培养基大全.docx

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培养基大全

1、营养琼脂（普通琼脂）

成份：

牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤） 100毫升

   琼脂（视天气，琼脂质量而定）

制法：

将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。

用途：

作普通琼脂平皿。

2、血琼脂平板（BA）

制法：

取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。

用途：

1．一般棉拭子均接种此培养基。

   2．尿液，脓液

   3．分离细菌标本用。

3、基础培养基（肉膏汤BB）

成份：

蛋白胨10克  牛肉膏 5克 

   氯化钠 5克  水  1000毫升

制法：

将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。

用途：

1作耐药试验，增菌用分装小管。

   2作普通琼脂斜面。

4、血液培养基（大管肉汤培养基）

成份：

1新鲜牛肉浸液 1000毫升 

   2PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕） 1g%1毫升

   3MgSO4 [相当于0．493/100毫升]   49．3%1毫升

   4枸椽酸钠            0．3g

制法：

1将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

   2取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。

用途：

作血，骨髓培养用。

5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）

成份：

蛋白胨 10克    乳糖  10克

    氯化钠 5克    琼脂  25（22）克

    水   1000毫升  2%伊红溶液20毫升

    0．5%美兰溶液 20毫升

制法：

将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。

（高压以后方可再加乳糖）

用途：

用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。

             1

6、罗文斯坦培养基

成份：

磷酸二氢钾  2．4克    硫酸镁 0．24克

   枸椽酸钠   0．6克    天门冬素3．6克

   纯甘油（丙三醇）12毫升    水  600毫升

   马铃薯粉   30克     鸡蛋 1000毫升（约3公斤）

   2%孔雀绿水溶液20毫升  

制法：

1除鸡蛋外（还有孔雀绿）。

可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。

   2鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。

   3将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。

   4间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次）。

质控标准：

1灭菌试验合格。

      2接种结核杆菌要求两星期生长良好。

用途：

作结核分枝杆菌培养用。

7、结核半固体培养基

成份：

磷酸氢二钠   19克     硫酸镁  0．6克

   磷酸二氢钾   2．5克    天门冬素 5克

   1%孔雀绿   1．5克     甘油   20毫升

   吐温80（10%）5毫升     水   1000毫升

   枸椽酸钠    2．5克     动物血清 100毫升

   琼脂     1．5克（80小时用甲醇去脂）

   1%孔雀绿   0．78毫升   吐温80（10%）5毫升

   加动物血清  100毫升

制法：

1除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。

2

   2分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121℃半小时灭菌。

   3待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。

   4去除琼脂方法：

取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37℃温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。

质控标准：

1无菌实验合格。

     2琼脂硬度合适而清亮。

     3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。

用途：

培养结核杆菌用。

8、亚碲酸钾血琼脂平板

成份：

琼脂基础 100毫升   10%葡萄糖  2毫升

   1%亚碲酸钾4．5毫升   绵羊血   10毫升

制法：

1将琼脂基础溶解好，加入羊血。

   2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4．5毫升混合后倒入无菌平板，凝固后存冰箱备用。

质控标准：

接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。

用途：

供培养及鉴别白喉杆菌用。

9、米培养基

成份：

白米   20克     水  1000毫升

   琼脂   20克    吐温80 10毫升

制法：

1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。

   2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。

   3加琼脂20克，吐温-8010毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121℃半小时，消毒备用。

质控标准：

1灭菌。

     2要求清亮。

     3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。

用途：

培养白色念珠菌用。

10、蛋白胨水培养基

成份：

蛋白胨 1克   氯化钠  0．5克

   水加至 100毫升  PH调至  7．8

制法：

把以上各物称好溶于水，调节PH7．6分装消毒备用。

质控标准：

1放置37℃无菌生长。

     2接种大肠杆菌24小时生长良好。

     3可作中国兰平板基础液。

     可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。

11、血培养基

成份：

蛋白胨 10克     牛肉膏  5克

   氯化钠 5克     葡萄糖  3克

   枸椽酸钠 3克     MgSO4。

7H2O20毫升

   0．5%PABA10毫升  酵母浸液 10毫升 0．2克（2%过滤）

   *酚红0．4% 6毫升   水  1000毫升

    琼脂  0．5克  

*：

作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。

制法：

1、除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7．4

   2、调好PH后再加酚红。

   3、硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB） 

12、沙氏培养基

成份：

蛋白胨  1克           水  100毫升

   琼脂  1．5克（琼脂粉1克%）  葡萄糖或麦芽糖 4克

制法：

1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压115℃20分钟。

   2趁热斜好，凝固备用。

质控标准：

1无菌试验合格。

     2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。

用途：

作分离培养霉菌用。

注意：

1接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12．5%氯霉素沙氏斜面培养基上。

   2也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。

13、肉渣培养基

成份：

牛肉渣    牛肉浸液（牛肉膏）

制法：

将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH7．6）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约0．5厘米（不加也可），121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用。

用途：

用于厌氧菌培养。

注意：

如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。

14、单糖发酵管培养基（半固体）

 成份：

PH7．6-7．8蛋白胨水 1000毫升（0．3克/100毫升）

     1.2%酚红液   0．4毫升

     琼脂      0．4-0．5克

     10%糖或醇    10毫升

制备：

把蛋白胨水，琼脂加热溶解，然后加1．2%酚红液0．4毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115℃高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。

质控标准：

细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。

15、明胶培养基

成份：

肉浸液  1000毫升（牛肉浸膏5克）

   明胶   12克

制法：

 100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH7．2，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟，连续3日，或者108℃高压20分钟，冷却，贮存备用。

15-1、碱性蛋白胨水

成份：

 蛋白胨  20克     氯化钠  5克

 硝酸钾  0．1克   结晶碳酸钠（NaclCO3．12H2O）0．2克

 水   1000毫升

制法：

将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH8．4分装试管，121℃高压灭菌15分钟后备用。

用途：

用于霍乱弧菌培养。

16、葡萄糖蛋白胨水（M。

V用）

成份：

蛋白胨  5克    葡萄糖   5克

   K2HPO4  5克    水   1000毫升

制法：

将上述称好溶解分装试管，调PH7．4高压灭菌115℃灭菌20分钟，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管

标准：

灭菌试验合格。

接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。

用途：

作鉴别肠道杆菌用。

17、枸椽酸盐培养基

成份：

磷酸二氢铵 0．1克   硫酸镁  0．02克

   磷酸氢二钾 0．1克   枸椽酸钠 0．23--0．5克（0．36）

   氯化钠  0．5克   琼脂  1．5克

   0．5%溴麝香草酚兰2毫升（调PH6．8再加）

制法：

将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH6．8，然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固

  后备用。

标准：

1、灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。

   2、接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。

   3、接种产气杆菌，培养基呈深兰色。

用途：

作鉴别大肠杆菌用。

18、双糖铁培养基

成份：

 下层：

蛋白胨 1克    氯化钠  0．5克 

   葡萄糖 0．2克   琼脂  0．3-0．5克

   水  100毫升

  将上述物质混匀调PH7．6后加1．2%酚红0．4毫升

 上层：

蛋白胨 1克   氯化钠  0．5克

   乳糖  1克   硫代硫酸钠 0．03克

   硫酸亚铁0．02克  琼脂   1克

   水  100毫升

制法：

1将下层配好，分装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。

    2制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解PH8．1，再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟）。

    3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。

5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。

标准：

无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。

19、尿素培养基

成份：

蛋白胨  0．1克   氯化钠  0．5克

   磷酸二氢钾 0．2克   尿素  0．2克（或10%2毫升）

   葡萄糖  0．01克（或10%葡萄糖0．1毫升）

   H2O  100毫升   酚红（0．2%） 0．4毫升

  制法：

1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7．2过滤，15磅高压灭菌15分钟．

     2配制尿素（灭菌）液：

每100毫升基液内加2毫升．

     3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加0．1毫升．

     4分装小试管待用．

标准：

 1灭菌试验合格．

 2接种变形杆菌24小时呈红色．

用途：

鉴定变形杆菌用．

20、胆盐中性红琼脂

成份：

蛋白胨琼脂PH7．2-7．4  5000毫升

   胆盐           2．5克

   乳糖            5．0克

   对氨基苯甲酸       25毫克

   1%中性红溶液       25毫升

制法：

 将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60℃时，加入1%中性红液2．5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用．

*：

1%中性红：

1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升

21、丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）

成份：

丙二酸钠  0．3克  酵母浸膏  0．1克

   Nacl   0．2克  硫酸铵   0．2克

   K2HPO4  0．06克  KH2PO4   0．04克

   水    100毫升

   PH6．8，高压灭菌备用．

   0．2%溴麝香酚兰乙醇1．25毫升

制法：

与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源．无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色．

鉴定：

 克氏杆菌 （+）    赫夫尼亚 （+）

    沙门氏菌  （—）   痢疾杆菌  （—）