岛津高效液相色谱仪验证方案.docx
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岛津高效液相色谱仪验证方案
一、概述
1、概述
LC-10ATvp高效液相色谱仪为日本岛津仪器（苏州）有限公司生产，由LC-10ATvp泵、SPD-10AVp检测器、LC-SCL控制器,金羊色谱工作站组成。
我司在2001年购买了该设备主要用于各种原辅料及产品的测定。
仪器名称：
高效液相色谱仪仪器负责人：
仪器型号：
LC-10ATvp仪器编号：
生产厂家：
日本岛津仪器（苏州）有限公司
仪器所在部门和房间：
质量部、化验室精密仪器室
2、验证目的
为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标对该仪器进行再验证。
3、验证小组
姓名
部门与职务
职责
组长
魏献波
质量部
组织验证工作，审核验证方案及报告，
组员
罗莉君
质量部经理助理
起草验证方案及报告
王少林
QC主管
协调验证的实施
李燕霞
QA主管
监督验证，参与验证取样及填写相关记录
二、运行预确认
1、资料档案检查
1.1检查人：
QA
1.2检查结果：
检查项目
文件编号
要求
检查结果
存放地点
设备档案
完整
SPD-10A型高效液相色
谱仪操作规程
SB-SOP-068/4
完整
维护保养
完整
检查人：
复核人：
日期：
2、仪器的安装连接情况检查
2.1检查人：
QA
2.2检查结果：
项目
标准
检查结果
安装场所环境
温度
10-30℃，且要稳定
相对湿度
≤65%，无腐蚀性气体
其他
远离振源安有空调
电源功率
220±10V，50HZ
连接情况
供电电源应有良好的接地
线路连接各接口连接正确
管线连接各接口连接正确。
三、运行确认
1、LC-10ATvp泵
1.1流量准确度
可执行标准：
＜±3%（以蒸馏水为标准）
测试方法：
将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，分别设定1.0、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0ml/min六段，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集10分钟，称重，查表，即得。
流量设定值（ml/min）
1.0
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
10分钟收集量（g）
收集量计算查表后的体积（ml）
实际每分钟流出量（ml/min）
流量准确度（%）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
1.2流量精确度
可执行标准：
＜±0.3%（0.997ml/min～1.003ml/min，以蒸馏水为标准）
测试方法：
将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，设定流量为1.0ml/min，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集10分钟，称重，查表，即得，共收集5次。
次数
1
2
3
4
5
10分钟收集量（g）
收集量计算查表后的体积（ml）
实际每分钟流出量（ml/min）
流量精确度（%）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
1.3压力范围
可执行标准：
±0.2MPa+设定值
测试方法：
在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用OD1.6的盲管封住。
启动泵，使压力升至所设定的压力，观察仪器是否自动停泵。
设定值分别为：
10.0Mpa、20.0Mpa、30.0Mpa
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
2SPD-10AVp紫外可见光液相色谱检测器
2.1噪声与漂移
可执行标准：
噪声＜±1.0×10-4AU（250nm），漂移＜±5.0×10-4AU/hr
测试方法：
将仪器各部连接好，紫外检测器调至254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，待柱平衡稳定后，进行基线的测试，测试时间半小时，观察并记录测试结果。
测试图谱见基线漂移测试。
见图谱
（1）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
2.2重复性（定性重复性及定量重复性）
目的：
考核仪器整体稳定性能。
可执行标准：
定性重复性RSD≤1%，定量重复性RSD≤2.0%
测试方法：
精密量取二甲苯和苯适量，置棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释成每1ml含上述两种物质都为0.002ml的溶液，摇匀；以甲醇为流动相，精密量取上述溶液20μl注入色谱仪中，连续进样5次，记录色谱图，计算，即得。
见图谱
（2）-（6）
A、定性重复性
取两组分保留时间差进行计算。
次数
1
2
3
4
5
组分1保留时间
组分2保留时间
组分1与组分2保留时间差
RSD
B、定量重复性
取两组分峰面积比进行计算。
次数
1
2
3
4
5
组分1峰面积
组分2峰面积
组分1与组分2峰面积比
RSD
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
2.3最小检出量
可执行标准：
检出量为1.0×10-8g/ml,以萘为样品。
测试方法：
精密称定萘适量用甲醇溶解并稀释成1.0×10-6g/ml，以甲醇为流动相，精密量取20μl注入色谱仪中，记录色谱图，测试结果见图谱（7）。
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
四、校正
1、计量部门的校正（有关检定证书）
检定单位：
检定证书编号：
检定日期：
年月日
2、检验室的校正
流量校正
目的：
对泵的流量进行校正。
将仪器各部件联好，以蒸馏水为流动相，用秒表计时10分钟，将流出液收集在已恒重的比重瓶里，称重，查表，计算即得，结果如下表
设定流量值（ml/min）
0.5
1.0
1.5
测量次数
3
3
3
实际测量时间（min）
10
10
10
收集液的重量（g）
收集液的体积（ml）
实际流量（ml/min）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
五、适用性预试验
目的：
检查仪器在测试供试品的过程中，含量测定的相对偏差。
可执行标准：
含量测定的相对偏差应不得过3.0%。
检验项目：
苯磺酸氨氯地平片含量测定。
样品批号：
采用仪器：
LC-10ATvp高效液相色谱仪。
检验依据：
国家药品标准YBH05092007、《中国药典》2010年版二部
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.03moL/L磷酸二氢钾溶液（75:
25）为流动相，检测波长为237nm。
理论板数按氨氯地平峰计算应不低于500。
对照品溶液的制备取苯磺酸氨氯地平对照品17mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氨氯地平5mg），置200ml量瓶中，加水20ml使溶解，加流动相约160ml，超声处理30分钟，取出，放冷至室温，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液备用，即得。
测定法精密量取对照溶液和供试品溶液各20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得
式中Ar为供试品溶液的峰面积；
As为对照品溶液的峰面积；
Wr为供试品的称样量；
Ws为对照品的称样量；
P为苯磺酸氨氯地平对照品的百分含量。
计算相对偏差允许偏差≤2.0%。
结论：
试验者:
日期:
年月日
复核者：
日期：
年月日
六、验证结果评定与结论
QC负责收集各项验证、试验结果记录，起草验证报告，报验证小组。
验证小组负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论。
七、验证周期及拟订再验证项目
质量部负责根据设备仪器情况，确定再验证周期项目及周期，报验证小组审核。
如仪器因出现严重故障而更换零部件，则需要进行再验证。
验证内容包括：
校正、运行确认、性能确认。
（五）再确认
1、线路连接：
检查线路，接地等情况。
2、仪器维护：
清洁仪器内部和外部。
3、检查：
色谱柱参数是否降低，润滑是否良好。
4、功能验证：
4.1流量
用比重瓶收集一定时间的流动相比较流量是否和设定值一致，如不一致则调整。
4.2紫外检测器性能
4.2.1将仪器各部联好，紫外检测器波长调到250nm，流动相为甲醇，流速为1.0ml/min，稳定后记录基线30～40分钟，基线飘移≤±5.0×10-4AU/hr，噪声≤±1.0×10-4AU。
4.2.2重复性
精密量取二甲苯和苯适量，置棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释成每1ml含上述两种物质都为0.002ml的溶液，摇匀；以甲醇为流动相，精密量取上述溶液20μl注入色谱仪中，连续进样5次，记录色谱图，计算，即得。
以此检查仪器的定性重复性和定量重复性，定性重复性RSD≤1%，定量重复性RSD≤2.0%。
4.2.3最小检出量
精密称定萘适量，用甲醇溶解并稀释成1.0×10-8g/ml，以甲醇为流动相，精密量取20μl的供试液注入色谱仪中，记录色谱图。
5、工作日记：
每次试验均应作操作者、日期和仪器状态的记录。
6、检查周期：
再确认项目
周期
1
每年一次
2
每次试验
3
每月一次
4
每年一次
5
每次试验
制订人：
日期：
年月日
概述
一、验证结果与小结（验证记录）
（一）安装确认
1、资料档案
2、技术特性
3、一般状况
（二）能性试验
（三）校正
1、计量部门的校正
2、检验室校正
（四）适用性预试验
（五）再确认
1、线路连接
2、清洁
3、检查
4、功能性试验
5、工作日记
二、验证结果及总体评价
三、再验证计划
四、确立的正式文件
五、验证报告的审查
六、审批意见
概述
年月日至年月日检验仪器与方法验证小组根据批准的LC-05P高效液相色谱仪验证方案，对该仪器进行了安装确认、校正、适用性预试验、再确认等一系列验证工作，现将验证工作报告如下：
一、验证结果与小结（验证记录）
（一）、安装确认
1资料档案
1.1概述
本仪器用于公司新产品研制、开发、生产。
为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，对该仪器进行了验证。
仪器名称：
高效液相色谱仪仪器负责人：
仪器型号：
LC-05P仪器编号：
生产厂家：
******分离科学技术公司
仪器所在部门和房间：
办公、质检楼三楼精密仪器室
1.2资料档案
资料名称
档案编号
存放地点
使用说明书
LC－10液相色谱仪
资料室
合格证
LC－10液相色谱仪
资料室
使用记录
LC－10液相色谱仪
资料室
维修保养记录
LC－10液相色谱仪
资料室
备件清单
LC－10液相色谱仪
资料室
2技术特性
2.1备件
品名
生产厂家
数量
存放处
D2灯
色谱柱
维修工具
2.2技术参数
○流量范围：
0.01ml/min～4.99ml/min（以0.01ml/min增量调节）
○流量准确度：
≤±3%（以蒸馏水为标准）
○流量精确度：
≤±0.3%（以蒸馏水为标准）
○压力范围：
≤35.5Mpa（流量0.01～5ml/min）
○压力脉动：
±0.05Mpa
○压力显示精度：
0.1Mpa
○光源：
氘灯
○光路系统：
双光路光栅单色仪
○接收器：
光电二级管
○波长范围：
190～600nm
○波长精确度：
±1.0nm
○谱带宽度：
8nm
○基线噪声：
≤±1.0×10-4AU
○基线漂移：
≤±5.0×10-4AU/hr
○最小检测量：
1.0×10-8g/ml（样品为萘）
3一般状况
仪器采购符合采购质量要求，安装符合本公司GMP及供货商提出的要求。
（二）功能性试验
1LC-05P高压恒流泵
1.1流量准确度
可执行标准：
<±3%
流量设定值（ml/min）
1.0
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
10分钟收集量（g）
收集量计算查表后的体积（ml）
实际每分钟流出量（ml/min）
流量准确度（%）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
1.2流量精确度
可执行标准：
＜±0.3%（0.997ml/min～1.003ml/min）
次数
1
2
3
4
5
10分钟收集量（g）
收集量计算查表后的体积（ml）
实际每分钟流出量（ml/min）
流量稳定度（%）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
1.3压力范围
可执行标准:
±0.2MPa+设定值
压力设定值
10.0MPa±0.2MPa
20.0MPa±0.2MPa
30.0MPa±0.2MPa
泵运行状态
结论:
试验者:
日期:
年月日
复核者:
日期:
年月日
2LC-10UN紫外可变波长检测器
2.1噪声与漂移
可执行标准：
噪声＜±1.0×10-5AU（250nm），漂移＜±5.0×10-4AU/hr
测试结果见图谱
（1）
结论:
试验者:
日期:
年月日
复核者:
日期:
年月日
2.2重复性（定性重复性及定量重复性）
可执行标准:
定性重复性RSD≤1%,定量重复性RSD≤2%
A、定性重复性
取两组分保留时间差进行计算。
次数
1
2
3
4
5
组分1保留时间
组分2保留时间
组分1与组分2保留时间差
RSD
B、定量重复性
取两组分峰面积比进行计算。
次数
1
2
3
4
5
组分1峰面积
组分2峰面积
组分1与组分2峰面积比
RSD
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
2.3最小检出量
可执行标准：
检出量为1.0×10-8g/ml,以萘为样品。
测试结果见图谱（7）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
（三）、校正
1、计量部门的校正
检定单位：
检定证书编号：
检定日期：
年 月 日
2、检验室的校正
流量校正
流量设定值（ml/min）
1.0
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
10分钟收集量（g）
收集量计算查表后的体积（ml）
实际每分钟流出量（ml/min）
流量精度（%）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
（四）、适用性预试验
可执行标准：
含量测定的相对偏差应不得过3.0%
检验项目：
乌鸡白凤丸含量测定。
样品批号：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇—水（33：
67）为流动相；检测波长为230nm。
理论板数按芍药苷峰计应不低于2000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取乌鸡白凤丸小蜜丸，研细，取约5g，精密称定，精密加入30％乙醇25ml，称定重量，时时振摇，静置24小时，超声处理30分钟（功率300W，频率50kHz），放冷，再称定重量，加30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
精密量取续滤液5ml，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高12cm），用30％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水5ml分次使溶解，转移至25m1量瓶中，容器用甲醇适量多次洗涤，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得供试品中芍药苷（C23H28O11）的含量。
标示含量%=[（Ar·C·S）/（Ai·Wr·1000）]×100%
式中：
Ar、AI---分别为样品与对照品峰面积；
Wr---为样品重量（g）；
C----为对照品浓度；
S----为供试品稀释倍数。
样品重（g）:
（1）
（2）（3）
样品与对照品峰面积见图谱。
计算：
标示含量
（1）
标示含量
（2）
标示含量（3）
计算相对偏差允许偏差≤3.0%。
结论：
试验者:
日期:
年月日
复核者：
日期：
年月日
（五）、再确认
1线路连接：
检查线路，接地。
2清洁：
清洁仪器外部
3检查:
色谱柱参数是否降低，润滑是否良好。
4功能性试验
1LC-05P高压恒流泵
1.1流量准确度
可执行标准：
<±3%
流量设定值（ml/min）
1.0
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
10分钟收集量（g）
收集量计算查表后的体积（ml）
实际每分钟流出量（ml/min）
流量准确度（%）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
1.2流量精确度
可执行标准：
＜±0.3%（0.997ml/min～1.003ml/min）
次数
1
2
3
4
5
10分钟收集量（g）
收集量计算查表后的体积（ml）
实际每分钟流出量（ml/min）
流量稳定度（%）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
1.3压力范围
可执行标准:
±0.2MPa+设定值
压力设定值
10.0±0.2MPa
20.0±0.2MPa
30.0±0.2MPa
泵运行状态
结论:
试验者:
日期:
年月日
复核者:
日期:
年月日
2LC-10UV紫外可变波长检测器
2.1噪声与漂移
可执行标准：
噪声＜±0.35×10-5AU（250nm），漂移＜±2.0×10-4AU/hr
测试结果见图谱
（1）
结论:
试验者:
日期:
年月日
复核者:
日期:
年月日
2.2重复性（定性重复性及定量重复性）
可执行标准:
定性重复性RSD≤1%,定量重复性RSD≤2%
A、定性重复性
取两组分保留时间差进行计算。
次数
1
2
3
4
5
组分1保留时间
组分2保留时间
组分1与组分2保留时间差
RSD
B、定量重复性
取两组分峰面积比进行计算。
次数
1
2
3
4
5
组分1峰面积
组分2峰面积
组分1与组分2峰面积比
RSD
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
2.3最小检出量
可执行标准：
检出量为1.0×10-8g/ml,以萘为样品。
测试结果见图谱（7）
结论：
试验者：
日期：
年月日
复核者：
日期：
年月日
5工作日记：
每次试验均应作操作者，日期和所有结果的记录。
二、验证结果及总体评价
通过对LC-05P高效液相色谱仪进行安装确认、校正、适用性预试验、再确认等一系列验证工作，均达到预定的标准要求，该仪器可正式投入使用。
三、再验证计划
再验证项目
周期
1
每年一次
2
每次试验
3
每月一次
4
每年一次
5
每次试验
四、确立的正式文件
序号
文件名称
文件
编号
批准人
批准
日期
生效
日期
归属部门
01
高效液相色谱仪标准操作程序
JYG07-09031
品质部
02
高效液相色谱法
JYG05-09077
品质部
03
乌鸡白凤丸检验规程
CPB05-09020
品质部
04
仪器、仪表使用记录
JHP03-09064
品质部
五、验证报告的审查
审查人
所在部门
审查意见
签名
日期
起草人：
日期：
年月日
六、审批意见
该仪器验证合格，同意发放验证证书。
批准人：
日期：
升级会员 