粪便检验及进展.docx

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粪便检验及进展

粪便查验及进展

xxxxxxxxxx

粪即是由未消化的食品、经消化后未汲取的食品残渣与消化系统分泌物、消化道粘膜零落物以及微生物、寄生虫等构成的混淆物。

进行粪查验能够获取被检者消化系统功能、病理变化以及微生物和寄生虫感染等宽泛的信息，详细来说，进行粪查验，一能够认识消化道及通向消化道的肝、胆胰等器官能否有阻塞、炎症和出血等状况；二能够挑选和诊疗消化道恶性肿瘤；三能够大略判断胰腺的外分泌功能；四能够诊疗消化系统的某些微生物和寄生虫感染。

第一节粪便惯例查验方法回首

一、目视检查

在某些疾病状况下，粪便的颜色、性状等有特定的明显改变，这些肉眼可见的明显变化拥有必定的诊疗意义。

如在胆道阻塞时，粪便因缺少胆色素而呈白陶土样灰白色；上消化道出血时，大即可呈柏油样黑而拥有特别光彩；在霍乱、副霍乱时，大便呈米泔水样；在阿米巴肠炎时，大便常常带有果酱样的脓血；在肿瘤等以致下消化道出血或痔疮出血时，大便常常带有鲜血。

此外，消化不良时，粪便含许多未消化的食品残渣；蛔虫、绦虫等寄生虫感染时，有时能从粪便中看见虫体。

二、xx检查

借助一般光学显微镜，我们能够检出粪便标本中的脂肪小滴、血细胞、真菌、某些寄生虫和寄生虫虫卵等病理成分有。

发现脂肪小滴增加提示有肠蠕动亢进、腹泻或胰腺外分泌功能减退等可能；发现大批脓细胞或白细胞，提示有菌痢等感染性肠炎；发现大批红细胞和极少许白细胞，多提示为下消化道出血或痔疮出血；发现大批真菌能够确诊真菌性肠炎；发现寄生虫或虫卵能够确诊该寄生虫感染。

经过电子显微镜，我们还能够检出粪便标本中的某些病毒体。

三、粪便的化学检查

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惯例的粪便化学查验主要包含粪便隐血实验和胆红素及其衍生物查验。

隐血实验主要用于消化道出血的诊疗。

胆红素及其衍生物查验可用于严重腹泻、消化道菌群大批克制、胆道阻塞以及溶血性疾病的协助诊疗实验。

四、大便致病菌查验

人类的肠道中有大批种类众多的微生物，此中绝大多数是不致病的如：

各样厌氧菌、大肠埃希氏菌和肠球菌等，只有少部分为致病微生物。

大便的细菌学查验惯例的目的就是从这些大批的微生物中分别出致病菌。

1．霍乱弧菌查验。

霍乱在我国《急性传得病管理条例》中列为“甲类”，其

发病急，病程进展快，所以要求快速、正确报告。

临床上常常依据霍乱弧菌在革兰氏染色中的形态及特别的“鱼群样”摆列，在暗视线下的快速运动及相应抗血清的制动实验等进行快速的初步报告，再进行分别培育、判定来确诊。

2．其余致病菌分别培育。

目前已认识到的能从粪便中发现的病原微生物达

数十种之多，如沙门氏菌属、志贺氏菌属、酵母菌以及致病性大肠杆菌和绿脓杆菌等。

要从大便标本的大批菌群中分别这几十种致病菌，查验科一般采纳选择性培育基如SS琼脂、GN增菌液、麦康凯琼脂等。

可是目前没有一种能用于所有致病菌的选择培育基（事实上很难或不行能作到），所以临床上常常采纳多种选择性培育基联用以提升检出率。

五、其余大便查验

1．大便的病毒查验

目前研究最多的是轮状病毒和甲型肝炎病毒的查验。

有研究报告指出轮状病毒是我国婴幼儿秋冬天节流行性腹泻的主要致病病原，因为这种腹泻没有特色性的病变指标，从大便中检出轮状病毒就是重要的诊疗依照。

而粪便中甲肝病毒的检出则是该病人拥有传染性的靠谱依照。

因为病毒体积细小、生命形式不完美，这使得一般显微镜和无生命培育基在病毒查验中无用武之地。

可用的查验方法有：

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血清学方法、电镜察看与分别培育（用动物接种、组织培育、细胞培育等）等。

临床上常常采纳免疫学方法进行快速诊疗，且正确性和敏捷度都较高。

电子显微镜或分别培育的方法比较费时、费事，常常在研究中采纳。

2．大便寄生虫查验

在目视检查和显微镜检查中，已经有大多数寄生虫感染能被检出。

可是，因为虫卵和虫体在粪便中的散布高度不均一，使得目视检查和一般的涂片镜检结果重复性很差。

在高度思疑寄生虫感染的病例，应采纳集卵法以及虫卵孵化实验等以提升检出率和重复性。

3．大便的零落细胞查验

在下消化道肿瘤时，肿瘤表面细胞会零落并随粪便清除，在粪便中发现肿瘤细胞能够确诊某些下消化道的肿瘤。

可是，因为肿瘤细胞的零落拥有随机性，且细胞量极少、取材难，因此检出率不高。

此外，上消化道肿瘤的零落细胞因为经过胃肠道的消化作用，难以被检出。

这使得用惯例的方法进行大便零落细胞查验的适意图义不大。

总的来说，大便查验的好多方法都已经很成熟和规范化、规程化。

有关的查验操作及查验结果的临床意义请拜见《临床查验操作规程》以及有关教材。

本章主要介绍目前一些比较新的查验方法在大便查验中的应用及所带来的诊疗意义。

第二节大便隐血实验的进展

隐血实验是指检查胃肠道隐性出血的一类实验方法。

对胃癌和大肠癌等消化道肿瘤，连续的消化道出血可能是其初期出现的独一特色，且大便隐血检查属无创检查，试验方便、花费便宜，合适进行长久察看，因此大便隐血试验则目前依旧是初期发现的较好试验。

传统的隐血实验是利用血液中RBC的血红蛋白的亚铁血红素拥有类过氧化物酶作用，能分解H2O2为水和活性氧而设计的简略化学试验。

这种方法固然成本便宜、简单易行，但特异性差、敏捷度较低，易受食品及服用药物成分的影

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响。

为解决传统隐血试验的特异性问题，人们探究了一些新的隐血试验方法，好像位素铬（51Cr）法等同位素法和各样免疫学方法。

一、同位素方法

（一）铬（51Cr）法测定大便隐血量

1．原理

51Cr-红细胞经静脉注射后,正常不进入消化道,消化道出血时则进入其实不被吸

收,随大便排出。

将大便中的放射性与每毫升血液中放射性比较计算可求出胃肠道出血量。

2．方法

静脉注射51Cr-R

BC7.4MBq后,采集72小时大便,称重测放射性,并在开始时和采集大便结束时抽静脉血测每毫升放射性计数。

按公式计算结果。

72H出血量（ml）=大便总放射性/每毫升血放射性

（二）胃肠道出血的锝标的红细胞法定位诊疗

1．原理

当胃肠道出血时,锝标的红细胞或胶体随血液进入胃肠道。

2．方法

静脉注射显像剂后以2-5分钟一帧的速度连续显像

0.5-1小时,必需时延缓显像。

但胶体不可以进行延缓显像。

3．临床应用

适应于活动胃肠道出血的诊疗和大概定位。

急性活动出血用锝标胶体显像,间歇出血者用锝标RBC显像。

诊疗正确率在80%左右,能够探测出血率高于每分钟

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0.1ml的消化道出血。

只管同位素方法的敏捷度和特异性无可厚非，甚至还能够对出血点进行正确的定位，但临床很难接受将一种应用放射性同位素的、操作复杂的、需要特别仪器的方法广泛用来进行一个没有特异性的指标的查验。

二、免疫学方法

免疫学方法以其特异性和敏捷度而广受临床查验的欢迎。

鉴于免疫反响的隐血实验方法是目前发展最快也最有临床适用价值的隐血实验方法。

应用免疫学方法的隐血实验拥有很好的敏捷度，一般血红蛋白为

0.2mg/L或

0.03mg/g粪便即可获取阳性结果，且有很高的特异性，各样动物血血红蛋白在500mg/L、辣根过氧化物酶在2000mg/L时不会出现扰乱，因此不需控制饮食。

依据文件报导，有三类抗体可用于粪便的隐血实验：

一种为抗人血红蛋白抗体，一种抗人红细胞基质抗体，另一种为抗血液中

其余成分如α1-AT、Tf、Hb-Hp等。

采纳抗α1-AT、Tf、Hb-Hp等抗体的隐血实验对所有消化道出血均呈阳性反响；而抗人血红蛋白法和抗人红细胞基质法隐血

试验主要检测下消化道出血，约有40-50%的上消化道出血不可以检出，原由是：

①血红蛋白或红细胞经过消化酶降解就业性或消化殆尽已不拥有本来免疫原性；

②过度大出血而致反响系统中抗原剩余出现前带现象；

③病人血红蛋白的抗原与xx抗体不配。

所以，抗人血红蛋白法或抗人红细胞基质的隐血试验目前被以为是对大肠癌普查最合用的试验。

为了使免疫学方法在检测粪便潜血时尽可能简易，以适应大规模大肠癌普查的需要和临床快速报告的要求，有的企业已经推出单克隆抗体一步法试验，如美国万华普曼生物工程有限企业。

他们所采纳的粪便潜血

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免疫一步法是一种快速简易，无嗅无味的三明治夹心免疫查验法。

拥有特异性强、高灵每度（

0.03mgHb/g粪）、查验快速（1-5分钟）、便操作简单（一步查验）、试剂易保存（室温）和结果简单易读的长处，在诊疗和治疗惹起肠胃道出血的疾

病有重要意义。

特别是消化道癌肿患者87%便隐血为阳性。

可是，据Herzog和Cameron等研究，正常人24小时胃肠道生理性失血量为

0.6ml，因为免疫学方法的高度敏感性，在某些正常人特别是服用刺激备用肠道药物后或处于应急反响状态时也可能造成假阳性。

三、其余方法

最近几年来某些实验室还采纳卟啉荧光法血红蛋白定量试验，用絷草酸试剂使血红素变成卟啉进行荧光检测，这样除可测粪澡未降解的血红蛋白外，还可测血红素衍化物卟啉，进而战胜了化学法和免疫法受血红蛋白降解影响弊端，可对上、下消化道出血相同敏感，但外源性血红素、卟啉类物质拥有扰乱性，且方法较复杂，故不易推行使用。

第三节粪便基因查验的研究进展

最近几年来，大肠癌发病率有上涨趋向，全球每年新增病例高达57万，占所有确诊癌症的4%[1]。

大肠癌的症状体征均无特异性，以致临床上确诊的大肠癌大多数为中、后期，临床治疗成效差，5年生计率极低。

如能初期诊疗出大肠癌，可使90%以上的患者获取治愈。

所以，大肠癌的挑选诊疗工作特别重要。

既往应用最广泛的挑选检查是大便潜血实验（FOBT），固然FOBT在挑选大肠癌方面获得一些进展，但有很高的假阳性率和假阴性率。

纤维结肠镜检查是检出

大肠癌的靠谱方法，但该方法为侵入性且需要必定的设施和仪器，操作要求也较高，目前尚不可以用于大范围人群挑选普查。

肿瘤标志物检查，如癌胚抗原

（CEA）、CA19-9及肿瘤有关抗原T、Tn及TAG-T2等，固然对大肠癌的临床诊疗及预后判断有帮助，但对初期大肠癌诊疗的特异性及敏感性均不高。

跟着分

子生物学的发展，人们认识到肿瘤的发生发展归因于有关基因突变，而粪便中的零落细胞包含着与大肠癌关系亲密的突变基因，粪便中基因检测可望成为挑选诊疗大肠癌的新方法。

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一、粪便基因筛检的分子生物学基础

分子生物学研究表示，肿瘤的产生是多能干细胞向正常细胞增殖、分化的过程中，受环境要素和遗传要素的影响，有关基因发生改变的结果。

肿瘤细胞的基因与基因表达与正常细胞有明显差别，所以如能检出这种基因改变就能为肿瘤的诊疗和预防供给条件。

肿瘤不是单基因疾病，肿瘤的发生发展是肿瘤有关基因的多阶段累积的改变过程，波及到多种癌基因激活和多种抑癌基因失活。

如能在初期检出基因突变信息，就能够获取细胞癌变的信号，进而对肿瘤

的初期诊疗和预防带来踊跃意义。

目前以为一种肿瘤的产生需要4～5个有关癌基因的改变；与大肠癌有关的癌基因主要有ras、c-myc、-erb2等，与大肠癌有关的抑癌基因主要有APC/M

CC、D

CC、p53及RB等。

在大肠癌形成过程中，ras、c-myc癌基因和AP

C、MCC抑癌基因的改变是初期事件。

Ras基因改变主要发生在

12、13或16密码子，大概50%的大肠癌和50%的大肠腺癌（直径>1cm）发现有ras基因突变。

等位基因的丢掉最常有于17p染色体等位基因的缺失。

虽

然这种缺失在大肠腺瘤的各个期间都极少见到，但有人发现17p等位基因丢掉

与腺瘤向癌转变有关。

17p染色体等位基因丢掉的常有部位为p53基因，K-

ras、p53基因是人类癌症最常有的突变基因，二者的检出对大肠癌的诊疗很有帮助。

包含APC基因和MCC基因的5q等位基因的缺失占发散性大肠癌的35%。

这些基因的特异性改变可成为诊疗肿瘤的标志。

人们很早就发现，结肠粘膜上皮不停零落入肠腔随粪便排出，其更新周期约为每小时1%，整个大肠粘膜约3～4天即可从头改换一次，而生长旺盛的肿瘤组织更新更快。

固然这些粘膜细胞零落伍很快从粪便中排出，但因为粪便物质的存在，用零落细胞学手段难以发现异样细胞。

要进行细胞学剖析，只有从直肠、结肠的灌洗液中才能获取比较洁净的细胞，这无疑又增添了方法的难度和病人的难过。

但是，应用分子生物学技术检测粪便中的有关基因突变，则不受粪便其余物质的影响，且能够批量筛查，可望称为大肠癌的挑选和初期诊疗的一种敏感而有效的方法。

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二、粪便基因突变检测方法

Sidransky于1992年初次论述能够从大肠癌粪便零落细胞检出K-ras基因突

变，但他所采纳的方法比较复杂，因此不可以用于惯例例行诊疗。

目前检测粪便基因突变的方法主要有：

（1）免疫组织化学检测（IHC）；

（2）Southern印迹杂交；

（3）DNA直接测序；

（4）PCR产物单链DNA泳动变位技术和错配PCR技术。

传统的Southern

印迹杂交和DNA直接测序，固然可正确地确立突变的种类及部位，但操作复杂、技术要求高、时间长、花费较高，不适用于临床筛检基因突变。

目前多采

用的是免疫组织化学法检测癌有关基因产物，如检测p53蛋白、ras基因的p21蛋白及c-mye的p62蛋白。

固然该技术简单，但有相当一部分基因改变检测不

到，且运用不一样的抗体需要不一样的解说标准，临床意义也不一样。

Soong等用IHC

检测p53蛋白和用PCR-SSCP检测p53基因突变发现，IHC对大肠癌的p53蛋白检测率为23%，而PCR-SSCP剖析技术检出p53基因突变率为39%，二者的切合

率为68%，不切合率为32%，说明p53蛋白累积不可以代表有p53基因突变，反之亦然。

Hall等也以为p53蛋白免疫组化阳性其实不必定是突变的p53累积，还可能是稳固的野生型p53蛋白在起作用。

因为当正常细胞的DNA受伤害时，野生型p53蛋白也会过度表达。

在其余种类的癌组织中也发现p53蛋白增添并无相应的p53基因突变。

PCR及其有关技术的快速发展也为快速、简易、敏捷地挑选突变基因带来

了可能。

此中PCR产物的单链DNA泳动变位技术（mobilityshifts）在诊疗基因

突变方面有满意的敏感性（90%～100%）并能挑选大批样本。

该技术包含变性

梯度凝胶电泳（DCGE）、温度梯度凝胶电泳（TGGE）、限制性片段多态性剖析

（RFCP）、单链构象多态性剖析（SSCP），此中，DGGE和TGGE法价钱昂贵，其临床应用受限制。

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目前，PCR-SSCP是最受重视的剖析技术，该技术利用相同长度的单链DNA

在非变性的凝胶电泳中不一样迁徙地点仅取决于单链二级空间构象——碱基摆列构造，进而将突变基因片断与正常基因片断划分开来。

其长处为：

（1）操作简单，不需要特别仪器，技术简单掌握；

（2）实验周期短，最快可在24小时内获取检测结果，其实不受PCR扩增差错的影响；

（3）不单可检查出单碱基置换，还可检出数个碱基插入或缺失；

（4）可彩非放射性同位素标志，使其更简单在临床上推行使用。

日本学者

Equchi于1996年开始对粪便标本中的p53基因进行PCR-SSCP剖析，结果发此刻11例有p53基因突变的手术标本中有7例在粪便中查出p53基因突变；在5

例潜血试验阻性的病人中有3例粪便标本检出p53基因突变，故以为利用PCR-SSCP对粪便肿瘤物异的基因突变进行剖析可在临床推行应用。

但该技术易产生

假阻性，为其不足之处。

这可能是因为在扩增的片断中，大多数为正常的基因

片段，突变的基因片段较少，所以在电泳泳动变位上显示不好。

为了确立PCR-SSCP检测的敏感性，Silvano等将肿瘤细胞混以正常细胞，浓度挨次由0%-90%

递加，而后进行PCR-SSCP剖析，结果发现当彩放射性标志时肿瘤细胞浓度须达

5%，PCR-SSCP剖析才能检出p53基因突变，而当用非放射性标志时肿瘤细胞浓度一定达到10%-15%才能显示出阳性结果。

在大肠癌患者粪便中，特别是初期癌患者的粪便中，正常的DNA片断常高出异样DNA片段100-1000倍，使用SSCP剖析时肿瘤有关基因的泳动变位不清楚。

近来年常有人彩特异等位基因PCR扩增（ASA）能够解决这一难题。

其主要原理是当异性引物与模板之间出现错配（mismatch），特别是3’尾端碱基与模板之间出现错配时，因为TagDNA聚合酶缺少3’-5’核酸外切酶活性，所以对错误配对的碱基不可以进行改正，故该引物的PCR扩增速率将急剧降落甚至扩增中止。

有人设计出一个能与突变体基因片段正常配对而与正常片断错误配对的引

物，主假如在3’尾端的碱基进行改正。

该方法的长处是敏感性、特异性很高，能够从100个正常和不正常细胞中检出一个突变细胞。

别的，该技术不需要限

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制性酶消化及与特异性等位基因相联合的寡核苷酸，也不需要对PCR产物进行测序剖析。

由该原理还可产生其余方法，如misnatchedPCR\ARMS（amplification

refraitorymulationsystem）、mutentenrichedPCR。

该技术对单基因疾病如遗传病

成效好，但肿瘤波及到多基因改变，而且每个基因有多种突出，比如p53突变

种类达350种，所以目前该技术主要应用于对K-ms基因突变的检测。

因为K-ms

基因的突变几乎老是发生于三个密码中的一个，所以设计检出K-ms基因的敏感试验要设计检出其余肿瘤有关基因改变要简单得多。

德国学者Nollaan于1996年彩突变体富集PCR技术检测粪便中K-ms基因的

12、13密码子的基因改变，16例大肠癌手术标本经用PCR-SSCP剖析后证明无K-ms突变的病人粪便中，经突变体富集PCR技术检测有2例K-ms突变，经过敌手术标本再次作PCR-SSCP剖析检测发现，确有1例手术标本中有K-ms突变。

该作者以为该技术拥有简易、敏捷性、特异性高等长处，临床上可用于检测粪便中的K-ms突变，有助于大肠癌的初期诊疗。

除在粪便中检出基因突变以期初期诊疗大肠癌外，人们还开始在尿液、胰

液、痰液、支气管肿泡灌洗液、CSF等排泄物、分泌物中查找有关基因突变，以

便能初期诊疗有关部位癌症。

相信跟着技术的改良，应用分子生物学技术检测肿瘤特异性基因将成为诊疗肿瘤的重要方法。

第四节粪便查验的新思路

免疫学、分子生物学等新技术的引入给粪便查验带来了崭新的查验手段，这使得临床粪便查验技术获取了快速的发展。

可是，不论是免疫学方法仍是分子生物学技术，都是拥有很强的查验目的针对性的方法，难以经过一次或几次实验就解读出病人粪便中所包含的消化功能、新陈代谢、菌群杂乱以及肿瘤等丰富的生理、病理信息。

换言之，这些方法在为大便查验带来高特异性的同时，也抛弃了大批的、可能极有价值的信息。

有没有特异而又拥有高通量的方法呢？

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一、基因芯片技术

基因芯片的观点来自于计算机芯片，其实质是在面积不大的基质表面有序地摆列了大批可寻址的辨别分子。

详细地说，就是在玻璃、硅等载体上有序

地、高密度地（点与点之间的距离一般小于500）摆列、固定了大批的靶基因片

段（也叫探针分子）。

这些被固定的探针分子在基质上就形成了高密度DNA微阵列。

所以，基因芯片（GeneChip）也叫基因微矩阵（GeneMicroarray）。

由上边的基因芯片的定义能够看出，基因芯片技术实质上是一种高度集成

的基因探针杂交技术。

它既承继了DNA探针杂交技术的高特异性，又具备了同

时检测多靶基因的实验高通量的特色。

固然基因芯片拥有另人激励的优胜性，但因为它仍是一种崭新的实验技术，目前还没有来得及应用到大便查验上来。

就目前的技术来看，设计一张集成有消化道肿瘤基因辨别谱、消化道病毒基因辨别谱、消化道常有致病菌基因辨别谱、消化道寄生虫基因辨别谱的“大便查验基因芯片”并无技术上的困难，不过目前基因芯片的成本太高，实验方法也略显烦杂。

但跟着大规模应用

后成本的降低和实验方法的进一步改良，出现可应用于临床的“大便查验基因芯片”是早晚的事。

自然，我们不可以悲观等候，我在此说起基因芯片技术，就是希望各位能在这方面作些工作，加速临床粪便查验技术进步的步伐。

二、色、质谱剖析

基因芯片等新兴技术固然给肿瘤、病原体等有生命的病原带来了查验手段的打破，可是，关于胃肠道功能、胰腺功能等消化功能的查验就力所不及了。

所以，我们在踊跃采纳新技术的同时，也不要忘掉成熟技术的新应用。

色谱法是一种经典的分别技术，它利用因混淆物各组分在性质与构造上的差别而在流动相携带混淆物流经固定相时，混淆物中各组分与固定相互相作用的强弱而实现混淆物各组分的分别。

依据流动相的不一样，色谱法又成立气象色谱和液相色谱。

质谱法是利用混淆物中各组分的质量与所带电荷的比值不一样而实现组分分别的分别技术。

目前，利用色谱法和质谱法成立的剖析方法有气相色谱法、高效液相色谱法、质谱法、色谱-质谱联用技术等。

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固然目前还没有益用色谱法和质谱法大批读取粪便医用信息的报导，但国内的很多学者已经开始了利用色谱法和质谱法进行粪便药代动力学研究、粪便毒物代谢研究甚至疾病的诊疗探究。

内蒙古医学院的王美玲等报导了利用色谱法研究迟发性皮肤卟啉病（porphyriacutaneatarda略称PCT）患者卟啉的代谢状况。

他们利用反相高效液相色谱法对PCT患者的尿液和粪便进行测定。

结果发现PCT患者尿中有大批的尿卟啉和七羧基卟啉排出,粪便中粪卟啉显然增加,并有异粪卟啉排出，用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对14例迟发性皮肤卟啉病（PCT）、15例急性间歇性卟啉病

（AIP）、9例杜宾-约翰逊综合症（DJS）和35例正常健康者的尿液和粪便中的粪卟啉异构体Ⅰ和Ⅲ进行定量剖析。

结果发现AIP、DJS和PCT患者的尿液和粪便中粪卟啉异构体Ⅰ和Ⅲ与正常健康者对比均发生不一样程度的变化。

说明能够利用七羧基卟啉和异粪卟啉的检出值,诊疗迟发性皮肤卟啉病。

北京大学的李卫杰等利用同时蒸馏萃取装置（SDE）对羊粪中的挥发性成分进行提取,用气相色谱-质谱联用技术随和相色谱程序升温保存指数进行定性剖析。

质谱法共判定出45种组份,占峰面积的

57.41%。

用标样和双柱保存指数法进一步确证了此中的28种组分,占峰面积

的

27.86%。

比较了鸽子粪和羊粪的相同挥发成分。

华西医科大学的雷蕾等报

道从17只健康大熊猫粪便中分别出47株待检菌,经过对其菌体形态和染色性,菌落形态,生化反响,发酵最后产物的气相色谱测定判