推荐藻类生物学实验11海科.docx

推荐藻类生物学实验11海科.docx

《推荐藻类生物学实验11海科.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《推荐藻类生物学实验11海科.docx（9页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

推荐藻类生物学实验11海科

实验一大型海藻种类形态观察

（4学时第八周）

一、实验目的

了解海洋藻类----大型海藻与微藻的形态与分类。

二、实验材料及用具

1、实验材料：

1）大型海藻标本（学院标本室）；

2）海带孢子体（可用干海带泡发），江篱（海洋学院附近打捞）；（取一部分冻存于-20冰箱，作为叶绿素提取实验的材料）

2、实验器材：

显微镜、胶头滴管（每瓶藻一支）、盖玻片、载玻片、刀片（做海藻切片）。

4、试剂：

70%乙醇（每组一瓶）

三、实验步骤

1、大型海藻标本观察；将标本馆的拉丁文名抄录下来，网上检索图片和分类。

2、海带的外部形态观察：

藻体明显分为固着器、柄部和叶片，在叶片中央有两条平行纵走的浅沟，孢子体幼龄期叶面平滑，小海带期叶片出现凹凸现象，大海带期叶面则平直宽厚。

3、海带的内部构造：

①用徒手切片的方法，取一小块孢子体进行横切片，在显微镜下观察：

孢子体的柄和叶均分为表层、皮层和髓部。

②同样取一小块孢子体进行纵切片，在显微镜下观察：

表皮层由1-2层排列紧密的小细胞组成，外皮层细胞间分布1-2层粘液腔，其腔内有分泌细胞，髓丝细胞一端膨大为喇叭花，分生细胞位于叶片与柄之间。

4、江蓠的内部构造观察：

①江蓠的纵切面。

②江蓠的横切面。

③江蓠囊果横切面。

5、紫菜的形态与构造：

干紫菜先用水浸泡散开，再进行观察。

固着器：

由根丝集合而成。

叶状体：

由一层或两层细胞构成。

柄：

叶状体基部与固着器之间的部分。

四、作业：

1、绘制大型海藻图：

选5个标本，注明拉丁文名，简要说明其生物学特性（利用拉丁文名进行网上检索）。

2、绘出海带和江篱的内部构造，紫菜的外形。

附1：

江篱与海带的内部构造

图1.江篱藻体的内部构造

A.藻体横切面观；B.藻体纵切面观；1表皮；2髓部细胞3表皮细胞

图2.海带构造

A.海带孢子体横切面；B.髓部，C.示喇叭丝；皮层部分横切面，示粘液腔道形成的时期；D.成体横切面，示粘液腔道；co皮层；e分泌细胞；hg藻丝；me髓部；m表面分生细胞；s分泌腔；v.b.f结合的喇叭丝

实验二微型海藻形态观察和培养

（4学时，第九周）

一、实验目的

观察几种重要经济微藻的形态特征，几种掌握单细胞微藻的实验室培养方法，细胞生长曲线观察。

二、实验材料及用具

1、实验材料：

小球藻、扁藻、等鞭金藻、角毛藻、骨条藻、茧形藻、池塘水样等微藻。

2、实验仪器：

电炉、恒温干燥箱、灭菌锅、pH计、可见分光光度计、血球计数板

3、实验器材：

500ml试剂瓶（每组5个）；0.45m的滤膜（一个）；抽滤装置（或针管）；玻棒、500ml烧杯、50ml容量瓶（每组一个）；250ml锥形瓶（每组2个）、牛皮纸、细绵绳

4、试剂：

蒸馏水、消毒海水、各种试剂（见培养基配方），微藻培养母液

三、实验步骤

1、微藻形态观察：

分别取各种微藻水样置于载玻片上，盖上盖玻片，于显微镜下观察。

先用10倍镜观察，然后转换物镜转换器用40倍观察。

2、培养基母液配制（配方见附2）：

（提前配好，有兴趣的同学可与实验老师王老师联系好时间，学习配制）1000倍培养基母液（强调维生素母液的配制方法）。

配方见附1。

3、培养微藻的容器、工具及用水的消毒（提前准备）：

（1）培养微藻所用的容器、工具应用洗刷干净后晾干，放置恒温干燥箱中加热，120℃恒温1小时以上，自然冷却备用。

（2）加热煮沸消毒海水冷却至室温后备用。

4、配制微藻培养液。

按照母液配制比例把母液加入消毒海水，配制培养液（例如，1000倍母液，则每升消毒海水中加入1毫升母液，摇晃均匀，就成了培养液

）。

5、接种：

取两种微藻，各按1/3～1/5接种（即把1份藻种加入3～5份培养液中）。

6、培养、管理。

将接种好的微藻置于适宜的条件下培养，每天摇晃1-2次，。

7、藻细胞密度计数（方法见附3）。

分光光度计测定吸光值或血球计数板计数藻细胞密度。

不同种类的微藻所选用的波长不一样，一般绿藻门波长为720-750，金藻门、硅藻门波长为420。

8、本实验采用分光光度计每2天测定一次，培养时间为横坐标，藻细胞的OD值为纵坐标，绘制生长曲线。

培养两周。

四、作业：

1、绘制观察到的微藻的形态图。

2、通过哪些具体措施使培养基无菌？

3、为何配制母液？

配制培养基时，为何要等消毒海水冷却后再加母液？

4、EDTA的作用？

5.以培养时间为横坐标，相对应藻液的OD值为纵坐标，作图。

6、计算每瓶藻的培养6天的生长速率，公式如下：

K=（lnN2–lnN1）/（t2-t1）

（1）

T=0.6931/K

（2）

其中：

K为相对生长速率；t1、t2为对应的培养时间；N1和N2分别为t1、t2时的细胞密度（微藻用OD值，江篱用重量）；T为细胞的平均倍增时间。

t1就是刚放入培养箱的那天，计算培养6天后（即t2-t1=6,lnN1、lnN2分别为培养第一天和第六天的OD值的自然对数）的K值，再计算一个从培养第1天到最后1天的K值，分别以表格的形式表示。

附1：

单细胞微藻的培养基配方

（一）宁波3号培养基配方

试剂名称

重量

试剂名称

重量（mg）

NaNO3

100mg

KH2PO4

10mg

FeSO4

2.5mg

MnSO4

0.25mg

Na2-EDTA

10mg

维生素B1

6μg

维生素B12

0.05μg

自然海水

1000ml

（二）F/2（+Si）培养基母液的配制

1.A液500ml1000倍

NaNO337.5g;NaH2PO42.5g

2.B液500ml1000倍

Fe-EDTA2.5g（FeCl31.6g+EDTA0.9g）

3.C液500ml1000倍

Na2SiO3.9H2O10g

4.D液500ml1000倍

盐酸硫铵素（VB1）5mg（试剂50mg/ml取100μl）

BiotinVH0.025mg（试剂0.1mg/ml取250μl）

VB120.025mg（试剂0.25mg/ml取100μl）

先用维生素分别用纯水溶解混合，稀HCl将pH调到4.5~5.0，最后用纯水稀释至1升。

膜过滤后冰冻保存。

5.E液500ml1000倍

CuSO4.5H2O0.0098mg

ZnSO4.7H2O0.022mg

CaCl2.6H2O0.01mg

MgCl2.4H2O0.180mg

Na2MoO4.2H2O0.0063mg

1000ml（1升）F/2（+Si）培养基=1000ml（1升）过滤灭菌海水+1mlA液+1mlB液+1mlD液+1mlE液（+1mlC液）

附3：

单细胞藻类的定量方法

（一）重量测定法：

湿重法；干重法

（二）个体计数法：

水滴计数法；血球计数板计数法；

血球计数板计数方法：

图3.血球计数板

1搅拌：

由于藻类细胞在培养液中分布不均匀，所以在取产前必须进行搅拌，搅拌后立即取样。

2固定、稀释：

运动细胞需加碘液杀死才能计数。

如细胞浓度过大，计数困难，需把水样稀释到适宜的程度。

3计数板与盖玻片洗净擦干――盖好盖玻片――摇荡藻液――吸取藻液（干的平口微吸管）――迅速把吸管放在计数板上的盖玻片边缘处，轻压橡皮头，使藻液流入计数板内――1分钟后低倍镜下计数－计数任何对角两大格（加盖玻片后每一大格即形成一个体积为0.1立方毫米的空间），然后取其平均值。

每个样品须重复计数两次。

1毫升水体藻细胞＝计算平均值×10,000×藻稀释倍数

鲁哥氏液（Lugol'sSolution）又称碘液，常用的配方是：

将6克的碘化钾溶于

20毫升水中，待完全溶解后加入4克碘，摇荡，待碘完全溶解后，加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。

（三）分光光度计定量法

微藻的细胞密度在某一范围内与分光光度计在特定波长下的OD值的大小成正比关系，因此，可用分光光度计直接定量。

测定步骤：

1.预热分光光度计约20min，选择波长（绿藻门720-750，硅藻门、金藻门420），用培养液作为參比，调零。

2．分别测定待测藻液的OD值。

3.以培养时间为横坐标，相对应藻液的OD值为纵坐标，作图。

实验三藻类细胞叶绿素的提取和细胞色素的观察

（4学时，第十一周）

注：

第十周继续培养微藻

一、实验目的

掌握大型和微型海藻叶绿素测定方法。

观察比较不同门藻类的叶绿素的吸收光谱。

叶绿素含量是衡量大型海藻生长状态的指标之一。

浮游植物叶绿素含量，可用来初步估量浮游植物的光合作用能力，并进行估量水域初级生产力。

同样也适用于实验室单种培养试验的定量方面。

二、实验材料及用具

1、实验材料：

海带、江篱

2、实验器材：

研钵（每组一套）、15ml刻度试管（每组2支，尽量使用玻璃试管）、剪刀、分光光度计、天平、叶绿素荧光观察箱（一端带光源的纸箱）、台式离心机（不用控温）、胶头滴管（每组2支）、10ml左右玻璃试管（每组2支）

4、试剂：

90%丙酮（分析纯）、MgCO3

三、实验步骤

1、取样：

清洗海带和江篱，剪取藻体0.05g左右（记录准确的重量）。

2、研磨和提取：

加入2－3ml的90％丙酮和1小匙MgCO3，研磨，在弱光下研磨1到2min，再用5ml的90％丙酮把杵上和研磨管内的东西洗入15ml的有螺旋盖的离心管内，静置于暗处10min，使色素充分被提取。

3、离心（2000g，5min）或静置，使固液分离。

4、测定：

小心移取将上清液放入玻璃试管内，在分光光度计上，用1cm的比色皿分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90％的丙酮作校正吸光度测定。

6、计算：

分别从663、645、630nm时的光密度值，减去750nm时的光密度值，再除以液槽光程（厘米），即为D663、D645、D630的值。

下式计算叶绿素在90％丙酮中的含量。

Chla（g/ml）=11.64*D663-2.16*D645+0.1D630

Chlb（g/ml）=3.94*D663+20.97*D645-3.66D630

Chlc（g/ml）=5.53*D663-14.81*D645+54.22D630

7、叶绿素吸收光谱的测定：

将提取的叶绿素放于（石英）比色皿中，用紫外分光光度计测定400nm-750nm波段的吸收光谱。

三、作业：

1、计算几种藻类的叶绿素含量

2、思考：

叶绿素提取过程中为何要避光？

为何加MgCO3？

（本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。

请预览后才下载，期待您的好评与关注！

）