XE2100 SOP文件.docx

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XE-2100血液分析仪

【检验方法】SYSMEXAUTOMATEDMEMATOLOGYANALYZER（XE-2100）

【原理】

1．XE-2100采用一束半导体激光照射标本，并依据每个细胞产生的三种信号来相互区分，即前向散射光，侧向射散光和侧向光和侧向荧光。

前向散射光反映细胞体积，侧向散射光反映细胞内涵物，如核和颗粒，侧向荧光反映细胞脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。

2．DIFF通道：

表面活性剂可完全溶解红细胞和血小板，部分溶解白细胞。

第2种试剂使核酸染上颜色。

XE-2100的DIFF通道可将白细胞分成4类。

在STROMATOLYSER-4DL试剂中的表面活性剂可溶解或破坏红细胞和血小板，并在白细胞膜上打出小孔。

在STROMATOLYSER-4DL试剂中的聚次甲基染料可进入破损白细胞，与核酸和细胞器结合，经波长633nm的激光照射，所产生荧光强度与细胞核酸含量成一定比例。

在在STROMATOLYSER-4DL试剂中的有机酸能与嗜酸性颗粒特异结合，根据侧向散射光信号强度，能提高嗜酸性粒细胞从中性粒细胞区分出来能力。

3．WBC/BASO通道：

在XE-2100中，此通道运用前向和侧向散射光信号。

酸性试剂可引起除嗜碱性粒细胞外的红细胞（影红细胞）、血小板（影血小板）和白细胞（裸核）溶解和皱缩。

因而此通道可检测白细胞数和嗜碱性粒细胞数。

在STROMATOLYSER-FB试剂中的表面活性剂作用细胞可形成影红细胞，影血小板和除嗜碱性粒细胞外的裸核白细胞。

根据前向散射光信号，使嗜碱性粒细胞和其他细胞容积差异而区分。

前向散射光强度代表细胞体积，侧向散射光代表细胞殘余物复杂性。

嗜碱性粒细胞形成独立群体。

核殘余物也可从影细胞中区分出来。

嗜碱性粒细胞和裸核数之和代表白细胞总数。

有核红细胞也包括在内。

4．NRBC通道：

在NRBC通道中，表面活性剂可使红细胞和血小板皱缩，使白细胞和有核红细胞核酸染色。

XE-2100应用半导体激光束照射标本，根据侧向荧光和侧向散射光信号来计数有核红细胞。

在在STROMATOLYSER-NR试剂中表面活性剂可溶解红细胞膜，仅留下有核红细胞核，白细胞膜不被溶解，胞质完整。

在STROMATOLYSER-4DL试剂中的聚次甲基荧光染料，可渗入白细胞胞膜，使细胞器染上颜色。

根据荧光强度的差异可将细胞分成2组，根据前向散射光信号、容积差异可将有核红细胞和影细胞区分出来。

【】：

SYSMEXXE-2100自动血液分析仪

四、试剂：

1、稀释液：

CELLPACK（PK-30L）

氯化钠6.38g/L

硼酸1.0g/L

四硼酸钠0.2g/L

EDTA-2K0.2g/L

2、Hb溶血素：

SULFOLYSER（SLS-200A）

月桂洗硫酸钠1.7g/L

3、WBC四分类试剂：

STORMATOLYSER4DL（FFD-200A）

非离子表面活性剂0.18%

有机季铵盐0.08%

4、嗜碱试剂：

STORMATOLYSERFB（FBA-200A）

非离子表面活性剂0.4%

5、WBC分类染液：

STORMATOLYSER4DS（FFS-800A）

聚次甲基染料0.002%

甲醇3.0%

1,2-亚乙基二醇96.9%

5、鞘液：

CELLSEATH（SE-90L）

氯化钠7.1g/L

氨丁三醇缓冲液2.0g/L

乙二胺四乙酸二钠0.2g/L

表面活性剂0.8g/L

.7、幼稚细胞试剂：

STORMATOLYSERIM（SIM-220A）

氢氧化钠0.03%

氯化钠0.41%

非离子表面活性剂2.4%

8、网织红细胞染液：

REDSEARTHⅡ（RED-700A）

稀释缓冲液

氨丁三醇缓冲液0.18%

染色液

1,2亚乙基二醇92.8%

甲醇7.1%

聚次甲基染料0.03%

9、清洗液：

STACCLEANER-SYS

次氯酸盐5%

五、操作步骤：

1．打开电脑，单击OK，同时按下Ctrl，Alt及Delete键进行登录。

2．在登录框中单击OK，出现XE-2100登录信息，在用户名一栏中键入“admin”，并单击OK。

3．检查废液是否已满，并倒空。

4．开主机电源并进行登录。

5．仪器进行自动冲洗及本底检测，如本底在范围以内，主机屏幕上将出现登录信息。

如本底超出正常范围，将出现错误提示。

需要在登录完成后，再次进行自动冲洗。

6．按一下主机上的NUM/ALPH鍵切换为字符输入，然后，在登录名一栏中鍵入“ADMIN”，登录操作菜单。

7．每天测试质控全血，从冰箱取出质控全血，包括e-check三支，临检中心质控品一支，室温放置10分钟后检测。

选择QC，分别选中相应质控全血的批号，以手工进样方式检测各质控品，每次检测结束选择OK确认，在主机电脑上观察质控结果，如在靶值范围，则可进行样本测试；如失控则需寻找失控原因，解决后再重做质控，各参数完全在控方可检测样本。

8．标本检测：

选sampler键，以架号为1，位置号为1，起始样本号为1001，检测方式为自动进样，检测参数为CBC+DIF,将样本依次放入样本架内，选sampler即开始检测。

9．开始分析标本。

六、参考范围：

1．

（1）白细胞（WBC）计数：

成人（4–10）×109/L

儿童（5-12）×109/L

新生儿（15-20）×109/L

（2）白细胞分类（成人）：

中性粒细胞50-70%

淋巴细胞20-40%

嗜酸性粒细胞0.5-5%

嗜碱性粒细胞0-1%

单核细胞3-8%

2．红细胞（RBC）：

男（4-5.5）×1012/L

女（3.5-5）×1012/L

新生儿（6-7）×1012/L

3．血红蛋白（HGB）：

男120-160g/L

女110-150g/L

新生儿170-200g/L

4．血小板（PLT）：

（100-300）×109/L

5．血球压积（HCT）：

男0.42-0.49L/L

女0.37-0.43L/L

6．平均红细胞体积（MCV）：

82-95fl

每升血液中血细胞比容（L/L）×1015

MCV（fl）=每升血液中红细胞总数

7．平均红细胞血红蛋白含量（MCH）：

27-31pg

每升血液中血红蛋白浓度（g/L）

MCH（g/L）=

每升血液中红细胞总数

8．平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）：

320-360g/L

每升血液中血红蛋白浓度（g/L）

MCHC（g/L）=

每升血液中血细胞比容（L/L）

9．RDW-CV、RDW-SD：

RDW-CV：

11.6%-14.0%；

RDW-SD：

39.0-46.0fL。

10．PDW：

（15.5-18.1）%

MPV（9.4-12.5）fl；

P-LCR（13-43）％。

七、临床意义：

1．白细胞

（1）白细胞计数

①生理性增加新生儿、运动、饭后、冷水浴后、疼痛、月经期、受寒、妊娠、分娩、阵发性心动过速、阳光或紫外光照射、抽搐、恶心、呕吐、麻醉等。

②病理性增加类白血病、白血病、急性化脓性细菌感染、急性溶血、急性失血、单核细胞增多症、淋巴细胞增多症、真性红细胞增多症、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴瘤、组织坏死、手术后、肿瘤转移、药物中毒、代谢性酸中毒、过敏等。

③减少伤寒、副伤寒、斑疹伤寒、兔热病、布鲁杆菌热、流感、麻疹、风疹、革登热、传染性肝炎（亦可增多）、疟疾、过敏性休克、系统性红斑狼疮、粟粒性结核、败学症、重症细菌感染、恶液质、放射治疗、肿瘤化疗。

恶性贫血、非白细胞性贫血、再生障碍性贫血、脾功能亢进、戈谢病、Felty综合症、Che^diak-Higashi综合症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。

（2）白细胞分类计数：

见下表

各种白细胞增多、减少的临床意义

细胞类别增多减少

中性粒细胞类白血病、白血病、化脓性细胞感染、伤寒、副伤寒、流感、麻疹、再溶血性贫血、急性出血、急性溶血、手生障碍性贫血、黑热病、病毒感

术后、恶性肿瘤、组织损伤、皮肤病、染、原虫感染、病毒性肝炎、脾

真性红细胞增多症、脾切除术后。

功能亢进、贫血、原发性中性粒

细胞减少症、肝硬化

嗜酸性粒细胞参见嗜酸性粒细胞计数

嗜碱性粒细胞慢粒、何杰金病、癌转移、铅和铋中毒等。

淋巴细胞百日咳、传染性单核细胞增多急性感染、粟粒性结核、晚期肿瘤、

症、淋巴细胞性白血病、传染艾滋病、伴T淋巴细胞减少的免性淋巴细胞增多症、病毒性缺陷

肝炎、弓形虫病

单核细胞单核细胞性白血病、系统性红斑狼疮、使用皮质类固醇激素、再生障碍性亚急性细菌性心内膜炎、活动性结核、贫血、多毛细胞白血病.

急性感染恢复期、原虫感染

2．红细胞（RBC）：

①生理性减少见于妊娠中后期、6个月至2岁的婴儿等。

②病理性减少造血原料不足、造血功能障碍、红细胞破坏过多或失血所引起的各种[贫血。

③相对性增多主要因血浆容量减少所致，见于脱水、呕吐、腹泻、多尿、多汗、大面积烧伤、吸烟、高血压、肥胖等。

④代偿性增多主要见于缺氧、新生儿、高原环境、CO中毒、严重肺气肿、肺源性心脏病、先天性心脏病、心衰等。

⑤绝对性增多克隆性真性红细胞增多；非隆性红细胞增多，与促红细胞生成素产生过多有关，见于肾癌、肝细胞癌、雄激素分泌细胞肿瘤、肾囊肿、肾盂积水、肾移植、小脑血管瘤、子宫肌瘤。

3、血红蛋白（HCG）：

生理性增加：

新生儿、高原居住者。

病理性增加：

真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症（如先天性青紫性心脏病、慢性肺性疾病、脱水）。

减少：

各种贫血、白血病、产后、手术后、大量失血。

4．红细胞比积（HCT）：

与红细胞计数、血红蛋白测定的意义类同。

5．血小板（PLT）：

（1）生理性正常人血小板在一天内可有6%-10%变化；表现为早晨低，午后较高；春季低，冬季略高；平原较低，高原较高；静脉血比毛细血管血高10%；月经前低，后升高；妊娠中晚期升高，分娩后减低；运动后升高，休息后恢复。

（2）病理性

减少：

除创伤之外，血小板减少是引起出血的常见原因。

常见疾病有：

①、血小板生成障碍，如急性白血病、再生障碍性贫血；②、血小板破坏过多，如ITP、脾功能亢进，系统性红斑狼疮；③、血小板消耗过多，如DIC、血栓性血小板减少性紫癜。

增多（血小板大于400×109/L）：

①、骨髓增生性疾病：

慢性粒细胞白血病，真性红细胞增多症；②、原发性血小板增多症；③、急性大出血，急性溶血，急性化脓性感染；④、脾切除手术后。

6．MCV、MCH、MCHC

主要用于贫血的形态学分类，见下表

贫血的形态学分类

MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）

大红细胞性贫血100-16035-50310-370

正红细胞性贫血80-10027-35310-370

单纯小细胞性贫血72-8021-26300-370

小细胞低色素性贫血50-8012-30240-300

7．RDW-CV、RDW-SD：

（1）用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时RDW增大，经治疗后可恢复正常。

（2）用于小细胞低色素性贫血的鉴别，缺铁性贫血时RDW增大，而轻型珠蛋白生成障碍性贫血时RDW正常。

（3）RDW与MCV结合可将贫血分为6种。

①小细胞均一性：

MCV下降，RDW正常，如轻型珠蛋白生成障碍性贫血。

②小细胞不均一性：

MCV下降，RDW增大，如缺铁性贫血。

③正常细胞均一性：

MCV、RDW均正常，如某些慢性疾病。

④正常细胞不均一性：

MCV正常，RDW增大，如早期缺铁性贫血。

⑤大细胞均一性：

MCV增大，RDW正常，如再生障碍性贫血。

⑥大细胞不均一性：

MCV、RDW均增大，如巨幼细胞性贫血。

8．MPV、PDW、P-LCR

①MPV其临床意义要结合PLT的变化才有价值。

①、鉴别血小板减少的原因：

当骨髓造血功能损伤致血小板减少时，MPV减少；当血小板在周围血液中破坏增多时，导致血小板减少，MPV增大；血小板分布异常致血小板减少时，MPC正常。

②、MPV增大可作为骨髓造血功能恢复的较早期指征：

骨髓造血功能衰竭时，MPV与PLT同时持续下降；造血功能抑制越严重，MPV越小；当造血功能恢复时，MPV增大常先于PLT升高。

③、其它：

MPV增大见于骨髓纤维化、ITP、血栓性疾病及血栓前状态、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、镰刀细胞性贫血；MPV减小见于脾亢、化疗后、AA、巨幼细胞性贫血等。

②PDW是反映血小板体积大小的异质性参数，增大见于急淋化疗后、巨幼细胞性贫血、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、血栓性疾病等；可用于鉴别原发性血小板增多症和反应性血小板增多症，前者PDW增加，后者PDW正常。

③P-LCR代表血小板计数中体积>12fL的血小板的比值或数量，有助于识别堆集血小板、大血小板和细胞碎片，并可监测骨髓的造血功能。

八、标本采集：

随机采取病人静脉血，用40g/LEDTA-K2抗凝（50ul抗凝1ml血，相当于2mgEDTAK2/1ml血）。

九、注意事项：

1、血细胞计数应用EDTA-K2为抗凝剂，用量为EDTA-K2*2H2O1.5—2.0mg可抗凝1ml血不能用肝素或枸橼酸钠等抗凝剂。

2、采集后在室温中贮存不应超出6h；如需制用血涂片应在2h内完成。

3、测定前抗凝血应充混匀，任何小凝块或血小板聚集均会影响血细胞计数。

4、注意病理因素对血液分析仪使用的影响，特别是各系统的报警提示。

如是否有大血小板对血小板计数的影响；有无有核红细胞对白细胞计数的影响等等。

5、如有冷凝集现象，将血置37℃水浴箱10min后立即测试。

十、质量控制：

1．每日工作开始应先做sysmex质控或临床检验中心的全血质控品，。

2．出现失控，应校正后并重做质控，直至符合质控要求。

3．按要求做好仪器校正和仪器对比工作。

4．做好质控、失控和校正登记。

十一、报告复查：

对以下情况的样本进行复查（仪器及手工）；

1．首次检测白细胞低于3.0×109/L，血小板低于50×109/L。

2．白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板结果与历史结果有明显差异。

3．红细胞数与血红蛋白明显不符。

4．严重贫血者加做网织红细胞。

5．显微镜复检：

（1）临床要求手工镜检或申请外周血查异常细胞的标本。

（2）仪器不报白细胞分类结果。

（3）白细胞分类出现以下警号：

Blasts?

、ImmatureGran?

、LeftShift?

、且IG大于0.5%或单核细胞大于10%或othercell大于0.5%。

十二、复检方法

（一）白细胞计数:

原理：

血液经稀酸溶液稀释后，红细胞被破坏，放入血细胞计数池内，置显微镜下计数，求得每微升中的白细胞数。

试剂：

冰醋酸　　　　　10ml

蒸馏水　　　　加至500ml

10g/L美蓝3滴

器材：

20微升吸管，血细胞计数板，显微镜。

操作：

加计数试剂0.38ml于小试管内，取血20微升吹入试剂，混匀。

静置1-2分钟。

低倍计数，计数4角得4大方格，计数总数乘以50即为白细胞/微升。

（二）血小板计数:

原理：

血液用血小板计数试剂稀释后，在显微镜下计数。

试剂

1.草酸铵稀释液草酸铵1.0g，乙二胺四乙酸二钠0.014g,40%甲醛溶液0.1ml加水至100ml，加亚甲蓝少许，过滤后置冰箱备用。

2.许汝和稀释液尿素9g，乙二胺四乙酸二钠0.5g，巴比妥钠0.3g，加蒸馏水水至100ml，过滤后置冰箱备用。

3.Barr稀释液白皂素0.25g，枸橼酸钠3.5g，煌焦油蓝0.1g，40%甲醛溶液1.0ml，加水至100ml，过滤后置冰箱备用。

操作

1.选上述任一试剂（本科室用2液），每管加0.38ml，加入全血20微升，充分混匀。

2.用改良牛鲍计数板，将血液稀释液充池后，置于有滤纸得培养皿内，放置至少10min，待血小板沉降后计数。

3.计数中央大方格内5个中方格得血小板数，其结果乘1000，即得每微升血液中血小板数。

（三）红细胞计数

原理：

血液经等渗液稀释后，放入血细胞计数池内，置显微镜下计数，求得每升血液中的红细胞数。

方法：

试管法。

试剂：

氯化钠　　　　　1.0g，

结晶硫酸钠　　　0.5g，

氯化高汞　　　　0.5，

蒸馏水　　　　200ml。

操作方法

1．用血红细胞吸管吸取血液10μl，吹入含有2ml红细胞稀释液试管中，反复吸取上层液数次。

2．用毛细吸管吸取稀释的血液，滴入计数池内，要一次完成，静止2分钟，待红细胞完全下沉后，移入显微镜下用高倍镜计数，计数一个大方格内四周四个中方格和中间一个大方格内的红细胞数。

4．将五个中方格中的红细胞数除以100即为每升血液中的红细胞数。

（四）手工白细胞分类计数:

㈠、原理

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。

㈡、试剂

瑞姬氏复合染色液

Ⅰ液：

取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液。

再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。

如此连续几次，共用甲醇500ml。

收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，以后存放一周即能使用。

Ⅱ液：

pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液

磷酸二氢钾（无水）6.64g

磷酸二氢钠（无水）2.56g

加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml

㈢、操作

1.采血后推制厚薄适宜的血膜片应呈舌状，头、体、尾清晰可分。

2.推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。

天气寒冷或潮湿时，应于37℃温箱中促干，以免细胞变形缩小。

3.染色。

平置玻片于染色架上，滴加染液3-5滴，使其迅速盖满血膜，约1分钟后，滴加缓冲液5-10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混合，5-1分钟后用冲去染液，待干。

4.选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值（百分率）。

十二、参考文献：

1、叶应妩、王毓三主编，《全国临床检验操作规程》第二版，1997.1

2、上海市卫生局、中华医学会上海分会编著.实验室诊断与基础治疗常规.上海科学技术出版社,1998.10

3、SYSMEXXE-2100操作手册

4、寇丽筠，陈宏础主编.临床基础检验学.第二版.人民卫生出版社,2001.1

5、庄威远主编.临床血液学检验,吉林医学院科研处,1998

6、陈允硕,周华文等主编.实用检验医学指南.上海科学普及出版社,2000.12

7、熊立凡、金大鸣、胡晓波主编，《现代一般检验与临床实践》1，98.12