生物实验常用溶液的配制讲义.docx

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生物实验常用溶液的配制讲义

常用溶液的配制

v贮存液配方

solution

Ingredients

MW

Dose

Note

10M/LNaOH

NaOH

40.00

4g

搅拌溶解

T·H2O

10ml

1M/LTris·Cl

Tris（HOCH2）3CNH2

121.14

12.11g

微波炉加热溶解，冷却后浓盐酸调pH至8.0，加三蒸水定容至100ml

浓盐酸

约5ml

T·H2O

80ml

0.1M/LEDTA

EDTA（C10H6N2O8）

292.25

2.92g

微波炉加热溶解，冷却后10M/LNaOH调pH至8.0，加三蒸水定容至100ml

T·H2O

80ml

RNA酶A母液10mg/ml

RNA酶A

100℃加热15分钟,使混有的DNA酶失活。

冷却后用1.5mleppendorf管分装成小份保存于-20℃

10mmol/LTris·Cl（pH7.5）,

15mmol/LNaCl

v工作液配方

solution

Ingredients

materials

Dose

Note

溶液Ⅰ

50mmol/LGlucose

Glucose（C6H12O6•H2O）198.17

0.99g

搅拌溶解后定容至100ml，高压灭菌4℃保存

25mmol/LTris·Cl

1M/LTris·Cl

2.5ml

10mmol/LEDTA

0.1M/LEDTA

10ml

T·H2O

50ml

溶液Ⅱ

1％SDS

SDS

1g

分开常温保存，用时临配。

1ml溶液Ⅱ：

1%SDS980μl+10mol/LNaOH20μl

T·H2O

100ml

0.2mol/LNaOH

溶液Ⅲ

5mol/LKAc

CH3COOKMW:

98.14

60ml

定容至100ml,并高压灭菌。

溶液终浓度：

K+3mol/L,Acˉ5mol/L。

冰醋酸

11.5ml

T·H2O

28.5ml

LB液体培养基（Luria-Bertani）

蛋白胨（Tryptone）

10g

溶于800ml去离子水中NaOH调pH至7.5，加去离子水至总体积1升,高压下蒸气灭菌20分钟

酵母提取物（Yeastextract）

5g

NaCl

10g

LB固体培养基

LB液体培养基

100ml

高压灭菌后成凝胶状，用时微波炉加热至100℃以上溶解，加入5mg/mlAmpcillin1ml（终浓度为50ug/ml），摇匀后倒入培养皿中，冷却凝固即可涂板

琼脂粉

1.2g

氨苄青霉素（Ampicillin,Amp）工作液

Ampcillin（规格0.48g,80万U）

1支

5mg/ml贮存液（终浓度为50ug/ml）,-20℃保存备用

三蒸水

100ml

溶菌酶溶液（10mg/ml）

溶菌酶溶液

0.1g

分装成1ml/小份，保存于-20℃,每一小份一经使用后便予丢弃

10mmol/LTris·Cl（pH8.0）

10ml

3mol/lNaAc（pH5.2）

NaAc·3H2O

40.81g

冰醋酸调pH至5.2，加水定容至100ml，分装后高压灭菌,储存于4℃冰箱

三蒸水

50ml

TE缓冲液

10mmo/LTris·Cl，

1M/LTris·Cl（pH8.0）

0.5ml

加水定容至50ml，高压灭菌后EP管分装备用

1mmol/LEDTA

0.1M/LEDTA（pH8.0）

0.5ml

T·H2O

49ml

TBE缓冲液（5×）

Tris

54g

定容至1000ml

硼酸

27.5g，

0.5M/LEDTA（pH8.0）

20ml

上样缓冲液（6×）

0.25%溴酚蓝

溴酚蓝

0.25g

定容至100ml

40%（w/v）

蔗糖水溶液

蔗糖

40g

三蒸水

80ml

0.7％琼脂糖凝胶

琼脂糖粉

0.14g

微波炉加热溶解。

温度降至50℃左右加入2μlEB（溴化乙锭）后制胶

1×TBE

20ml

50xTAE,pH~8.5（40mMTris碱,40mM醋酸,1mMEDTA）

Tris-碱

242g

Tris加300ml去离子水加热搅拌溶解后，加入0.5M的EDTA（pH8.0）100ml，再加冰醋酸，去离子水调整体积到1升

冰醋酸

57.1g（ml）

Na2EDTA·2H2O

（0.5MEDTApH8.0）

18.61g

（100ml）

10xTBE（89mMTris碱,89mM硼酸，2mMEDTA）

Tris-碱108g

硼酸55g

Na2EDTA·2H2O7.44g

加去离子水调整体积到1升

生物化学实验常用缓冲液的配制方法

1、0.2mol/L磷酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L（pH6.0）*配制量1L

*配置方法1.称取磷酸氢二钠.12水8.82g。

2.称取磷酸二氢钠.2水27.34g。

3.用去离子水溶解并定容至1L。

室温保存。

注意：

此为母液，使用时稀释40倍使用。

2、洗脱液*组份浓度0.15mol/L（含0.15mol/L氯化钠的0.005mol/LpH6.0的磷酸缓冲液）

*配制量10L

*配置方法1.称取氯化钠87.66g。

2.用0.2mol/LpH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解。

3.用去离子水稀释至10L。

室温保存。

3、0.3mol/L磷酸缓冲液*组份浓度0.3mol/L（pH7.8）*配制量0.5L

*配置方法1.准确称取磷酸氢二钠.12水49.150g。

2.磷酸二氢钠.2水2.000g。

3.用去离子水溶解并定容至0.5L。

室温保存。

注意：

此为母液，使用时稀释10倍使用。

4、0.2mol/L乙酸缓冲液*组份浓度0.2mol/L（pH4.6）

*配制量2L

*配置方法1.准确称取乙酸钠.3水54.44g。

2.加入23mL冰乙酸，溶解。

3.用去离子水溶解并定容至2L。

4℃保存。

5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸缓冲液（pH2.6、4.6、6.6）*组份浓度0.2mol/L

*配制量各1L

*配置方法1.母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：

称取Na2HPO4.12水143.256g，用去离子水定容至2L。

2.母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：

称取柠檬酸.1水42.028g用去离子水溶解定容至2L。

3.pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：

pH值A（mL）B（mL）

2.6109.0891.0

4.6467.5532.5

6.6727.5272.5

4.按上表混匀后，4℃保存。

6、20×SSC缓冲液*配制量1L（pH7.0）

*配置方法1.准确称取175.2g氯化钠。

2.准确称取88.2g柠檬酸钠.2水。

3.溶解于800mL去离子水中。

4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。

5.加去离子水定容至1L。

注意：

按实验需要可分装后高压灭菌。

10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。

7、0.15mol/L氯化钠-乙二胺四乙酸二钠缓冲液（pH8.0）*组份浓度0.15mol/L

*配制量1L

*配置方法1.准确称取氯化钠8.77g。

2.称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。

3.溶于800mL去离子水中。

4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。

5.加去离子水定容至1L。

8、1/15mol/L的磷酸盐缓冲液（pH7.6）*组份浓度0.15mol/L

*配制量1L

*配置方法1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：

称取KH2PO49.078g，用去离子水溶解定容至1L。

2.溶液乙（1/15mol/L的Na2HPO4溶液）:

称取Na2HPO4.2水11.876g（或磷酸氢二钠.12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。

3.pH7.6磷酸盐缓冲液：

将①和②按1.4：

8.6比例混合即可。

9、5×TrisGlycineBuffer（SDSPAGE电泳缓冲液）

*组份浓度0.125MTris，1.25MGlycine，0.5％（w/v）SDS

*配制量1L

*配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tris15.1g

Glycine94g

SDS5.0g

2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10、5×SDSPAGELoadingBuffer

*组份浓度250mMTrisHCl（pH6.8）

10％（W/V）SDS

0.5％（W/V）BPB

50％（V/V）甘油

5％（W/V）β巯基乙醇

*配制量5mL

*配置方法1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。

1MTrisHCl1.25mL

SDS0.5g

BPB25mg

甘油2.5mL

2.加入去离子水溶解后定容至5mL。

3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2M-E的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右

1、1MTrisHCl*组份浓度1MTrisHCl（pH7.4，7.6，8.0）*配制量1L

*配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl

7.4约70mL

7.6约60mL

8.0约42mL

4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度

的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTrisHCl*组份浓度1.5MTrisHCl（pH8.8）*配制量1L

*配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随

温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TEBuffer*组份浓度100mMTrisHCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）

*配制量1L

*配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTrisHClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

500mMEDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠*组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）*配制量100mL

*配置方法1.称取40.8gNaOAc.3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer

*组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

*配制量1L

*配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl8g

KCl0.2g

Na2HPO41.42g

KH2PO40.27g

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6、10M醋酸铵*组份浓度10M醋酸铵*配制量100mL

*配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL

的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、TrisHCl平衡苯酚*配置方法

1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

②加入羟基喹啉（8Quinolinol）至终浓度0.1％。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1MTrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1MTrisHCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇*配置方法

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：

24：

1）。

氯仿可使蛋白（25：

24：

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：

将TrisHCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS*组份浓度10％（W/V）SDS*配制量100mL

*配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2NNaOH*组份浓度2NNaOH*配制量100mL

*配置方法1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程

中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl*组份浓度2.5NHCl*配制量100mL

*配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5MNaCl*组份浓度5MNaCl*配制量1L

*配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose*组份浓度20％（W/V）Glucose*配制量100mL

*配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的

去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

14、SolutionI*组份浓度25mMTrisHCl（pH8.0），10mMEDTA，50mMGlucose（质粒提取用）*配制量1L

*配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTrisHCl（pH8.0）25mL

0.5MEDTA（pH8.0）20mL

20％Glucose（1.11M）45mL

dH2O910mL

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。

15、SolutionII*组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDS（质粒提取用）*配制量500mL

*配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10％SDS50mL

2NNaOH50mL

2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3.室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、SolutionIII*组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH（质粒提取用）*配制量500mL

*配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc147g

CH3COOH57.5mL

2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500mL。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

17、0.5MEDTA*组份浓度0.5MEDTA（pH8.0）*配制量1L

*配置方法1.称取186.1gNa2EDTA.2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、1MDTT*组份浓度1MDTT*配制量20mL

*配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，20℃保存。

19、10mMATP*组份浓度10mMATP*配制量20mL

*配置方法1.称取121mgNa2ATP.3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的25mMTrisHCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份，20℃保存。