2 生化实验指导修订.docx
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2生化实验指导修订
生物化学
实验指导
海洋学院生物化学课程组编
2011年8月10日
目录
实验室守则…………………………………………………………………………………Ⅱ
海洋学院实验记录的基本要求…………………………………………………………Ⅲ
实验报告撰写要求…………………………………………………………………………Ⅴ
实验一糖类的定量测定………………………………………………………………1
实验二纸层析法分析氨基酸…………………………………………………………3
实验三氨基酸含量的测定……………………………………………………………6
实验四蛋白质的两性性质及等电点的测定………………………………………8
实验五考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量…………………………………10
实验六垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法……………………………………………13
实验七DNA的提取制备………………………………………………………………23
实验八酶活性的测定…………………………………………………………………26
实验九 过氧化物酶同工酶分析………………………………………………………29
实验十凝胶层析…………………………………………………………………………33
实验十一酪蛋白的制备…………………………………………………………………36
实验室守则
一、安全卫生
1.所有进入实验室的人员都有监督实验室安全、卫生、仪器操作和维护的义务。
2.在测定完成后，使用者须做好实验室的清洁工作，将公用物品归还原位，立即将所使用过的试验台、实验用品等清洗干净，清除垃圾，并及时归还所借物品。
3.实验室安全卫生实行值日生制，值日生在每天使用完实验室后进行检查，必须保持实验室内环境整洁，走道畅通，设备器材摆放整齐。
4.禁止在实验室吸烟、吃东西、乱抛纸屑杂物。
5.最后一个离开实验室的人一定要关好水、电、门和窗。
二、仪器使用
1.严禁在实验台的插孔上使用功率大的电器。
2.对于功率大的电器，如烘箱、马福炉等，请严格按照要求操作，每天应在晚上十点前关闭。
3.烘箱是不锈钢体的，不能将未洗干净的物品放进烘箱。
不能用不干净的抹布擦烘箱。
4.使用离心机，离心管一定要称重平衡后，对称放置。
5.天平，特别是万分之一的天平不得任意搬动。
使用完毕后应立即清扫天平，以免化学试剂腐蚀天平。
6.不能用实验室的分样器、加样枪加强酸或强碱，以免腐蚀。
7.气瓶内气体不能用尽，必须留有剩余压力（如氧气不少于2Kg/m2）。
8.有毒或有腐蚀性气体的实验必须在通风橱内进行。
9.实验后的废渣、废液，要倒在废渣箱和废液缸中，不准随便倾倒或倒入水池中。
10.超净台使用注意事项：
保持干净，紫外灯的使用时需遮盖前面板。
11.冰箱：
不得放危险品，或相邻能起化学反应的药品。
三、实验数据及其处理
1.所有实验室存储的样品、试剂必须如实写好标签，如样品应有样品名称、存放时间、存放人。
配制的试剂应有试剂名称、浓度、配制时间和配制人等。
2.必须进行至少三次平行实验，以求得标准偏差。
数据图须标有误差棒。
3.实验中，必须如实地记录各种实验数据。
实验后，二星期内完成实验结果整理，正确处理实验数据，不得更改原始数据。
海洋学院实验记录的基本要求
一、实验记录的内容：
实验记录的内容通常包括实验设计、实验名称、时间、试验者、实验材料、实验步骤、观察指标、实验结果、和结果的初步分析等内容。
1、实验设计：
实验记录的首页必须有一份科学规范的实验设计，实验设计的具体格式和规范另行要求。
2、实验名称：
首次实验记录必须注明课题名称和试验名称。
3、实验时间：
每次实验记录必须在记录纸的左上方按年、月、日顺序记录实验的日期和时间，如：
11-08-058:
00-11:
00。
4、实验方法：
常规实验方法应在首次实验记录是注明方法的来源，详细记录实验的具体操作步骤。
创新或改进的实验方法应当给出创新和改进的依据，并详细记录实验过程中的一切现象和具体的实验操作的细节。
5、实验材料：
详细记录所采用的仪器设备名称、型号、生产厂家及其度量精度。
实验动物和试验植物种属、来源及品系；主要试剂的生产厂家、规格型号和生产批号，自制的实际应在首次记录中详细说明配制方法、时间及保存条件，试验若有变更，应在相应的实验记录中加以说明。
6、实验环境：
对环境条件敏感的试验，要详细记录实验当天的天气情况和诸如光照、通风、温度及湿度等实验微小气候。
7、实验结果：
应当准确记录定量观察指标的实验数据和定型观察指标的实验变化。
在不同的时间点上，从同一个受试对象上观察来的数据，必须写在与实践对应的位置上，不得错位。
8、结果分析：
每次实验结果应作明确地的文字小节，如有图片（如序列图、电永图谱、照片等）则附必要的文字说明，对与预期结果不符合的结果，要详细分析原因。
9、实验人员：
应记录所有参加实验的人员。
二、实验记录的书写：
实验记录要用兰黑或碳素墨水、字迹工整、内容清楚、整洁。
必须使用中文记录，不得使用外文和中文混记，不得使用自造的字或不规范的简化字。
必须使用规范化的专业术语和国际标准计量单位。
常用的英文缩写必须符合规范并已经出版界得到认可，首次出现的缩写必须用中文加以注释。
实验记录中属译文的必须用括号注明其外文名称。
实验图片、照片应当用胶水贴在记录的相应位置。
底片装在统一制作的袋内，编号后用胶水贴在照片旁，不得贴在其他位置。
除一次成像和仪器打印的外，不得有图片而无底片。
实验记录必须及时准确，不得写回忆性记录，不得伪造、编造实验记录。
每次实验后，实验负责人和记录人要在记录上签名，课题负责人要定期检查实验记录，并签署检查意见。
三、实验记录的修改：
实验记录不得随意删除、修改和增加数据，如系写错确需修改，在需要修改处下面划一条横线，不可完全涂黑，保证修高前后记录能够辨认，修改人必须签字。
凡进入实验室从事实验的同学必须遵守以上要求。
实验报告撰写要求
实验报告是从理论、方法和实践三个方面对实验工作的总结，是实验课程学习的重要环节。
撰写实验报告主要有两个目的。
一是通过对实验项目的目的、原理、实验仪器和材料、操作步骤的科学描述以及对实验结果的记录、处理、分析和讨论，加深学生对基本理论的认识和理解，培养学生分析问题和解决问题的能力。
二是通过撰写实验报告，促使学生寻找自己实验过程中的问题和漏洞，改进今后实验工作，提高实践能力，拓宽创新视野。
因此，实验者必须各自独立思考完成实验报告，不允许抄袭书本、讲义或相互抄袭。
为进一步规范实验教学管理，提高实验教学质量，对学生实验报告的撰写提出以下基本要求。
1、实验报告使用学校统一印制的实验报告纸撰写。
实验报告简单通项如姓名、学号、班级、课程名称、实验项目、同实验者、指导教师、日期等必须填写正确齐全，不得错漏。
实验项目名称统一使用“实验一、××××××”形式。
2、实验目的一项主要写三个方面的内容：
实验的背景材料、为什么做本实验或本实验要达到的目标以及本实验的拓展应用。
3、主要仪器设备及材料一项清楚记载实验中需要的仪器、设备和实验材料细项，要尽可能令读者能重复本实验，并对特殊的装置给予图示。
4、实验原理与步骤部分写作时将原理和步骤分开撰写。
撰写原理时要在充分理解讲义或实验指导书载明的理论基础上，自己组织语言进行叙述，要求做到简明扼要，语句通顺，要求独立完成，严禁抄袭；实验步骤要条理清楚，图表文字详实，要求写出实验者自己的实验步骤，不得抄袭讲义或实验指导书上的文句，使读者依据此处记载的实验步骤能重复出实验。
实验步骤主要包括:
供试的条件、数量、取样方法；实验的设计，实验组与控制组情况，实验中自变量因素的实施及条件控制等；实验步骤的具体过程、实验时间的安排以及注意事项等；杜绝抄袭。
5、原始实验数据记录要详实具体，应当准确记录定量观察指标的实验数据和定性观察指标的实验变化。
定量的实验数据记录必须指代明确，要说明在什么条件下得出的数据，不得出现“无头”数据。
定性的实验变化描述必须定义明白，要说明在什么情况下出现的变化，不得出现“无根”的描述。
原始数据记录要注明主要测量仪器的型号、量程和准确度等级等。
记录必须使用规范化的专业术语和国际标准计量单位。
常用的英文缩写必须符合规范，首次出现的缩写必须用中文加以注释。
6、非定量实验结果的记录按照实验要求采用绘图或文字描述方式进行。
实验绘图如生物实验图不同于一般美术图，也不同于机械制图。
绘图要求将标本的外形和内部结构准确的描画下来，然后详加说明，要求形象自然，比例适当，线条清晰。
生物绘图一般用点、线表示，轮廓用线条描绘，明暗程度、物质含量多少等则用细点的疏密表示，图纸应选择能够用橡皮擦拭的优质白纸，绘图时先用中软（EB）铅笔绘出轮廓，然后用较硬（3H）的铅笔绘出全图，图中各部分应注字说明，图与字之间用水平细线连系，图的标题填在图的下方。
7、数据处理和结果分析部分撰写时应将数据处理和结果分析分开。
数据处理因方法不同要求不同，对常见的数据处理方法分述如下：
列表法：
表格的设计要求对应关系清楚、简单明了、有利于发现相关量之间的关系；要求在标题栏中注明物理量名称、符号、数量级和单位等；根据需要还可以列出除数据以外的计算栏目和统计栏目等；要求写明表格名称、有关环境条件参数如温度、湿度等。
作图法：
作图必须用坐标纸，按需要可以选用毫米方格纸、半对数坐标纸、对数坐标纸或极坐标纸等；坐标轴选用以横轴代表自变量，纵轴代表因变量，在轴的中部注明物理量的名称符号及其单位，单位加括号；坐标分度要保证图上观测点的坐标读数的有效数字位数与实验数据的有效数字位数相同；根据实验数据用削尖的硬铅笔在图上描点，点子可用“＋”、“×”、“⊙”等符号表示，符号在图上的大小应与该两物理量的不确定度大小相当。
点子要清晰，不能用图线盖过点子。
连线时要纵观所有数据点的变化趋势，用曲线板连出光滑而细的曲线（如系直线可用直尺），连线不能通过的偏差较大的那些观测点，应均匀地分布于图线的两侧；在图纸的上部空旷处写出图名和实验条件等。
也可以使用最小二乘法和逐差法进行数据处理。
结果分析讨论是对实验结果的含义和意义进行评价。
实验者根据实验的客观事实和结论，结合自己的认识与了解，通过分析思考，讨论和分析与实验结果有关的问题。
结果分析主要包括：
①对实验结果进行理论上的分析和论证；
②对自己做实验的规范性和失误进行探讨，如对实验误差、出现和常识相违的数据或现象等进行必要的反省，对实验结果的可靠程度和适用范围作进一步说明；
③对实验方法的可靠性和局限性进行探讨，提出可供深入研究的问题以及本实验中尚未解决或需要进一步解决的问题，对未来的实验方法的改进提出合理的建议。
结果分析后要有一个简洁的结论。
8、实验报告撰写的最后部分是回答每次实验后教师留下的思考题。
思考题的回答必须展开回答，详实具体，要求叙理有据、条理清楚、文字工整，并且是独立思考完成的。
实验一糖类的定量测定
一、实验目的
香菇，又称香蕈、冬菇，是一种生长在木材上的真菌类，它含有大量的氨基酸等对人体有益的营养物质，还含有很多的多糖。
香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能。
本实验学习香菇水溶性糖类的提取及定量测定方法。
二、实验原理
香菇的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）经强酸脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮反应生成蓝绿色的糠醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
反应式：
该法特点：
灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、实验仪器及试剂
1．仪器：
分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。
2．试剂：
（1）2g/L蒽酮试剂：
称取2g蒽酮（AR）溶于1000ml的浓硫酸中，当日配置使用。
（2）1％葡萄糖标准液：
将分析纯葡萄糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。
加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（3）100ug/ml糖标准液：
精确吸取1％葡萄糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。
四、实验步骤
1．标准曲线的制作：
取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表1－1加入溶液和水，加标准糖液0.0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.20、1.60，用水补足至2ml，然后向试管内加入8.00mL蒽酮试剂，摇匀后迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖以防蒸发。
自沸水浴重新煮沸起，准确煮沸10分钟取出，用自来水冷却，室温放置10分钟左右，于620nm比色。
以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取：
取干或新鲜香菇子实体，擦净表面污物，粉碎，称取1.0g，用80-90℃热水30ml，在80-90℃恒温水浴锅中提取30分钟，4000rpm离心10分钟。
收集上清液，沉淀重复提取一次，合并两次上清液，用循环水真空泵抽滤除去漂浮物。
吸取滤液1.0ml稀释至100ml，得待测样液。
3．测定：
吸取2.0mL样品液于试管中（重复2次），向试管内加入8.00mL蒽酮试剂，摇匀后迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖以防蒸发。
自沸水浴重新煮沸起，准确煮沸10分钟取出，用自来水冷却，室温放置10分钟左右，于620nm比色。
由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。
糖的含量＝（C×n×V）/（α×W）
式中：
C一标准方程求得糖量（ug）；
n一稀释倍数；
V－提取液量（mL）；
α一吸取样品液体积（mL）；
W一（g）
五、思考题
1、简述苯酚法与蒽酮法测定可溶性糖的基本原理。
2、干扰可溶性糖测定的主要因素有哪些？
怎样避免？
实验二纸层析法分析氨基酸
一、实验目的
1.掌握纸上层析的一般原理和操作方法。
2.了解氨基酸的特征性颜色反应。
3.学会分析未知样品的氨基酸成分。
二、实验原理
纸上层析是一种比较简单的色层层析法，这种方法所依据的原理就是利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同而达到分离的目的。
实验是在特制的滤纸上进行。
滤纸可视作惰性载体，吸附在滤纸上的水作为固定相，而有机溶剂作流动相。
将要分离的混合物点在滤纸的一端，随着展开剂的移动，由于各组分在两相中的分配系数不同，各组分就以不同速度在滤纸上随展开剂移动。
展开剂停止移动，各组分就停留在滤纸的不同位置上。
若各组分无色，可根据其性质。
喷上显色剂，以观察斑点的位置。
用Rf值表示各组分的移动率：
a为各组分移动的距离，
b为溶剂移动的距离。
各组分的Rf值随实验条件而变化，因此在鉴定时常常采用标准样品对照。
此法一般适用于微量有机物质（5—500微克）的定性分析，分离出来的色点也能用比色方法定量。
三、实验仪器及试剂
1、仪器：
色谱缸（或带木塞和挂钩的试剂瓶）、直尺、铅笔、新华一号滤纸量筒、喷雾器、点样毛细管。
2、试剂：
1.0g·L-1天冬氨酸、1.0g·L-1蛋氨酸1.0g·L-1亮氨酸
展开剂（正丁醇:
甲酸:
水=15:
3:
2）、0.1%茚三铜丙酮溶液。
四、实验步骤
1、点样
取12×15厘米层析滤纸一张，在距下端1.5cm处用铅笔轻轻画一条与下端平行的直线，作为原点线；距原点线10厘米处再画一平行线，作为溶剂前沿线。
在原点线上用铅笔每隔2.3cm处画一小圆圈，做为点样的位置。
用毛细管点样：
每种5-20ul为宜。
点样的斑点直径不要超过0.3cm。
在整个操作过程中，手和其它物质不要接触滤纸的层析部分（即展开相流经的部分）。
2、展开
将滤纸缝线成筒状，竖直放入层析缸中，先使滤纸不接触展开剂。
在展开剂（正丁醇：
甲酸：
水=15：
3：
2）的蒸气中饱和20分钟。
然后使滤纸浸入展开剂约1cm。
展开剂沿纸而上升，当达到前沿线时，取出滤纸，拆线，立即用铅笔划出溶剂前沿位置，晾干。
3、显色
将滤纸干燥，向滤纸均匀喷洒0.1%茚三酮的丙酮溶液，干燥后，电吹风吹干，用铅笔描出斑点形状。
用尺测算各斑点的Rf值，判断混合物中含有什么氨基酸。
五、思考题
（1）纸层析法的特征和用途是什么？
（2）影响Rf值大小的因素有哪些？
（3）展开前为什么需要一个饱和过程？
附：
薄层层析法分离氨基酸
一、实验目的
1．把握薄层层析的基本原理。
2．练习薄层板的制备。
二、实验原理
薄层层析法是一种检验微量物质的快速准确的分析分离手段。
它是将某种吸附剂在一块玻璃板（或硬质塑料板等）上铺成均匀的薄层，把要分离鉴定的样品溶液点在薄层板的一端，在密闭的层析缸内用适宜的溶剂（即展开剂）展开，从而进行层析分析的方法。
吸附剂对被吸附化合物的吸附能力有强弱之分，这与吸附剂本身的性质和被吸附化合物的性质是有关的。
当被测样品随着展开剂在吸附剂上前进时，由于不同化合物具有不同的结构和性质，展开剂对它们的洗脱力和它们在吸附剂上的吸附、解吸附的性能也就有所不同，因而在吸附剂上移动的距离也就不会相同，这样就达到了分离的目的。
在薄层层析中为了获得良好的分离效果必须选择适当的吸附剂和展开剂。
吸附剂含水较多时吸附能力就会大为减弱，因此使用吸附剂时一般要先进行加热去水的活化处理。
在薄层层析中所用的吸附剂种类很多，用得最广泛的是氧化铝和硅胶。
化合物被吸附剂吸附后，要选择适宜的溶剂进行展开。
展开剂是一种或两种以上溶剂按一定比例组成的溶剂系统。
溶剂的选择通常是根据被测物中各成份的极性、溶解度以及吸附剂活性和分离效果等因素来考虑，否则会影响吸附剂活性和分离效果。
观察层析结果时，假如化合物本身有颜色，可直接观察他的斑点。
如本身无色，可用显色剂显色。
不同物质所用显色剂是不同的。
假如被测物质是有机化合物，一般都可采用碘蒸气进行显色。
本实验中采用的是茚三酮显色剂。
三、实验步骤
1．薄层板的制备
将10g硅胶G和15mL水在小烧杯内迅速混合均匀，再加入5mL水继续搅拌。
将调好的糊状物倒在洗净干燥好的玻璃板上，用手摇摆，使其表面均匀光滑，厚度在0.25～1mm间为宜。
在室温下晾干后，置于烘箱内慢慢升温，在105～110℃下活化约半小时。
取出后放于干燥器内备用。
所配制的硅胶乳状液可制备薄层板3～5块。
2．茚三酮显色剂的制备
0.2%茚三酮异丙醇溶液
3．氨基酸的分离和鉴定
用毛细管分别取甘氨酸、缬氨酸溶液（各约1.00mg/mL）在薄层板上一端约0.5cm处点样。
如在一块板上点二个样，则它们之间必须相隔一定距离；另取甘氨酸和缬氨酸混合溶液（0.5mg/L）点在另一块薄层板上，点样完毕。
等斑点干燥后小心地将板置于盛有展开剂（水:
乙醇:
乙酸=1:
6:
0.5）的层析缸内，点样端浸入展开剂深度约0.3cm为宜。
待展开剂上升了10cm以上后，可停止展开。
取出薄层板，在前沿线处用大头针轻轻穿刺薄层作出记号。
等板晾干后，在110℃烘箱内干燥大约10分钟，然后用喷雾器均匀地喷上茚三酮显色剂，再放入烘箱内烘烤约15分钟，即可显出各析层斑点。
分别测出氨基酸的Rf值，并推断它们相互混合时能否进行层析分离。
实验三氨基酸含量的测定
一、目的
学习茚三酮比色法测定氨基酸含量的原理，学会具体的操作方法，了解本方法的应用。
二、原理
氨基酸在一定pH范围内能与茚三酮溶液生成紫色化合物。
该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。
三、实验仪器及试剂
（1）标准氨基酸溶液：
配制成200ug/mL溶液。
（2）pH8.04磷酸缓冲液：
称磷酸二氢钾4.5350克定容500ml；称磷酸氢二钠11.9380克定容500ml.取磷酸二氢钾10ml和磷酸氢二钠190ml混合即pH8.04磷酸缓冲液
（3）0.2%茚三酮显色液：
称取1g茚三酮溶于35ml热水，加入40mgSnCl2.H2O搅拌过滤，滤液于冷暗处过夜，定容50ml.
（4）样品液：
每毫升含0.5～50μg氨基酸。
（5）分光光度计。
（6）水浴锅。
四、操作步骤
1、标准曲线的制作
分别取标准氨基酸溶液0，0.4，0.8，1.0，1.2，1.6mL于比色管中，用水补足至4mL。
各加入1mL缓冲液；再加入1mL茚三酮显色液，充分混匀后，盖住试管口，在100℃沸水浴中加热15min，冷却定容25ml。
放置15min后，用分光光度计测定OD570nm。
（脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色，应测定OD440nm）。
以OD570nm为纵坐标，氨基酸含量为横坐标，绘制标准曲线。
2、氨基酸样品的测定
取样品液1mL，加入水3ml，缓冲液1mL和茚三酮显色液1mL，混匀后于100℃沸水浴中加热15min，冷却定容25ml。
放置15min后，摇匀后测定OD570nm。
将样品测定的OD570nm与标准曲线对照，可确定样品中氨基酸含量。
五、结果计算
OD570nm对应标准曲线查得值
氨基酸含量（ug/g）=
样品克数
六、思考题
1．茚三酮是否可用于氨基酸和蛋白质的定性鉴定？
实验四蛋白质的两性性质及等电点的测定
一、目的要求
（1）通过实验了解蛋白质的两性性质及等电点与蛋白质分子聚沉的关系。
（2）掌握通过聚沉测定蛋白质等电点的方法。
二、实验原理
蛋白质是两性电解质。
蛋白质分子中可以解离的基团除N―端α―氨基与C―端α―羧基外，还有肽链上某些氨基酸残基的侧链基团，如酚基、巯基、胍基、咪唑基等集团，他们都能解离为带电基团。
因此，在蛋白质溶液中存在着下列平衡：
阳离子两性离子阴离子
pHpI
电场中：
移向阴极不移动移向阳极
调节溶液的pH使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。
在等电点时，蛋白质溶解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同pH的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情况即可确定蛋白质的等电点。
三、实验器材及试剂
1、试剂
1mol/L乙酸：
吸取99.5%乙酸（比重1.05）2.875ml，加水至50ml；
0.1mol/L乙酸：
吸取1mol/L乙酸5ml，加水至50ml；
0.01mol/L乙酸：
吸取0.1mol/L乙酸5ml，加水至50ml；
0.2mol/LNaOH：
称取NaOH2.000g，加水至50ml，配成1mol/LNaOH。
然后量取1mol/LNaOH10ml，加水至50ml，配成0.2mol/LNaOH；
0.2mol/L盐酸：
吸取37.2%（比重1.19）盐酸4.17ml，加水至50ml，配成1mol/L盐酸。
然后吸取1mol/L盐酸10ml，加水至50ml，配成0.2mol/L盐酸；
0.01%溴甲酚绿指示剂：
称取溴甲酚绿0.005g，加0.29ml1mol/LNaOH，然后加水至50ml；
0.5%酪蛋白溶液：
称取酪蛋白（干酪素）0.25g放入50ml容量瓶中，加入约20ml水，再准确加入1mol/LNaOH5ml，当酪蛋白溶解后，准确加入1mol/L乙酸5ml，最后加水稀释定容至50ml，充分摇匀；
2、器材
试管架，试管：
15ml×6，刻度吸管：
1ml×4，2ml×4，10ml
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