度值，根据公式计算每克甘草中黄酮的含量。

（有稀释的写清稀释了多少倍等）

2结果与分析

测出样品吸光度为0.146.

对比出标准曲线得出浓度为0.0213mg/ml

此浓度为10ml样品处理液的浓度。

则3ml参比原液中物质的量为0.0213mg/ml*0.01L=0.000213mg

则参比原液的浓度为0.000213/0.003=0.071mg/ml

则样品原液的浓度为0.071*5=3.55mg/ml

提取原液有20ml，则样品中甘草黄酮含量为3.55*20/3=23.67mg/g

3结论

经过预试验确定影响提取含量的主要因素为乙醇浓度、时间、温度、料液比。

因此先进行单因素试验，根据单因素试验的结果，以乙醇浓度、时间、温度、料液比为因素、进行（3）正交试验，根据正交试验结果确定最佳工艺。

根据其他几组同学的实验结果做出如下分析

乙醇浓度对提取含量的影响。

由图2可知，乙醇浓度的最优水平为75％，而在两侧的浓度范围内提取含量都是随之下降的。

乙醇浓度越大，极性越小，增大极性小的黄酮类溶出，从而在一定乙醇浓度范围内，提取含量呈上升趋势；当乙醇浓度超过一定范围，即极性过大，减少了黄酮糖苷类等的溶出，从而提取含量呈下降趋势。

因而在设计正交试验时，将其浓度选在75％左右。

温度对提取含量的影响。

由图3可知，当温度低于85℃时，随着温度的升高，从热动力学方面增加了黄酮类的溶出，从而提取含量呈上升趋势；当温度高于85℃时，可能黄酮类发生水解、裂解或者黄酮类之间发生了一系列反应，从而使提取含量呈下降趋势。

因而在设计正交试验时，温度选择在85℃左右。

时间对提取含量的影响。

由图4可知，当时间少于3h时，由于时间的增大有助于黄酮类的溶出，从而提取含量呈上升趋势；当时间超过3h时，提取含量反而略微降低。

理论上讲在3．5h提取含量应趋于一个平衡值，或者比3h稍有上升趋势，然后再趋于一个平衡值。

这可能是由于加热时间过长，造成黄酮糖苷类的水解，导致黄酮检出量减少，从而提取含量呈下降趋势。

因此，在正交试验设计时，时间应选择在3h左右。

料液比对提取含量的影响。

由图5可知，当料液比小于1：

30时，随着料液比的增大提取含量呈上升趋势；当料液比高于1：

30时，随着料液比的增大反而呈下降趋势。

料液比影响溶剂的极性，从而影响了不同极性黄酮类的溶解性；

同时能耗也随着料液比的增大而增大，导致在后续试验萃取过程中萃取剂用量也随之增加。

因此在设计正交试验时，将料液比选择在1：

30左右。

根据单因素试验结果，设计k（3）正交试验。

试验结果见表1。

由表1可以看出提取甘草黄酮的最优方案为A。

BCD，即料液比为1：

20，度为85℃，提取时间为4h，乙醇浓度为75％。

由极差分析可知，各因素主次顺序为DBAC，即乙醇浓度对甘草黄酮的提取含量影响最大，温度对甘草黄酮提取含量影响次之，影响最小的因素是提取时间。

而3h时的甘草黄酮提取含量与4h时的相差不大，而减少时间可以降低能耗，因而为了降低成本，选提取时间为3h。

综上所述，甘草黄酮的最佳提取工艺条件为ABCD：

，即乙醇浓度75％，温度85℃，时间3h，料液比1：

20。

4总结

（1）单因素试验表明，各因素对黄酮提取率的影响顺序为：

乙醇浓度>温度>料液比>提取时间。

正交试验结果表明，乙醇回流提取的最佳工艺条件为乙醇浓度75％，温度85℃，时间3h，料液比1：

20。

（2）该试验研究了影响甘草中黄酮提取率的几个主要因素，但其余因素对黄酮提取率是否具有影响还有待于进一步研究。

甘草黄酮的保健作用和药理学方面的研究也有待于更深入的研究。