拮抗酵母菌对哈密瓜采后病害抑制效果的初步研究解读.docx
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拮抗酵母菌对哈密瓜采后病害抑制效果的初步研究解读
基金项目:
石河子科学研究与技术开发计划（NY2006。
作者简介:
裴世琪（1982-,男,甘肃靖远人,硕士研究生。
研究方向:
农产品加工与贮藏。
收稿日期:
2008-12-11
拮抗酵母菌对哈密瓜采后病害抑制效果的初步研究
裴世琪 童军茂 寇霄腾 王鑫腾
（石河子大学食品学院,新疆石河子 832003
摘 要:
对从实验室筛选的具有拮抗效果的酵母菌,采用不同活化条件、菌种不同处理方法、设置不同浓度梯度以及添加外源营养素对其进行处理后,涂抹于哈密瓜表面,对其病害抑制效果进行研究分析。
结果表明:
最佳活化条件培养时间为42h,培养基浓度为12Brix,装液量为150mL,适用浓度为108cfu/mL的酵母菌悬液,同时加入015%的壳聚糖,效果最为明显。
关键词:
哈密瓜;拮抗酵母;生物防治
中图分类号 S436.42 文献标识码 A 文章编号 -（--BiologicalControlofsesi-melonUsingAntagonisticYeasts
PeiShiqietal.
Abstract:
Prelimwhichweretreatedbydifferentways,differentconcentrationgradientandaddexogenousisolatedfromthelaboratory1TheyweresmearedonthesurfaceofHami-melonsbymen2suratingtoanalyseeffectofdiseasecontrol1Itisareferenceforensurementofbiologypreventionandcuremeasurement1Keywords:
Hami-melon;Antagonisticyeasts;Biologicalcontrol
新疆地处欧亚大陆桥腹地,为典型的大陆性气候,昼夜温差大、日照时间长,造就了哈密瓜的资源优势。
哈密瓜以果型大、香气浓郁、味甘可口、色泽美丽诱人而驰名中外,远销我国东部沿海发达地区或出口欧美等国家
[1]
。
近年来,对哈密瓜的贮藏还只是停留在简单的堆藏、沙藏、地窖贮藏、简易冷藏、化学药剂贮藏、涂膜等方法上,但这些成果绝大部分还停留在传统的化学杀菌剂方面。
在生活水平日益提高的今天,农药残留越来越受到人们的关注。
本文在筛选的可用于哈密瓜采后病害防治的拮抗酵母的基础上,对该拮抗酵母对哈密瓜采后病害抑制效果进行了初步研究,为生物防治方法的确定做参考。
1 材料与方法
111 实验材料
11111 试验材料 伽师瓜,产自新疆哈密。
11112 实验设备 SW-CJ-100型超净工作台（苏净集
团安泰公司、DNP-9272型电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司、SPX-250B-2型生化培养箱（上海博远实业有限公司、UVmini∃1240型紫外可见分光光度计（日本岛津、贮藏库（石河子大学食品学院保鲜库。
11113 供试菌种 石河子大学食品学院微生物实验室
从哈密瓜生长环境中筛选的酵母菌（编号YE-38。
112 实验方法
11211 生长曲线的测定 对于采后生物防治的酵母菌,
了解其生长特性,确定其各个生长阶段,对研究拮抗菌对病害的抑制效果具有指导意义。
挑取单个菌落接种于
150mL汁培养基中,12℃、110r/min振荡培养48h,取扩
大培养的菌液按照1∶100的接种量接种于3瓶150mL豆芽汁培养基中,同样条件下振荡培养,并分别于培养后6、
12、18、24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90h取菌体
培养悬液5ml,以未接种的豆芽汁液体培养基校正UVmini∃1240型紫外可见分光光度计的零点,在波长550nm处比色测定菌液的OD550值。
以各时间点菌液的吸光光度值（OD550为纵坐标,以培养时间为横坐标,绘制出酵母菌的生长曲线
[2]
。
11212 最佳活化条件的选择 酵母的培养活化条件对酵
母细胞的活性影响很大,而酵母活性对发挥其抑菌作用是至关重要的。
本实验选取了活化条件中对拮抗酵母抑菌效果影响较大的因子（培养时间、培养基浓度和装液量用正交实验的方法进行优化[3]
。
其活化条件正交实验设
计因素水平见表1。
表1 活化条件正交实验设计因素水平表
水平
因素
培养时间（h
培养基浓度（Brix
装液量（mL
1241050242121003
60
14
150
11213 菌种不同处理方法对其抑菌效果的影响 本实验
分别选取拮抗酵母培养原液、细胞悬浮液、滤液、热杀死液对哈密瓜进行涂抹处理,处理4h后再喷涂浓度为105
cfu/
mL的病原菌悬浮液。
用PE保鲜袋进行包裹,于15℃下
进行贮藏,30d后观察效果。
同时用无菌水做对比实验。
11214 菌悬液浓度对抑菌效果的影响 实验中,分别用
不同浓度的拮抗酵母菌悬液对哈密瓜进行喷涂,喷涂后处
431安徽农学通报,AnhuiAgri1Sci1Bull12009,15（1
理方法与11213相同。
11215 添加有机营养物对抑菌效果的影响 有研究表
明,拮抗酵母用于生物防治中,适量添加外源营养物对拮抗效果的改善很有帮助
[6]
。
因此,本实验引入不同类型的
有机碳源,观察对哈密瓜病害的抑制效果。
实验中,分别在108cfu/mL的拮抗酵母菌悬液中加入蔗糖、葡萄糖、蛋白胨以及壳聚糖,其中蔗糖、葡萄糖浓度为1%,蛋白胨为
2%,壳聚糖为015%。
处理方法与11213相同。
2 结果与分析
211 拮抗酵母的生长曲线 从图1可以看出,从接入菌
种6-30h内为其对数生长期,30-66h
为其稳定生长期,然后进入衰亡期。
图1 12℃条件下酵母菌YE-38的生长曲线
212 最佳活化条件的选择 根据表1中的因素和水平进
行设计正交实验,在实验中,按照设计的实验方法进行拮抗酵母的活化,用活化好的酵母菌悬液对哈密瓜进行处理
[3]
。
其实验设计和结果见表2:
表2 正交实验设计及实验结果
试验号
因素
培养时间
（h培养基浓度（Brix
装液量
（mL发病率
（%1111422122403133414212255223266231307313378321299
33232
K1411000341667331667K2271000311667321333K3321667341333311667R
141000
31000
21334
由R值大小可以看出,影响发病率的主要因素顺序依次为:
培养时间>培养基浓度>装液量。
其最佳组合应该为A2B2C3,即培养时间为42h,培养基浓度为12Brix,装液量为150mL。
213 菌种不同处理方法对抑菌效果的影响 拮抗酵母培
养液的不同形式对哈密瓜的采后病害具有不同的作用效果,研究认为,这与拮抗酵母的抑菌机理有关
[4]
。
由表3
可以看出,拮抗酵母悬液最能有效地抑制哈密瓜上的采后病害。
用108
cfu/mL的拮抗酵母悬液处理的哈密瓜表面病斑直径和发病率仅为215cm和26%,效果明显好于对
照和其它处理。
培养原液和细胞悬浮液相比,由于培养原液里含有大量该拮抗酵母所需的营养物质,而不去与病原菌竞争生存空间和营养物质。
滤液、热杀死液和无菌水的效果相差不大,表明该拮抗酵母主要是活细胞在起作用,滤液和热杀死液均没有活细胞,所以起不到拮抗的效果。
根据试验结果可初步断定该拮抗酵母的主要作用机理为营养和空间的竞争。
表3 菌种不同处理方法对抑菌效果的影响
处理方法病斑直径（cm发病率
（%处理方法病斑直径
（c
m发病率
（%培养原液
318431热杀死液
415636细胞悬浮液2153264121
40
414 研究表明,拮抗
在寄主表面与病原菌竞争的数量就越,这样拮抗酵母就可以快速争夺伤口处的营养物质,其抑菌效果越好。
因此研究悬液浓度与其抑菌效果的关系对于生物防治方法的确定有指导意义。
从表中可以看出,拮抗酵母的抑菌效果和悬浮液浓度有着很密切的关系,拮抗酵母悬浮液浓度越大,越能有效地抑制哈密瓜的采后病
害。
但当菌悬液浓度达到109
时,其拮抗效果反而变差。
分析认为其主要原因是,由于高浓度的拮抗酵母的接入,使得可供拮抗酵母生存的空间变小,从而相互之间开始竞争,使得拮抗效果变差。
因此,在实际操作中菌悬液浓度宜选用108
cfu/mL。
表4 菌悬液浓度对抑菌效果的影响
菌悬液浓度（cfuu/mL
病斑直径（cm发病率（%菌悬液浓度（cfuu/mL病斑直径（cm发病率
（%10921843110621824110
8
21532610
5
3167441072192
30
无菌水
4121
40
表5 外源有机营养物对拮抗酵母抑菌效果的影响有机营养物病斑直径
（cm发病率
（%有机营养物病斑直径
（cm发病率
（%蔗糖215227壳聚糖213619葡糖糖217326无菌水
4121
40
蛋白胨
3115
28
215 添加有机营养物对拮抗酵母抑菌效果的影响 从表5中可以看出,在拮抗酵母的悬浮液中添加壳聚糖效果最
明显,葡萄糖和蔗糖效果相差不大,效果较添加壳聚糖稍差,加蛋白胨效果最差。
这是因为哈密瓜表面营养物质较少,添加少量营养物质可在一定程度上提高该拮抗酵母的活性而不至于营养物质被病原菌利用。
同时壳聚糖也是一种很好的保鲜材料,壳聚糖涂膜后在一定程度上可改变钙在细胞内存在的状态,使结合态钙增多,可溶性钙减少,因而可以增强拮抗酵母的细胞壁和细胞膜的稳定性有关。
3 结论
通过对所筛选的拮抗酵母进行研究,得到最佳活化条件培养时间为42h,培养基浓度为12Brix,装液量为
150mL,适用浓度为108
cfu/mL的酵母菌
（下转75页
5
31安徽农学通报,AnhuiAgri1Sci1Bull12009,15（1
营养贫瘠,严重影响植物生长和绿化景观效果。
因此在地被植物选择上要达到一定的标准:
（1多年生、植株低矮,高度不超过1m。
（2全部生育期在露地栽培。
德州市位于山东省西北部,夏季炎热,冬季寒冷,为延长绿色期,增强景观效果,要求地被植物应全部生育期在露地栽培。
（3繁殖容易,生长迅速,覆盖力强,耐修剪。
（4花色丰富,持续时间长或枝叶观赏性好。
（5具有一定的稳定性。
（6抗性强,尤其是抗盐碱能力强,且无毒,无异味。
（7能够管理,即不易泛滥成灾。
4 地被植物的园林配置
地被植物在城市园林应用中很广,在树木下、石旁、水边、草坪上等都很常见,如锦绣川风景区河道两旁的鸢尾、榆树林下的连翘、金银花;新湖风景区道路两旁的蔷薇,岩石缝的迎春、迎夏,
411
中的下层,突出上层乔、灌木的优良景观效果,与上层错落有致地组合,使群落层次分明。
锦绣川风景区大片高大的榆树林下选用一些较高的地被植物如连翘、金银花、紫薇等,其周围还有修剪成略矮一些的的千头柏、紫叶小檗形成一定层次的景观效果。
在河道两旁岩石边有大面积的鸢尾、萱草及景天类植物,给人以美的享受。
412 色彩搭配协调 地被植物的色彩多为绿色,为避免单调,在人民公园大门口,利用小龙柏、金叶女贞良种叶色不同深浅的绿取得同色系的协调;并用叶色反差较大的紫叶小檗修剪成“人民公园欢迎您”的字样。
在锦绣川风景区河道两旁与树林下绿茵似毯的草地上,点缀着一些紫花地丁、白三叶、黄花蒲公英等观花植物,充满了生机和野趣。
5 地被植物在城市绿化中应注意的问题
511 地被植物在城市绿化中应尽量遵循自然规律,营造稳定的植物群落结构 德州市绿化在地被植物应用上近几年来取得了一定的成效,但在大部分地区还存在种群单一的现象,在开发区广场及长河公园等大范围的绿地均采用单一的“三叶草”地被植物,夏天景观效果确实很好,但在寒冷的冬季则是一片枯黄,一片萧条的景象。
512 地被层尽量营建免修剪或少修剪的群落 现在街道上普遍应用各类灌木树种通过密植形成色块,色块在设计上应尽量新颖,避免各个街道都千篇一律,不能突出个体的特色。
51 充分利,根据植物的,避免把阳,导致植物生长不良,直接影响绿化效果。
514 做好土壤的改良工作,积极引进外来优良的园林地被植物 德州市土壤盐碱化程度严重,在做好土壤改良工作之余,应尽量选择一些抗盐碱能力强的地被植物。
近年来在德州中心广场、青少年宫等绿地上,通过铺设隔盐层、施肥改碱等技术措施,成功引进了鸢尾、麦冬、玉簪等地被植物。
也引进了一些外来植物,如鸢尾、麦冬、玉簪等。
参考文献
[1]董丽1园林花卉应用设计1北京:
中国林业出版社,2003
[2]郭维明,毛龙生1观赏园艺学概论1北京:
中国农业出版社,2001[3]上海市林学会1草坪与地被植物1北京:
中国林业出版社,1995[4]张艳敏1地被植物连线草在北方城市中应用1北方园艺,2001（5:
53
[5]俞洋1地被植物1中国园林,1989,5
（责编:
张琪琪
（上接146页不断积累虫源,导致周边地方暴发成灾。
4 综防对策
411 农业防治 1清除杂草,收获后翻耕晒土或灌水,以破坏或恶化其化蛹场所,有助于减少虫源。
2结合管理时,随手摘除卵块和群集危害的初孵幼虫。
412 物理防治 1点灯诱蛾。
利用成虫趋光性,于盛发期点黑光灯诱杀成虫。
2糖醋诱杀。
利用成虫趋化性配糖醋（糖∶醋∶酒∶水=3∶4∶1∶2加少量敌百虫诱杀蛾。
3在发生前期利用水淹没滩涂地,淹杀部分虫源,恶化其生境,以减少虫源。
4利用滩涂地放牧、禽等,破坏或恶化其生态环境,减少虫源。
413 化学防治 斜纹夜蛾对药在一定抗药性,因此,用药防治可交替喷施50%氰戊菊酯乳油4000-6000倍液,或215%功夫4000-5000倍液,或20%灭扫利乳油3000倍液,或80%敌敌畏、或215%灭幼脲、或25%马拉硫磷1000倍液,施用2-3次,每隔7-10d施药1次,喷匀喷足。
（责编:
陈真
（上接135页悬液,同时加入015%的壳聚糖,效果最为明显。
参考文献
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13
[2]郭春叶,龚月生,刘林丽等1酵母菌生长曲线的测定及其转葡萄芪合酶基因重组菌遗传稳定性的检测1安徽农业科学,2007,35（7:
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6-9
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[5]林丽,田世平,秦国政等1两种拮抗酵母菌对桃果实贮藏期间主要病害的防治效果1中国农业科学12003,36（12:
1535-1539[6]郭萍萍,宗兆锋,李同兴等1野生山楂上苹果病害生防酵母菌的筛选1西北农林科技大学学报（自然科学版12008（6:
175-179（责编:
张琪琪57
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