1简述生物分离过程的特点.docx

1、1简述生物分离过程的特点简答题1.简述生物分离过程的特点。答：（1）产品丰富：产品的多样性导致分离方法的多样性；（2）绝大多数生物分离方法来源于化学分离；（3）生物分离一般比化工分离难度大：成分复杂；悬液中的目标产物浓度低；生物活性条件相对温和；生物产品要求高质量；获得高纯度的干燥产品；卫生。因此，生物分离过程往往成本很高，在某些产品的生产过程中，分离成本可能占到总成本的80以上。（补充：常无固定操作方法可循；生物材料组成非常复杂；分离操作步骤多，不易获得高收率；培养液（或发酵液）中所含目的物浓度很低，而杂质含量却很高；分离进程必须保护化合物的生理活性；生物活性成分离开生物体后，易变性、破坏；

2、基因工程产品，一般要求在密封环境下操作。）2.简述超临界流体萃取的原理及其特点。答：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。利用超临界流体的特殊性质，使其在超临界状态下，与待分离的物料接触，萃取出目的产物，然后通过降压或升温的方法，使萃取物得到分离。其特点是密度接近液体，萃取能力强；粘度接近气体，传质性能好；且安全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。3.常用的蛋白质沉淀方法有哪些？简述其作用机理。（）有机溶剂法：破坏蛋白质分子的水化层，使之聚集成更大的分子团而沉淀。（）盐析：破坏蛋白质分子水化层

3、，电荷中和，使之聚集成更大的分子团。（）化学沉淀法：通过化学试剂与目的产物形成新的化合物，改变溶解度而沉淀。4.何谓ELISA？简述其分析过程。答：ELISA即酶联免疫吸附测定，是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用结合起来，灵敏性很高的一种新型的免疫酶测定技术。ELISA过程是在一种固相载体聚苯乙烯微量滴定板中进行的，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。抗原吸附在固相载体上被称为包被，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成“抗原-待测抗体-酶标记抗体”的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物，待测抗体的定量与有

4、色物质产生成正比，因此借助分光分度仪计测定其吸光度，可计算出抗体的量。5.结合SDS -PAGE电泳的分离原理说明未知蛋白质分子量的测定方法。答:SDS-PAGE是凝胶电泳的一种，其分离原理是基于不同分子量的蛋白质（亚基）在电场中的迁移率不同，因此利用该技术测定未知蛋白质（亚基）的分子量是十分方便的，具体的方法是利用标准分子量MARK，与样品一同电泳，染色后根据标准分子MARK中已知分子量蛋白质的迁移率与其分子量的对数值作图，可得一标准曲线并拟合方程，再结合未知蛋白质的迁移率即可计算得到大致的分子量。6.常用的层析方法有哪些？请叙述其分离原理。 离子交换层析（IEC）基本原理：通过带电的溶质分

5、子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分离的目的。 疏水色谱（HIC）基本原理：主要是利用蛋白质分子表面上的疏水区域和介质中的疏水基团之间的相互作用，无机盐的存在能使相互作用力增强。 亲和层析（AC）基本原理：是利用固定化配基与目的蛋白质之间特异的生物亲和力进行吸附，如抗体与抗原、受体与激素、酶与底物之间的作用。 凝胶过滤基本原理：是以具有大小一定的多孔性凝胶作为分离介质，小分子能进入孔内，在柱中缓慢移动，而大分子不能进入孔内，快速移动，利用这种移动差别可使大分子与小分子分开。7.何谓萃取的分配系数？其影响因素有哪些？分配系数：在一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分配

6、时，达到平衡后，在两相中的浓度之比为一常数，这个常数称为分配系数。乳化作用。pH值：影响弱酸或弱碱药物的分配系数和药物的稳定性。温度和时间：药物的稳定性、分配系数。 盐析作用：盐析剂与水分子结合，游离水分子减少，药物在水相中溶解度降低，易转入有机相；降低有机溶剂在水中的溶解度；萃余相比重增大，利于分相。溶剂的种类和用量及萃取方式。基因工程 001 基因工程操作的三大基本元件是【 】I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 I + II + III I + III + IV II + III + IV II + IV + V III + IV + V 002 根据当今生命科学理论

7、，基因工程的用途是【 】 I 分离纯化基因 II 大量生产生物分子 III 构建新型物种 IV 提高基因重组效率 I + II + III I + II + IV I + III + IV II + III + IV I + II + III + IV 003 基因工程的三大理论基石是【 】 经典遗传学、细胞生物学、微生物学 分子遗传学、分子生物学、生化工程学 动物学、植物学、微生物学 生物化学、生化工程学、化学工程学 生理学、仿生学、免疫学 004 根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【 】 基因诱变 分子克隆 DNA重组 遗传工程 基因无性繁殖 005 基因工程的单元操作顺

8、序是【 】 增，转，检，切，接 切，接，转，增，检 接，转，增，检，切 检，切，接，增，转 切，接，增，转，检 006 生物工程的上游技术是【 】 基因工程及分离工程 基因工程及发酵工程 基因工程及酶工程 基因工程及细胞工程 基因工程及蛋白质工程 007 基因工程作为一种技术诞生于【 】 上世纪 50 年代初 上世纪 60 年代初 上世纪 70 年代初 上世纪 80 年代初 上世纪 90 年代初 008 利用基因工程扩增基因是依据【 】 基因定向重排 强化启动基因 增强子重组 SD 顺序的存在 载体自主复制 009 第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【 】 生长激素（Growth

9、 hormone） 胰岛素（Insulin） 干扰素（Interferon） 白细胞间溶菌素（Interleukin） 生长激素释放抑制素（Somatostatin） 010 下列有关基因的叙述，错误的是【 】 蛋白质是基因表达的唯一产物 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段 基因也可以是 RNA 基因突变不一定导致其表达产物改变结构 基因具有方向性011 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是 【 】 修复自身的遗传缺陷 促进自身的基因重组 强化自身的核酸代谢 提高自身的防御能力 补充自身的核苷酸消耗 012 天然 PstI 限制性内切酶的来源是 【 】 Bacillus amylo

10、liquefaciens Escherichia coli Haemophilus influenzae Providencia stuartii Streptomyces lividans 013 根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成 【 】 2 大类 3 大类 4 大类 5 大类 6 大类 014 下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是 【 】 GAAACTGCTTTGAC GAAACTGGAAACTG GAAACTGGTCAAAG GAAACTGCAGTTTC GAAACTGCAGAAAG 015 下列五个 DNA 片段，最可能含有 SstI 酶切位点的是 【 】 GGA

11、GAGCTCT GAGCACATCT CCCTGTGGGA ATCCTACATG AACCTTGGAA 016 从 dam 型大肠杆菌受体细胞中分离出的质粒 DNA 能被 BamHI 、 BglII 和 Sau3AI 降解（如果上述酶切位点存在），但对 BclI 和 MboI 不敏感（尽管上述酶切位点存在），其原因是 【 】 Dam 甲基化酶使 BclI 和 MboI 识别序列甲基化，但对 BamHI 、 BglII 以及 Sau3AI 不起作用 Dam 甲基化酶既可使 5-GATC-3 序列中的腺嘌呤 N 6 甲基化，也可使胞嘧啶 C 5 甲基化，这两种甲基化作用对限制性内切酶活性的影响不同

12、 Dam 甲基化酶能使所有 5-GATC-3 序列中的腺嘌呤 N 6 甲基化，但不同的限制性内切酶对这种甲基化作用的敏感性不同 Dam 甲基化酶的作用位点在 5-GATC-3 序列内部，但该酶与 DNA 靶序列的结合还依赖于 5-GATC-3 序列左右两端的其它碱基组成 Dam 甲基化酶既能使 5-GATC-3 序列中的腺嘌呤 N 6 单甲基化，也能使其双甲基化，只有后者才能抵御相应限制性内切酶的切割作用 017 T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是 【 】 2 -OH 和 5 -P 2 -OH 和 3 -P 3 -OH 和 2 -P

13、3 -OH 和 5 -P 5 -OH 和 3 -P 018 下列 DNA 片段中，通过加热并用 S1 核酸酶处理即可使 DNA 断裂的是 【 】 CCGATCAAGCTGTTCCCGGAGGTGCCCGCCCTAAGGAGACTCGGT GGCTAGTTCGACAAGGGCCTCCACGGGCGGGATTCCTCTGAGCCA AAGGTCGGCGGGTTCCCACCCGTGAGCATCGGGCCTTGCCGTTAT TTCCAGCCGCCCAAGGGTGGGCACTCGTAGCCCGGAACGGCAATA TATGATCATCCGCCGGGTGTCACTGATCCATGGCCCAAGGGTT

14、TC ATACTAGTAGGCGGCCCACAGTGACTAGGTACCGGGTTCCCAAAG GAGGATCCCTTTGCGATTCACCTAGGGTATCTCTGTAGGGCCTAG CTCCTAGGGAAACGCTAAGTGGATCCCATAGAGACATCCCGGATC GCATCGGCCCCCGGTAAATATTCTCGGGGCGGGTAGCCGCCTAGT CGTAGCCGGGGGCCATTTATAAGAGCCCCGCCCATCGGCGGATCA 019 Bal31 工具酶是一种 【 】 只切双链 DNA 的外切酶 双链单链 DNA 均切的外切酶 双链单链 DNA 和 RNA 均

15、切的外切酶 双链单链 RNA 均切的外切酶 只切双链 RNA 的外切酶 020 下列有关连接反应的叙述，错误的是 【 】 连接反应的最佳温度为 37 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10% 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM 连接酶通常应过量 2-5 倍 DTT 可以维持连接酶的结构 021 某一质粒的多克隆位点上含有下列单一限制性内切酶识别序列： AluI 、 BglII 、 ClaI 、 DpnI 、 EcoRV ， 若将含有 EcoRI 粘性末端的外源基因克隆在这个质粒上，并保留 EcoRI 酶切位点，则合适的插入位点是 【 】 AluI BglII ClaI DpnI

16、EcoRV 022 若将含有 5 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是 【 】 I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶 III I + III II + III I + II + III I + II + III + IV 023 若载体 DNA 用 M 酶切开，则下列五种带有 N 酶粘性末端的外源 DNA 片段中，能直接与载体拼接的是 【 】M N A/AGCTT T/TCGAA C/CATGG ACATG/T C

17、CC/GGG G/GGCCC G/GATCC A/GATCT GAGCT/C G/AGCTC 024 下列各组分别用两种不同的限制性内切酶切开的 DNA 片段经补平并连接后，其重组分子内能产生 ClaI 限制性内切酶酶切位点的是 【 】 BglII / BamHI HindIII / BamHI MluI / BamHI SpeI / BamHI XbaI / BamHI 025 质粒 DNA 和外源 DNA 各用两种限制性内切酶切开，经连接转化后获得重组子。下列各组重组子中有可能含有两种相反基因极性的是 【 】 ApaI / ClaI BamHI / BglII BclI / SmaI Hi

18、ndIII / KpnI SphI / PstI 026 提高重组率的方法包括 【 】 I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间 I + II I + II + III I + III + IV II + III + IV I + II + III + IV 027 载体的功能是 【 】 I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力 I I + II I + III II + III I + II + III 028 下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是 【 】 质粒是共价环状的双

19、链 DNA 分子 天然 质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列 质粒在宿主细胞内能独立于染色体 DNA 自主复制 松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增 质粒并非其宿主细胞生长所必需 029 带有多个不同种复制起始区的质粒是 【 】 穿梭质粒 表达质粒 探针质粒 整合质粒 多拷贝质粒 030 多聚接头（ Polylinker ）指的是 【 】 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段 含有多种启动基因的人工 DNA 片段 含有多种特定密码子的人工 DNA 片段 031 l -DNA 体外包装的上下限是天然 l

20、 -DNA 长度的 【 】 25 - 50 % 50 - 100 % 75 - 100 % 75 - 105 % 100 - 125 % 032 l -DNA 体外包装系统通常分成分离的两部分，其原因是 【 】 安全 包装蛋白含量太大难于溶解 便于操作 提高转染率 包装蛋白组份的冷冻保藏条件不同 033 琥珀突变是指 【 】 起始密码的突变 终止密码子的突变 精氨酸密码子的突变 谷酰胺密码子的突变 丙氨酸密码子的突变 034 考斯质粒（cosmid）是一种 【 】 天然质粒载体 由 l -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体 能裂解受体细胞的烈性载体 具有溶原性质的载体 能在受体细胞内

21、复制并包装的载体 035 下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是 【 】 Cosmid l -DNA Plasmid l -DNA Cosmid Plasmid Plasmid l -DNA Cosmid Cosmid Plasmid l -DNA l -DNA Plasmid Cosmid 036 目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是 【 】 质粒 DNA 噬菌体 DNA 病毒 DNA 线粒体 DNA 叶绿体 DNA037 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是 【 】 大肠杆菌繁殖迅速 枯草杆菌分泌机制健全 链霉菌遗传稳定 酵母菌表达产物具有真核性 动物细胞

22、具有完善的蛋白质糖基化功能 038 基因工程的受体细胞必须具备 【 】 I 限制性缺陷 II 营养缺陷 III 感染寄生缺陷 I I + II I + III II + III I + II + III 039 促红细胞生长素（ EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为 【 】 人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用 人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定 大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 040 原生质体转化方法不大适用于

23、【 】 大肠杆菌 枯草杆菌 酵母菌 链霉菌 植物细胞 041 某一重组转化系统的重组率为 10% ，转化率为 10 7 / m g DNA ，经切接单元操作后的载体转化率为原来的 1% 。若欲获得 10,000 个重组克隆，需在重组实验中投入载体 【 】 0.1 m g 0.5 m g 1.0 m g 2.0 m g 10 m g 042 克隆菌扩增的目的是 【 】 I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因 III 表达外源基因 I I + II I + III II + III I + II + III043 载体质粒 pBR325 共有三个选择性标记： Ap r 、 Tc r 、 Cm r

24、 。它们分别含有一个单一酶切位点： PstI 、 SphI 和 EcoRI 。若将一外源基因取代此载体上不含 Cm r 标记基因的 PstI-SphI 限制性 DNA 片段，那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是 【 】 Ap Tc Cm Ap + Tc Ap + Cm 044 经抗药性遗传标记法筛选出的转化体中，往往会出现无载体或无重组 DNA 分子的菌落，其原因很可能是 【 】 标记基因发生突变 载体或重组分子不稳定 载体或重组分子整合入受体染色体中 载体空载 筛选药物诱导受体细胞产生抗性 045 若某质粒带有 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入 【 】 半乳糖

25、 葡萄糖 蔗糖 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基 - b -D- 半乳糖苷（ X-gal ） 异丙基巯基 - b - 半乳糖苷（ IPTG ） 046 下列载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是 【 】 tsr Ap r lacZ Tc r Trp - 047 在菌落原位杂交法中使用的 0.4N NaOH 溶液的作用是 【 】 I 破细胞壁 II 蛋白质变性 III DNA 变性 IV RNA 降解 I + II + III I + II + IV I + III + IV II + III + IV I + II + III + IV 048 下列各组专业术语中，含义最为接近的是 【 】

26、 终止子与终止密码子 基因表达与基因转译 DNA 退火与 DNA 复性 转化与转染 重组子与转化子 049 分子杂交的化学原理是形成 【 】 共价键 离子键 疏水键 配位键 氢键 050 下列设计的探针中，最佳的是 【 】 ACATTAAATTATT GGGCA ACCTTGATAAGGT CGGACTTGACCATC TTTAGG 051 下列三种探针同位素标记法中，必须使用 a - 32 P-dNTP 的是 【 】 I T 4 -PNP 标记 II 缺口前移标记 III 反转录标记 I I + II I + III II + III I + II + III 052 能有效降低菌落原位杂交

27、本底的方法是 【 】 I 延长嚗光时间 II 高离子强度溶液清洗薄膜 III 高温杂交 I I + II I + III II + III I + II + III 053 某一重组 DNA （ 6.2 kb ） 的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有 【 】 5 个 4 个 3 个 2 个 至少 2 个 054 Subcloning 法一般用于 【 】 基因杂交 基因定位 基因表达 基因调控 基因突变 055 双脱氧末端终止法测定 DNA 序列是基于 【 】 DNA

28、的聚合反应 DNA 的连接反应 DNA 的降解反应 特殊的 DNA 连接酶 聚合单体 2 和 5 位的脱氧 056 多项研究结果表明，苍蝇体内存在一种新型高效广谱抗菌蛋白。为克隆其基因，最快速有效的筛选方法是 【 】 噬菌斑模型 透明圈模型 颜色反应模型 免疫杂交模型 凝胶电泳模型 057 放射免疫原位杂交法所使用的菌体破碎方法是 【 】 I 氯仿蒸汽 II 碱溶液 III 烈性噬菌体 III I + II I + III II + III I + II + III 058 下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是 【 】 I 限制性酶切 II PCR 扩增 III 抗药性筛选 I I + II I + III II + III I + II + III 059 下列能区分期望重组子的筛选方法是 【 】 抗药性 筛选法 营养缺陷 筛选法 显色 筛选法 次级克隆法 菌落原位杂交法060 鸟枪法克隆目的基因的战略适用于 【 】 原核细菌 酵母菌