保健食品中植物类功效成分鉴别试验方法.docx
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保健食品中植物类功效成分鉴别试验方法
保健食品中植物类功效成分鉴别试验方法
Distinguishmethodofplantfunctioncomponentinhealthfood
1范围
1本方法适用于保健食品中人参、西洋参、陈皮、甘草、大黄、银杏叶、芦荟、葛根等植物中的功效成分的鉴别。
1本方法规定了保健食品中人参、西洋参、陈皮、甘草、大黄、银杏叶、芦荟、葛根等植物中的功效成分的鉴别方法。
一.陈皮
1.供试液制备
1.1片剂或胶囊称取研细的试样2g，加甲醇20mL，水浴上回流20min或超声处理15min，过滤，取滤液10mL，浓缩至干，加甲醇1mL溶解残渣作为供试品溶液。
1.2糖块：
取本品30g，加30mL水使溶解，用稀盐酸调节PH至5—6，以水饱和的正丁醇提取3次（25、25、20mL）合并正丁醇液，用水洗两次（30mL、30mL）取正丁醇液的1/3量置水浴上蒸干，残留物用甲醇1mL溶解制成供试品溶液。
2.对照液制备称取陈皮对照药材0.3g，同上处理。
另取橙皮甙对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。
3.薄层板硅胶G加5%氢氧化钠溶液的自制板5×20cm，厚300μm。
4.点样供试液点样2—4μL，对照液点样2μL。
5.展开剂S-1乙酸乙酯—甲醇—水（100:
17:
13）
S-2甲苯—乙酸乙酯—甲酸—水（20:
10:
1:
1）上层溶液
6.展开方式上行展开两次展开：
展距：
第一次3cm，第二次8cm。
7.显色喷以3%三氯化铝乙醇溶液后略加热吹干，置紫外光灯365nm下检视。
8.色谱识别供试品色谱除观察到橙皮甙荧光斑点外，供试品与对照药材在相同的位置上显相同颜色的荧光点。
在色谱的中部有明显的3个兰-兰白色荧光主斑点，为主要鉴别特征。
10.艾得康牌立即俏胶囊
11.陈皮对照药材
12.陈皮甙
二.大黄
1.供试液制备取研细的片剂或胶囊粉末0.1g，加甲醇20mL浸渍1h，过滤，取滤液5mL蒸干，加水10mL使溶解，再加盐酸1mL置沸水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷溶解使成1mL作为供试品溶液。
2.对照液制备取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液，另取大黄酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作为对照品溶液。
3.薄层板硅胶H加0.3%羧甲基纤维素钠自制板，5×20cm，厚度300μm。
4.点样分别点样4μL。
5.展开剂正己烷—乙酸乙酯—甲酸（30:
10:
0.5）
6.展开方式上行8cm。
7.显色紫外光灯（365nm）下检视，再置氨蒸气中熏数分钟后，日光下检视。
8.色谱识别紫外光灯（365nm）下，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上显相同的5个橙黄色主斑点，在与大黄酸对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色荧光斑点。
经氨蒸气熏后，置日光下检视斑点变为红色。
1.金多靶减肥降脂素
2.大黄对照药材
三.甘草
1供试液制备
1.1固体试样
1.1.1片剂及不含油的胶囊称取研细的试样2g置于具塞锥瓶中，加乙醚40mL置水浴上加热回流1h，过滤，药渣加甲醇30mL置水浴上加热回流1h，过滤，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL合并正丁醇提取液，用水洗涤3次后置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解作为供试品溶液。
1.1.2含油胶囊称取试样2g置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂，再将滤纸上的试样转入具塞锥瓶中，按1.1.1项下自“加乙醚40mL”起依法操作。
1.2液体试样取样10mL，加水稀释至40mL。
糖块取适量试样加水40mL溶解。
按1.1.1项下自“用水饱和的正丁醇提取3次”起依法操作。
2对照液制备取甘草对照药材同法制成对照药材溶液。
再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。
3薄层板硅胶G加1%氢氧化钠溶液的自制板，5×20cm，厚度300μm。
4点样供试液与对照液分别点样1—2μL。
5展开剂乙酸乙酯—甲酸—冰乙酸—水（30:
2:
2:
4）
6展开方式展开箱用展开剂预平衡15min，上行展开，展距8cm。
7显色喷以硫酸乙醇（1→10）,105℃加热数分钟至斑点显色清晰,置紫外光灯（365nm）下检视。
8色谱识别供试品色谱与对照药材色谱基本相符，甘草酸位于色谱的下部。
1.鹰牌川贝枇把糖
2.甘草对照药材
3.甘草酸
四.人参、西洋参
1供试液制备
1.1固体试样
1.1.1片剂及不含油的胶囊称取研细的试样2g置于具塞锥瓶中，加三氯甲烷40mL，置水浴上加热回流1h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干残留溶剂，加水0.5mL搅匀湿润后，加水饱和的正丁醇10mL，超声处理30min，吸取上清液，加氨试液（400→1000）3倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，加甲醇溶解使成1mL，作为供试品溶液。
1.1.2含油胶囊称取试样2g置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂，再将滤纸上的试样转入具塞锥瓶中，自“加三氯甲烷40mL”起同上操作。
1.2液体试样取样液10mL，加水饱和正丁醇20mL，振摇提取，分取正丁醇层，加氨试液（400→1000）3倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，加甲醇溶解使成1mL，作为供试品溶液。
2对照液制备取人参或西洋参对照药材约1g，依上法同样处理，为药材对照液。
另取人参皂甙Rb1ReRg1F11对照品，加甲醇溶解，使成每1mL各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。
3薄层板硅胶G自制板，5×20cm，厚度300—500μm。
4点样供试液2—10μL，对照液2μL，点样后的薄层板置硅胶干燥器中过夜。
5展开剂三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水（15:
40:
22:
10）置于100mL具塞量筒中混匀，置4℃冰箱中放置，待分层至上层体积为5mL时，将上层液体吸出，弃去，摇匀后使用。
6展开方式展开槽内加入展开剂10mL，槽内用硫酸控制相对湿度为42%（硫酸57mL+水100mL）。
室温25℃，平衡15min后，上行展开12—14cm，取出挥干溶剂。
7显色硫酸乙醇溶液（1→10）105℃加热数分钟至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365nm）下观察
8色谱识别供试品的可见光色谱及荧光色谱与对照药材色谱基本相符，主斑点自下而上为Rb1ReRg1。
西洋参用与人参相同方法制备供试液，在薄层色谱上，西洋参含有的人参皂甙F11，人参不含，而人参含有的人参皂甙Rf，西洋参不含，可作为人参与西洋参鉴别的依据，人参皂甙Rf位于Rg1的上方，F11位于人参皂甙Rf的上方。
1.二参含片（含人参、西洋参）1.虎哥牌生力胶囊（含人参）
2.人参对照药材2.人参对照药材
3.西洋参对照药材3.人参皂甙Rb1、Re、Rg1、F11
五.银杏叶
1供试液制备
1.1.1片剂及不含油的胶囊称取研细成粉末的试样4g置于250mL具塞锥瓶中，加50%的丙酮100mL，加热回流2.5h，放冷。
用滤纸过滤，滤液蒸去丙酮，放冷，残液用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干。
残渣用2mL15%乙醇溶解，加于聚酰胺柱上（30—60目2.5g，柱内径1.5cm，干法装柱），用5%乙醇洗脱，收集洗脱液200mL，浓缩至50mL，放冷。
浓缩液用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干，用丙酮5mL溶解残渣，作为供试品溶液。
1.12含油胶囊称取胶囊内容物4g置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂后，挥干溶剂，将滤纸上的试样转入250mL具塞锥瓶中按1.1.1项下自“加50%的丙酮100mL”起，依法操作。
1.1.3冲剂称取研细成粉末的试样4g，加50%丙酮100mL使溶解，用滤纸过滤，滤液蒸去丙酮，放冷，残渣用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干，用丙酮5mL溶解残渣，作为供试品溶液。
2对照液制备取银杏内酯A﹑B﹑C及白果内酯对照品加丙酮制成每1mL含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。
3薄层板用含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶H板，5×20cm，厚度300μm。
4点样供试品溶液和对照品溶液各点样5μL，可增加供试品溶液的点样量以确定试样中是否含有银杏。
5展开剂甲苯—乙酸乙酯—丙酮—甲醇（10:
5:
5:
0.6）
6展开在15℃以下展开，上行12cm，取出晾干。
7显色在140—160℃加热30min，置紫外灯（365nm）下检视。
8色谱识别供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
1.试样Gincosan4.西洋参银杏叶茶6.日和素未检出银杏叶4μL
2.益智灵5.银杏内酯A、B、C7.日和素8μL
3.GIMKGOPOWER8.日和素12μL
4.银杏内酯A、B、C、白果内酯9.银杏内酯A、B、C、白果内酯
六.葛根
1供试液制备
1.1片剂或胶囊
1.1.1称取研细的试样2g加甲醇30mL，放置2h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解使成1mL，作为供试品溶液。
1.1.2按1.1.1制备的供试品溶液如果含有较多杂质,影响薄层色谱分离,可改用下述方法制备供试品液:
称取研细的试样2g,加乙醇40mL加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%氢氧化钠溶液20mL溶解后移入分液漏斗中，用稀盐酸（234→1000）调节pH5—6后用乙酸乙酯20mL振摇提取，分取乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，过滤，再用乙酸乙酯20mL提取一次，合并滤液，蒸干，残渣加2mL乙酸乙酯溶解，离心后取上清液作为供试品溶液。
1.2液体试样取摇匀的试样20mL置分液漏斗中，加乙酸乙酯20mL振摇提取，分取乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，再用乙酸乙酯20mL提取一次，合并两次滤液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。
2对照液制备取葛根素对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。
3薄层板硅胶G加0.5%羧甲基纤维素钠为粘和剂的自制板，5×20cm，厚度300μm。
4点样供试液5—10μL，对照液5μL，使成条状。
如果试样中葛根素含量较低可增加点样量。
5展开剂三氯甲烷—甲醇—水（28+7+1）
6展开方式上行12cm，取出，晾干。
7显色将展开后的薄层板置氨蒸气中熏15min，置紫外灯（365nm）下检视。
8色谱识别供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光条斑。
1.喜悦血燕美肌较囊
2.葛根素
七.芦荟
1供试液制备
固体试样或胶囊取本品粉末2g,加甲醇30mL至水浴上加热至沸,振摇数分钟,滤过,滤液作为供试品溶液.
2对照液制备
取芦荟甙对照品,加甲醇制成每1mL含5mg的溶液,作为对照品溶液.
3薄层板硅胶G自制板厚度500μm。
4点样供试品溶液与对照品溶液分别点样1—2μL。
5展开剂乙酸乙酯—甲醇—水（100∶17∶13）。
6展开方式上行10cm。
7显色喷10%氢氧化钾甲醇溶液，置紫外灯365nm下检视。
8色谱识别供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
1.金正方芦荟健康1号胶囊1.芦荟甙
2.芦荟甙2.十八宝牌爱索菲胶囊
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