1简述生物分离过程的特点.docx
《1简述生物分离过程的特点.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《1简述生物分离过程的特点.docx（29页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
1简述生物分离过程的特点
简答题
1.简述生物分离过程的特点。
答：
（1）产品丰富：
产品的多样性导致分离方法的多样性；
（2）绝大多数生物分离方法来源于化学分离；
（3）生物分离一般比化工分离难度大：
※成分复杂；
※悬液中的目标产物浓度低；
※生物活性条件相对温和；
※生物产品要求高质量；
※获得高纯度的干燥产品；
※卫生。
因此，生物分离过程往往成本很高，在某些产品的生产过程中，分离成本可能占到总成本的80％以上。
（补充：
常无固定操作方法可循；生物材料组成非常复杂；分离操作步骤多，不易获得高收率；培养液（或发酵液）中所含目的物浓度很低，而杂质含量却很高；分离进程必须保护化合物的生理活性；生物活性成分离开生物体后，易变性、破坏；基因工程产品，一般要求在密封环境下操作。
）
2.简述超临界流体萃取的原理及其特点。
答：
超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。
利用超临界流体的特殊性质，使其在超临界状态下，与待分离的物料接触，萃取出目的产物，然后通过降压或升温的方法，使萃取物得到分离。
其特点是密度接近液体，萃取能力强；粘度接近气体，传质性能好；且安全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。
3.常用的蛋白质沉淀方法有哪些？
简述其作用机理。
（１）有机溶剂法：
破坏蛋白质分子的水化层，使之聚集成更大的分子团而沉淀。
（２）盐析：
破坏蛋白质分子水化层，电荷中和，使之聚集成更大的分子团。
（３）化学沉淀法：
通过化学试剂与目的产物形成新的化合物，改变溶解度而沉淀。
4.何谓ELISA？
简述其分析过程。
答：
ELISA即酶联免疫吸附测定，是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用结合起来，灵敏性很高的一种新型的免疫酶测定技术。
ELISA过程是在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板中进行的，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
抗原吸附在固相载体上被称为包被，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成“抗原-待测抗体-酶标记抗体”的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物，待测抗体的定量与有色物质产生成正比，因此借助分光分度仪计测定其吸光度，可计算出抗体的量。
5.结合SDS-PAGE电泳的分离原理说明未知蛋白质分子量的测定方法。
答:
SDS-PAGE是凝胶电泳的一种，其分离原理是基于不同分子量的蛋白质（亚基）在电场中的迁移率不同，因此利用该技术测定未知蛋白质（亚基）的分子量是十分方便的，具体的方法是利用标准分子量MARK，与样品一同电泳，染色后根据标准分子MARK中已知分子量蛋白质的迁移率与其分子量的对数值作图，可得一标准曲线并拟合方程，再结合未知蛋白质的迁移率即可计算得到大致的分子量。
6.常用的层析方法有哪些？
请叙述其分离原理。
⑴离子交换层析（IEC）
基本原理：
通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分离的目的。
⑵疏水色谱（HIC）
基本原理：
主要是利用蛋白质分子表面上的疏水区域和介质中的疏水基团之间的相互作用，无机盐的存在能使相互作用力增强。
⑶亲和层析（AC）
基本原理：
是利用固定化配基与目的蛋白质之间特异的生物亲和力进行吸附，如抗体与抗原、受体与激素、酶与底物之间的作用。
⑷凝胶过滤
基本原理：
是以具有大小一定的多孔性凝胶作为分离介质，小分子能进入孔内，在柱中缓慢移动，而大分子不能进入孔内，快速移动，利用这种移动差别可使大分子与小分子分开。
7.何谓萃取的分配系数？
其影响因素有哪些？
分配系数：
在一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后，在两相中的浓度之比为一常数，这个常数称为分配系数。
乳化作用。
pH值：
影响弱酸或弱碱药物的分配系数和药物的稳定性。
温度和时间：
药物的稳定性、分配系数。
盐析作用：
盐析剂与水分子结合，游离水分子减少，药物在水相中溶解度降低，易转入有机相；降低有机溶剂在水中的溶解度；萃余相比重增大，利于分相。
溶剂的种类和用量及萃取方式。
基因工程
001基因工程操作的三大基本元件是【】
I供体II受体III载体IV抗体V配体
ＡI+II+III
ＢI+III+IV
ＣII+III+IV
ＤII+IV+V
ＥIII+IV+V
002根据当今生命科学理论，基因工程的用途是【】
I分离纯化基因II大量生产生物分子III构建新型物种IV提高基因重组效率
ＡI+II+III
ＢI+II+IV
ＣI+III+IV
ＤII+III+IV
ＥI+II+III+IV
003基因工程的三大理论基石是【】
Ａ经典遗传学、细胞生物学、微生物学
Ｂ分子遗传学、分子生物学、生化工程学
Ｃ动物学、植物学、微生物学
Ｄ生物化学、生化工程学、化学工程学
Ｅ生理学、仿生学、免疫学
004根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【】
Ａ基因诱变
Ｂ分子克隆
ＣDNA重组
Ｄ遗传工程
Ｅ基因无性繁殖
005基因工程的单元操作顺序是【】
Ａ增，转，检，切，接
Ｂ切，接，转，增，检
Ｃ接，转，增，检，切
Ｄ检，切，接，增，转
Ｅ切，接，增，转，检
006生物工程的上游技术是【】
Ａ基因工程及分离工程
Ｂ基因工程及发酵工程
Ｃ基因工程及酶工程
Ｄ基因工程及细胞工程
Ｅ基因工程及蛋白质工程
007基因工程作为一种技术诞生于【】
Ａ上世纪50年代初
Ｂ上世纪60年代初
Ｃ上世纪70年代初
Ｄ上世纪80年代初
Ｅ上世纪90年代初
008利用基因工程扩增基因是依据【】
Ａ基因定向重排
Ｂ强化启动基因
Ｃ增强子重组
ＤSD顺序的存在
Ｅ载体自主复制
009第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【】
Ａ生长激素（Growthhormone）
Ｂ胰岛素（Insulin）
Ｃ干扰素（Interferon）
Ｄ白细胞间溶菌素（Interleukin）
Ｅ生长激素释放抑制素（Somatostatin）
010下列有关基因的叙述，错误的是【】
Ａ蛋白质是基因表达的唯一产物
Ｂ基因是DNA链上具有编码功能的片段
Ｃ基因也可以是RNA
Ｄ基因突变不一定导致其表达产物改变结构
Ｅ基因具有方向性
011限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是【】
Ａ修复自身的遗传缺陷
Ｂ促进自身的基因重组
Ｃ强化自身的核酸代谢
Ｄ提高自身的防御能力
Ｅ补充自身的核苷酸消耗
012天然PstI限制性内切酶的来源是【】
ＡBacillusamyloliquefaciens
ＢEscherichiacoli
ＣHaemophilusinfluenzae
ＤProvidenciastuartii
ＥStreptomyceslividans
013根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成【】
Ａ2大类
Ｂ3大类
Ｃ4大类
Ｄ5大类
Ｅ6大类
014下列五个DNA片段中含有回文结构的是【】
ＡGAAACTGCTTTGAC
ＢGAAACTGGAAACTG
ＣGAAACTGGTCAAAG
ＤGAAACTGCAGTTTC
ＥGAAACTGCAGAAAG
015下列五个DNA片段，最可能含有SstI酶切位点的是【】
ＡGGAGAGCTCT
ＢGAGCACATCT
ＣCCCTGTGGGA
ＤATCCTACATG
ＥAACCTTGGAA
016从dam型大肠杆菌受体细胞中分离出的质粒DNA能被BamHI、BglII和Sau3AI降解（如果上述酶切位点存在），但对BclI和MboI不敏感（尽管上述酶切位点存在），其原因是【】
ＡDam甲基化酶使BclI和MboI识别序列甲基化，但对BamHI、BglII以及Sau3AI不起作用
ＢDam甲基化酶既可使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，也可使胞嘧啶C5甲基化，这两种甲基化作用对限制性内切酶活性的影响不同
ＣDam甲基化酶能使所有5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，但不同的限制性内切酶对这种甲基化作用的敏感性不同
ＤDam甲基化酶的作用位点在5'-GATC-3'序列内部，但该酶与DNA靶序列的结合还依赖于5'-GATC-3'序列左右两端的其它碱基组成
ＥDam甲基化酶既能使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6单甲基化，也能使其双甲基化，只有后者才能抵御相应限制性内切酶的切割作用
017T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是【】
Ａ2'-OH和5'-P
Ｂ2'-OH和3'-P
Ｃ3'-OH和2'-P
Ｄ3'-OH和5'-P
Ｅ5'-OH和3'-P
018下列DNA片段中，通过加热并用S1核酸酶处理即可使DNA断裂的是【】
ＡCCGATCAAGCTGTTCCCGGAGGTGCCCGCCCTAAGGAGACTCGGT
GGCTAGTTCGACAAGGGCCTCCACGGGCGGGATTCCTCTGAGCCA
ＢAAGGTCGGCGGGTTCCCACCCGTGAGCATCGGGCCTTGCCGTTAT
TTCCAGCCGCCCAAGGGTGGGCACTCGTAGCCCGGAACGGCAATA
ＣTATGATCATCCGCCGGGTGTCACTGATCCATGGCCCAAGGGTTTC
ATACTAGTAGGCGGCCCACAGTGACTAGGTACCGGGTTCCCAAAG
ＤGAGGATCCCTTTGCGATTCACCTAGGGTATCTCTGTAGGGCCTAG
CTCCTAGGGAAACGCTAAGTGGATCCCATAGAGACATCCCGGATC
ＥGCATCGGCCCCCGGTAAATATTCTCGGGGCGGGTAGCCGCCTAGT
CGTAGCCGGGGGCCATTTATAAGAGCCCCGCCCATCGGCGGATCA
019Bal31工具酶是一种【】
Ａ只切双链DNA的外切酶
Ｂ双链单链DNA均切的外切酶
Ｃ双链单链DNA和RNA均切的外切酶
Ｄ双链单链RNA均切的外切酶
Ｅ只切双链RNA的外切酶
020下列有关连接反应的叙述，错误的是【】
Ａ连接反应的最佳温度为37℃
Ｂ连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%
Ｃ连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mM
Ｄ连接酶通常应过量2-5倍
ＥDTT可以维持连接酶的结构
021某一质粒的多克隆位点上含有下列单一限制性内切酶识别序列：
AluI、BglII、ClaI、DpnI、EcoRV，若将含有EcoRI粘性末端的外源基因克隆在这个质粒上，并保留EcoRI酶切位点，则合适的插入位点是【】
ＡAluI
ＢBglII
ＣClaI
ＤDpnI
ＥEcoRV
022若将含有5'末端4碱基突出的外源DNA片段插入到含有3'末端4碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是【】
IT4-DNA聚合酶IIKlenowIIIT4-DNA连接酶IV碱性磷酸单酯酶
ＡIII
ＢI+III
ＣII+III
ＤI+II+III
ＥI+II+III+IV
023若载体DNA用M酶切开，则下列五种带有N酶粘性末端的外源DNA片段中，能直接与载体拼接的是【】
M N
ＡA/AGCTTT/TCGAA
ＢC/CATGGACATG/T
ＣCCC/GGGG/GGCCC
ＤG/GATCCA/GATCT
ＥGAGCT/CG/AGCTC
024下列各组分别用两种不同的限制性内切酶切开的DNA片段经补平并连接后，其重组分子内能产生ClaI限制性内切酶酶切位点的是【】
ＡBglII/BamHI
ＢHindIII/BamHI
ＣMluI/BamHI
ＤSpeI/BamHI
ＥXbaI/BamHI
025质粒DNA和外源DNA各用两种限制性内切酶切开，经连接转化后获得重组子。
下列各组重组子中有可能含有两种相反基因极性的是【】
ＡApaI/ClaI
ＢBamHI/BglII
ＣBclI/SmaI
ＤHindIII/KpnI
ＥSphI/PstI
026提高重组率的方法包括【】
I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间
ＡI+II
ＢI+II+III
ＣI+III+IV
ＤII+III+IV
ＥI+II+III+IV
027载体的功能是【】
I运送外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力
ＡI
ＢI+II
ＣI+III
ＤII+III
ＥI+II+III
028下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是【】
Ａ质粒是共价环状的双链DNA分子
Ｂ天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列
Ｃ质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制
Ｄ松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增
Ｅ质粒并非其宿主细胞生长所必需
029带有多个不同种复制起始区的质粒是【】
Ａ穿梭质粒
Ｂ表达质粒
Ｃ探针质粒
Ｄ整合质粒
Ｅ多拷贝质粒
030多聚接头（Polylinker）指的是【】
Ａ含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工DNA片段
Ｂ含有多种复制起始区的人工DNA片段
Ｃ含有多种SD顺序的人工DNA片段
Ｄ含有多种启动基因的人工DNA片段
Ｅ含有多种特定密码子的人工DNA片段
031l-DNA体外包装的上下限是天然l-DNA长度的【】
Ａ25-50%
Ｂ50-100%
Ｃ75-100%
Ｄ75-105%
Ｅ100-125%
032l-DNA体外包装系统通常分成分离的两部分，其原因是【】
Ａ安全
Ｂ包装蛋白含量太大难于溶解
Ｃ便于操作
Ｄ提高转染率
Ｅ包装蛋白组份的冷冻保藏条件不同
033琥珀突变是指【】
Ａ起始密码的突变
Ｂ终止密码子的突变
Ｃ精氨酸密码子的突变
Ｄ谷酰胺密码子的突变
Ｅ丙氨酸密码子的突变
034考斯质粒（cosmid）是一种【】
Ａ天然质粒载体
Ｂ由l-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体
Ｃ能裂解受体细胞的烈性载体
Ｄ具有溶原性质的载体
Ｅ能在受体细胞内复制并包装的载体
035下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是【】
ＡCosmid>l-DNA>Plasmid
Ｂl-DNA>Cosmid>Plasmid
ＣPlasmid>l-DNA>Cosmid
ＤCosmid>Plasmid>l-DNA
Ｅl-DNA>Plasmid>Cosmid
036目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是【】
Ａ质粒DNA
Ｂ噬菌体DNA
Ｃ病毒DNA
Ｄ线粒体DNA
Ｅ叶绿体DNA
037下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是【】
Ａ大肠杆菌－繁殖迅速
Ｂ枯草杆菌－分泌机制健全
Ｃ链霉菌－遗传稳定
Ｄ酵母菌－表达产物具有真核性
Ｅ动物细胞－具有完善的蛋白质糖基化功能
038基因工程的受体细胞必须具备【】
I限制性缺陷II营养缺陷III感染寄生缺陷
ＡI
ＢI+II
ＣI+III
ＤII+III
ＥI+II+III
039促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为【】
Ａ人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用
Ｂ人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定
Ｃ大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活
Ｄ人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感
Ｅ大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化
040原生质体转化方法不大适用于【】
Ａ大肠杆菌
Ｂ枯草杆菌
Ｃ酵母菌
Ｄ链霉菌
Ｅ植物细胞
041某一重组转化系统的重组率为10%，转化率为107/mgDNA，经切接单元操作后的载体转化率为原来的1%。
若欲获得10,000个重组克隆，需在重组实验中投入载体【】
Ａ0.1mg
Ｂ0.5mg
Ｃ1.0mg
Ｄ2.0mg
Ｅ10mg
042克隆菌扩增的目的是【】
I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因
ＡI
ＢI+II
ＣI+III
ＤII+III
ＥI+II+III
043载体质粒pBR325共有三个选择性标记：
Apr、Tcr、Cmr。
它们分别含有一个单一酶切位点：
PstI、SphI和EcoRI。
若将一外源基因取代此载体上不含Cmr标记基因的PstI-SphI限制性DNA片段，那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是【】
ＡAp
ＢTc
ＣCm
ＤAp+Tc
ＥAp+Cm
044经抗药性遗传标记法筛选出的转化体中，往往会出现无载体或无重组DNA分子的菌落，其原因很可能是【】
Ａ标记基因发生突变
Ｂ载体或重组分子不稳定
Ｃ载体或重组分子整合入受体染色体中
Ｄ载体空载
Ｅ筛选药物诱导受体细胞产生抗性
045若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入【】
Ａ半乳糖
Ｂ葡萄糖
Ｃ蔗糖
Ｄ5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）
Ｅ异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）
046下列载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是【】
Ａtsr
ＢApr
ＣlacZ
ＤTcr
ＥTrp-
047在菌落原位杂交法中使用的0.4NNaOH溶液的作用是【】
I破细胞壁II蛋白质变性IIIDNA变性IVRNA降解
ＡI+II+III
ＢI+II+IV
ＣI+III+IV
ＤII+III+IV
ＥI+II+III+IV
048下列各组专业术语中，含义最为接近的是【】
Ａ终止子与终止密码子
Ｂ基因表达与基因转译
ＣDNA退火与DNA复性
Ｄ转化与转染
Ｅ重组子与转化子
049分子杂交的化学原理是形成【】
Ａ共价键
Ｂ离子键
Ｃ疏水键
Ｄ配位键
Ｅ氢键
050下列设计的探针中，最佳的是【】
ＡACATTAAATTATT
ＢGGGCA
ＣACCTTGATAAGGT
ＤCGGACTTGACCATC
ＥTTTAGG
051下列三种探针同位素标记法中，必须使用a-32P-dNTP的是【】
IT4-PNP标记II缺口前移标记III反转录标记
ＡI
ＢI+II
ＣI+III
ＤII+III
ＥI+II+III
052能有效降低菌落原位杂交本底的方法是【】
I延长嚗光时间II高离子强度溶液清洗薄膜III高温杂交
ＡI
ＢI+II
ＣI+III
ＤII+III
ＥI+II+III
053某一重组DNA（6.2kb）的载体部分有两个SmaI酶切位点。
用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有【】
Ａ5个
Ｂ4个
Ｃ3个
Ｄ2个
Ｅ至少2个
054Subcloning法一般用于【】
Ａ基因杂交
Ｂ基因定位
Ｃ基因表达
Ｄ基因调控
Ｅ基因突变
055双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于【】
ＡDNA的聚合反应
ＢDNA的连接反应
ＣDNA的降解反应
Ｄ特殊的DNA连接酶
Ｅ聚合单体2'和5'位的脱氧
056多项研究结果表明，苍蝇体内存在一种新型高效广谱抗菌蛋白。
为克隆其基因，最快速有效的筛选方法是【】
Ａ噬菌斑模型
Ｂ透明圈模型
Ｃ颜色反应模型
Ｄ免疫杂交模型
Ｅ凝胶电泳模型
057放射免疫原位杂交法所使用的菌体破碎方法是【】
I氯仿蒸汽II碱溶液III烈性噬菌体
ＡIII
ＢI+II
ＣI+III
ＤII+III
ＥI+II+III
058下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是【】
I限制性酶切IIPCR扩增III抗药性筛选
ＡI
ＢI+II
ＣI+III
ＤII+III
ＥI+II+III
059下列能区分期望重组子的筛选方法是【】
Ａ抗药性筛选法
Ｂ营养缺陷筛选法
Ｃ显色筛选法
Ｄ次级克隆法
Ｅ菌落原位杂交法
060鸟枪法克隆目的基因的战略适用于【】
Ａ原核细菌
Ｂ酵母菌
升级会员 