生物制药技术期末复习.docx
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生物制药技术期末复习
生物制药技术期末复习
第一章绪论
1、生物技术的四个方面相互联系:
基因工程是生物技术的核心和关键,是主导技术;细胞工程是生物技术的基础;酶工程是生物技术的条件;发酵工程是生物技术获得最终产品的手段。
2、生物技术药物:
采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物,称为生物技术药物。
3、生物药物的四大类型:
一是应用重组DNA技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂;二是基因药物,如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等;三是来自动物、植物和微生物的天然生物药物;四是合成与部分合成的生物药物。
4、生物药物按其功能用途分为三类:
一是治疗药物,治疗疾病是生物药物的主要功能。
二是预防药物,对于许多传染性疾病来说预防比治疗更重要。
预防是控制传染病传播的有效手段,常见的预防药物有各种疫苗、类毒素等。
三是诊断药物,用于诊断的生物药物具有速度快、灵敏度高、特异性强的特点。
FDA:
食品与药品监督管理局GMP:
药品生产管理规范
基因工程肽类药物
名称
作用
各种干扰素(IFN)
抗病毒、抗肿瘤、免疫调节
各种细胞介素(IL)
免疫调节、促进造血
各种集落刺激因子(CSF)
刺激造血
红细胞生成素(EPO)
促进红细胞生成,治疗贫血
肿瘤坏死因子(TNF)
杀伤肿瘤细胞、免疫调节、参与炎症和全身性反应
表皮生长因子(EGF)
促进细胞分裂、创伤愈合、胃肠道溃疡防治
神经生长因子(NGF)
促进神经纤维再生
骨形态发生蛋白(BMP)
骨缺损修复、促进骨折愈合
组织纤溶酶激活剂(t-PA)
溶解血栓、治疗血栓疾病
血凝因子Ⅷ、Ⅸ
治疗血友病
生长激素(GH)
治疗侏儒症
胰岛素
治疗糖尿病
超氧化物歧化酶(SOD)
清除自由基、抗组织损伤、抗衰老
5、细胞因子:
是一个调节蛋白或糖蛋白构成的多样性群组,这些分子通常是由机体微量产生,它们在不同的细胞间充当化学通信分子,通过与特异性细胞表面受体结合诱导细胞效应,从而激活各种细胞内信号转导事件。
(是指主要由免疫细胞分泌的、能调节细胞功能的小分子多肽。
)
第二章基因工程制药
1、1982年第一个基因重组产品——胰岛素。
2、医用活性蛋白和多肽类,包括:
①免疫性蛋白,eg:
各种抗原和单克隆抗体。
②细胞因子,eg:
各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子。
③激素,eg:
胰岛素、生长激素、心钠素。
④酶类,eg:
尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。
3、问题:
来源于真核细胞的产生基因工程药物的目的基因,为什么不能进行直接分离?
析:
1)真核细胞中单拷贝基因仅是染色体DNA中很小一部分(10-5~10-7),即使多拷贝基因也是极少的,因此从染色体中分离纯化目的基因是极为困难的。
2)原核表达系统是有局限性的,主要是由于真核基因的内含子及基因的后翻译过程。
3)真核基因内一般都有内含子,如果以原核细胞作为表达系统,即便分离出真核基因,由于原核细胞缺乏mRNA的转录后加工过程,真核基因转录的mRNA也不能加工,拼接成成熟的mRNA,因此,不能直接克隆真核基因。
4、制备基因工程药物的基本过程
上游:
主要指的是目的基因分离、工程菌(或细胞)构建。
上游阶段的工作主要在实验室内完成。
下游:
主要指的是从工程菌(或细胞)的大规模培养一直到产品的分离纯化、质量控制等。
5、cDNA克隆的载体有两类:
质粒DNA(eg:
pUC、pBR322等)和噬菌体DNA(eg:
λgt10、λgt11等)。
6、cDNA文库的鉴定:
根据重组体的表型进行筛选,主要有抗性基因失活法和菌落或噬菌斑颜色改变法。
然后采用凝胶电泳、分子杂交、DNA序列分析测定等方法进行进一步筛选和鉴定。
7、化学合成法:
1)方法:
先合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸片度,再退火成为两端形成黏性末端的DNA双链片段,最后把这些DNA片段按正确的次序进行退火连接形成较长的DNA片段,再用连接酶连接成完整的基因。
2)人工化学合成的限制:
一是不能合成太长的基因,50~60bp;二是人工合成时,遗传密码的简并性可导致中性突变;三是费用较高。
8、基因表达:
是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。
基因表达有两类宿主细胞:
一类是原核细胞(胞内表达),目前常用的有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌等;另一类是真核细胞(胞外表达),常用的有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。
9、真核基因在大肠杆菌中的表达形式:
(1)融合蛋白的形式
真核基因在大肠杆菌中表达的一种简便方式便是使其表达为一种融合蛋白的一部分。
融合蛋白:
短的原核多肽与真核蛋白结合;氨基端为原核序列,羧基端为真核系列;融合蛋白在菌体内稳定,不易被细菌酶类降解
只能作抗原用,融合蛋白的原核多肽序列,影响真核蛋白的免疫原性,一般不能作为人体注射用药。
(2)非融合蛋白的形式
指在大肠杆菌中表达的蛋白质以真核蛋白的mRNA的AUG为起始,在其氨基端不含任何细菌多肽序列。
非融合蛋白能较好的保持原来的蛋白活性,但易被蛋白酶破坏,其N端常带有甲硫氨酸,可引起人免疫反应。
(3)分泌型表达蛋白药物基因:
外源蛋白的表达是通过将外源基因融合到编码原核蛋白信号肽序列的下游来实现的。
在细胞内表达时无活性的蛋白质分泌表达时却具有活性。
10、菌体生长所需的能量由呼吸链或TCA循环提供,供能不足时由乙酰COA转换为乙酸供能,代谢副产物为乙酸,乙酸浓度高低为菌体生长的重要标志。
11、含高拷贝数质粒的工程菌中,外源基因的表达引起宿主菌种大量前体被利用,前体供应不足,产生“严紧反应”,菌体的生长速率下降,菌体总体蛋白合成减少。
“严紧反应”是当氨酰tRNA不足时,核糖体在密码子上停留,并合成被称为魔点的ppGpp的结果。
ppGpp是一个重要的调控分子,它通过影响RNA链的延伸过程减少转录;它的浓度增加会导致在合成mRNA和rRNA时RNA聚合酶在模板上的移动产生停顿,RNA链延长速度减慢,使游离的RNA聚合酶浓度降低,严紧控制的启动子如rrnA等的转录减少。
也可能ppGpp是通过干扰RNA聚合酶与PL启动子专一识别反应,而不是通过影响RNA链的延伸过程来减少转录的。
“严紧反应”是一种非常精细的调控,使得细胞内肽链延伸速度变化远远小于比生长速率的变化。
12、提高质粒稳定性的方法:
①选择合适的宿主菌:
宿主菌的遗传特性影响质粒的稳定。
②选择合适的载体:
含低拷贝质粒的工程菌,增加质粒拷贝数提高质粒稳定性;含高拷贝质粒的工程菌,通过控制比生长速率,降低拷贝数,提高稳定性。
③选择压力:
选择压力(抗生素)提高了工程菌的生长优势。
④分阶段控制培养:
外源基因表达水平越高,重组质粒越不稳定。
第一阶段外源基因未表达,菌体生长;第二阶段,外源基因表达。
⑤控制培养条件:
通过间隙供氧和改变稀释速率都可以提高质粒的稳定性。
⑥固定化:
基因重组菌固定化以后,质粒的稳定性和目的基因产物的产率都有了很大的提高。
13、基因工程菌的培养方式:
①分批培养:
培养基的量一次性加入,产品一次性收获。
②补料分批培养:
间歇或者连续地补加新鲜培养基。
③连续培养;④透析培养;⑤固定化培养。
14、高密度发酵:
指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上,理论上最高值可达200gDCW/L。
15、高密度发酵目的:
1)外源基因的表达产量与单位体积产量正相关,单位体积产量与细胞浓度和每个细胞平均表达产量呈正相关性;2)可以提高发酵罐内的菌体密度,提高产物的细胞水平量,相应的减少了生物反应器的体积,提高单位体积设备的生产能力,降低生物量的分离费用,缩短生产周期,从而降低生产成本,提高生产效率的目的。
16、基因工程药物的分离纯化一般包括如下几个方面的过程:
细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品、成品加工。
17、基因工程药物分离纯化的一般流程
18、细胞破碎按所用方法的属性可分为:
1)物理法:
高压匀浆法、超声破碎法、高速珠磨法、高压挤压法
2)化学法:
渗透冲压、增溶法、脂溶法
增溶法:
表面活性剂,增加细胞和膜的通透性,使细胞破碎SDS(十二烷基磺酸钠)
3)生物法:
酶溶法(细菌:
溶菌酶;酵母:
蜗牛酶。
)
19、热原质:
许多革兰氏阴性细菌如伤寒杆菌、绿脓杆菌及某些革兰氏阳性细菌如枯草杆菌能产生一种多糖,注入人体或动物体内,可引起发热反应,故称为热原质。
20、包含体:
重组蛋白在E.coil中的高水平表达经常导致蛋白聚集而形成不溶的、无活性的颗粒,即包含体。
21、基因工程的质量控制主要包括这些:
产品的理化性质的鉴别、纯度、活性、安全性、稳定性和一致性。
22、基因工程产品质量的理化性质测定:
特异性鉴别、非特异性鉴别、相对分子质量测定、等电点测定、肽图分析、氨基酸组成分析、部分氨基酸序列分析、蛋白质二硫键分析。
23、产物的主要特性在分离纯化中的作用
24、分离纯化方法
名称
分离原理
吸附层析法
组份在吸附剂表面吸附,固定相是固体吸附剂,各能力不同
分配层析法
各组份在流动相和静止液相(固相)中的分配系数不同
离子交换层析法
固定相是离子交换剂,各组份与离子交换剂亲和力不同
凝胶层析法
固定相是多孔凝胶,各组份的分子大小不同,因而在凝胶上受阻滞的程度不同
亲和层析法
固定相只能与一种待分离组份专一结合,以此和无亲和力的其它组份分离
25、包含体蛋白复性的方法:
1)稀释、透析复性法:
除去变性剂、还原剂,促进蛋白复性
2)二硫键的复性:
①空气氧化法:
利用空气中的氧气在折叠期间氧化巯基,金属离子的存在具有催化作用;②加入氧化-还原转换试剂;③复性前后,氧化型与还原型试剂的恰当使用。
3)封闭蛋白的疏水簇复性:
疏水簇的存在增加了聚集,用特异性结合疏水簇的单克隆抗体来封闭疏水簇,可减少分子间结合引起的聚集。
4)凝胶过滤层析复性:
①层析介质的隔离作用,降低了蛋白之间相互作用产生的凝集,提高了复性浓度和复性率;②蛋白经过凝胶过滤层析本身可以得到一定的纯化。
5)小分子添加剂复性:
小分子添加剂可以防止蛋白的凝集。
①稳定蛋白的活性状态、降低了非正确折叠分子的稳定性,增加了折叠中间体的稳定性;②添加剂并不加快折叠速率,只抑制凝集的发生。
6)分子伴侣或折叠酶复性:
应用分子伴侣和折叠酶在体外帮助蛋白复性可以提高复性率,但分离较为繁琐,增加成本。
7)人工分子伴侣复性:
可加入去垢剂等,形成蛋白-去垢剂复合体,复合体的形成抑制蛋白的聚集,加入环糊精去除去垢剂,促使蛋白折叠。
26、论述题:
组建干扰素工程菌流程。
第三章动物细胞工程制药
1、离体培养的细胞分为两类:
贴壁依赖型和非贴壁依赖型,前者可简称为贴壁细胞,后者可简称为悬浮细胞。
2、动物细胞的形态:
1)贴壁细胞:
这类细胞的生长必须有给以贴附的支持物表面,细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖。
2)悬浮细胞:
这类细胞的生长不依赖支持物表面,可在培养液中呈悬浮状态生长,如血液的淋巴细胞和用以生产干扰素的Namalwa细胞等,细胞呈圆形。
3)兼性贴壁细胞:
兼具有贴壁细胞和悬浮细胞生长方式的细胞,称为兼性贴壁细胞。
贴壁细胞的传代通常是采用胰蛋白酶消化,把细胞分散成单细胞再传代。
悬浮细胞则用直接传代法或离心法传代。
3、生产用的动物细胞三种类型:
①原代细胞;②已建立的二倍体细胞系;③可无限期传代的转化细胞系,以及用这些细胞进行融合和重组的工程细胞系。
原代细胞:
是直接取自动物组织、器官,经过粉碎、消化而获得的细胞悬液。
二倍体细胞系:
原代细胞经过传代、筛选、克隆,从而从多种细胞成分的组织中挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。
转化细胞系:
失去了正常细胞的特点,可以无限增殖。
融合细胞系:
两个或两个以上的细胞合成一个细胞的过程。
4、真核细胞基因表达使用的载体一般有两类:
一是病毒载体,如牛痘病毒、腺病毒和逆转录病毒和杆状病毒等;另一类是质粒载体。
5、用于生产的工程细胞必须建立两个细胞库:
原始细胞库(MCB)和生产用细胞库(MWCB)或称工作细胞库(WCB)。
6、细胞种系不同对培养基的要求亦有差异,主要有三类:
天然培养基、合成培养基和无血清培养基。
1)天然培养基:
在细胞培养的早期阶段使用的培养基,主要为来自天然的材料如血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。
(成分复杂、组分不稳定,来源有限,因此不适于大量培养和生产的需要。
)
2)合成培养基:
成分明确,组分稳定,可大量生产供应。
3)无血清培养基:
是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。
7、动物细胞培养中常用的培养基有BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640以及ISOCOV、199和McCoy等。
BME培养基:
适用于二倍体或原代哺乳动物细胞培养。
MEM培养基(低限量基础培养基):
适于支持各种哺乳动物细胞的生长。
DMEM培养基:
是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。
8、细胞分离:
为了进行细胞培养,首先要从生物体取得细胞,目前获取细胞的方法有两种,离心分离法和消化分离法。
①离心分离法:
主要用于从含有细胞体液如血液、羊水、胸腹水中分离细胞,一般用800-1000r/min离心5~10min。
离心速度过高或时间过程,易挤压细胞使之受损伤或死亡。
②消化分离:
用消化液消化取自生物体的组织块,使组织松散成细胞悬液,再经洗涤、分离得到所需细胞。
(常用的消化液:
胰蛋白酶、EDTA、或胰酶-EDTA联用;其他的消化液:
胶原酶、链霉蛋白酶、木瓜蛋白酶)
9、问题:
在动物细胞培养过程中,为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理?
析:
胰蛋白酶处理动物组织,可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,获得单个细胞。
10、细胞计数方法:
①自动细胞计数器计数:
无法分辨死、活细胞,还会误将细胞结团当做单个细胞记录下来,使计算结果偏低;②血球计数板计数:
计数时细胞染色,可分辨死、活细胞(台盼蓝染色:
一种死细胞染色用色素;苯胺黑染色:
俗称阿尼林黑或精元);③结晶紫染色细胞核计数:
结晶紫具有低渗,并有鳌合钙离子的作用,因此可以使细胞分散解离和破碎,细胞核染成蓝色;④四氮唑盐(MTT)染色计数法:
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将MTT黄色溶液还原成不溶性的蓝紫色结晶物,并沉积于细胞中,而死细胞无此功能。
11、细胞冷冻过程中需要加入一种或几种保护剂,如甘油或二甲基亚砜,它们相对分子质量低,溶解性好,容易渗入细胞,保护细胞免受损伤。
12、细胞冻存和复苏的原则:
“慢冻快融”;(冷冻时,冷冻速度不能太快,也不能太慢。
太慢了会产生冰晶,损伤细胞,太快不足以使水分排出。
)
13、动物细胞大量培养的方法和操作方式。
析:
1)从生产实际来看,动物细胞的大规模培养主要可分为悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。
2)动物细胞培养的操作方式一般可分为分批式操作(一次性加入,一次性收获)、补料-分批(或流加式)操作、半连续式操作、连续式操作和灌流式操作。
14、动物细胞生物反应器的类型:
1)搅拌罐式生物反应器;2)气升式生物反应器;3)中空纤维管生物反应器;4)透析袋或膜式生物反应器;5)流化床生物反应器。
15、葡聚糖凝胶SephadexG-50:
Sephadex是商品名,各种型号用G和阿拉伯数字表示,阿拉伯数字乘以10表示该胶的得水率。
第四章抗体制药
1、1937年Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、甲种(α)球蛋白、乙种(β)球蛋白和丙种(γ)球蛋白,并证明了抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
2、抗原:
是一类能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞,并能与这些产物在体内或体外发生特异性反应的物质。
3、抗体:
是指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
4、免疫球蛋白:
将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig)。
5、所有的抗体均是Ig,但并非所有的Ig分子都具有抗体活性。
6、单倍体克隆抗体的一般流程:
HAT培养基选择杂交瘤细胞——饲养细胞;再次克隆——有限稀法、软琼脂法;
克隆扩大培养——体内:
收集腹水;体外收集上清液。
7、小分子抗体:
仅表达鼠源性单克隆抗体的V区片段,其相对分子量仅为原抗体的1/80~1/3。
即保留了CDR区,而Ig分子的C区不表达。
8、基因工程抗体:
将抗体的基因按不同需要进行加工、改造和重新装配,然后导入适当的受体细胞中进行表达的抗体分子。
9、单链抗体:
在VH与VL之间加上一段连接肽,把VH与VL连成一条单链,得到ScFv,即单链抗体。
10、双功能抗体就是双特异性单链抗体是一种非天然性的抗体,其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。
11、常用的选择培养基为HAT培养基,它是次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶(T)配制的。
其中氨基喋呤(A)能阻断DNA合成的主要途径,瘤-瘤融合细胞和瘤细胞因不能合成DNA而死亡。
杂交瘤细胞可利用HGPRT酶,用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)合成DNA,使杂交瘤细胞得以生长。
12、抗体融合蛋白的类型(5种类型):
(1)配基-配基型融合蛋白,如CD4-Fc。
g
(2)配基-Ig嵌合型蛋白,如IL-2-Ig。
(3)配基-FV型嵌合蛋白,如CD4-FVCD3。
(4)受体-FV型融合蛋白
(5)酶-抗体型融合蛋白
13、三大类抗体诊断药物:
体外试验用的习惯称为试剂,体内导向诊断用的则称为药物。
14诊断方法:
常用直接凝集反应。
在细菌、红细胞等颗粒性抗原中加入相应抗体,在有适量的电解质存在下,能形成肉眼可见的凝集块,故成为凝集反应。
常用波片法作定性试验,简便快捷,上述的病原菌的血清学鉴定和血型的鉴定均用此方法。
15、CD抗原:
分化群单克隆抗体所鉴定的细胞表面抗原,成为分化群抗原,即CD抗原。
第五章植物细胞工程制药
1、植物生长调节剂:
1)植物激素是指植物代谢过程中形成的生长调节物质,在极低浓度(<1mol/L)时即能调节植物的生育过程,并能从合成部位转运到作用部位而发挥作用。
植物激素只限于天然产生的调节物质。
2)植物组织中可以形成5种植物激素,即生长素、分裂素、赤霉素、脱落酸和乙烯。
植物生长调节剂既包括人工合成的具有生理活性的化合物,也包括一些天然的化合物以及植物激素。
2、生长素是最早被发现的植物激素。
3、激动素(KT):
是一种非天然的细胞分裂素。
是首次发现的细胞分裂素。
4、在植物组织和细胞培养过程中,影响植物次级代谢产物产生和累积的因素主要有:
①生物条件:
外植体、季节、休眠、分化等;
②物理条件:
温度、光(光照时间、光强、光质)、通气(O2)、pH和渗透压等;
③化学条件:
无机盐(N、P、K等)、碳源、植物生长调节剂、维生素、氨基酸、核酸、抗生素、天然物质、前体等;
④工业培养条件:
培养罐类型、通气、搅拌和培养方法等。
5、细胞中除含有生命的原生质体外,还有许多非生命的物质,它们均为细胞代谢过程中的产物。
一类是后含物,系储藏物质或废弃物质,分布于液泡内,如糖类、盐类、生物碱、苷、有机酸、挥发油等;另一类为生理活性物质,对细胞内生化代谢和生理活动起着调节作用的物质的总称,含量虽少,但其生理作用却非常重要,如酶、维生素、植物激素和抗生素等。
6、外植体选择:
7、植物细胞培养的生物反映器
1)摇瓶2)搅拌型生物反应器3)环流生物反应器和鼓泡塔生物反应器
8、植物细胞大规模培养的生物反应器有5类:
1)机械搅拌式生物反应器:
优点是反应器内的温度、PH、溶氧量、及营养物浓度较其他反应器更容易控制。
就剪切力对细胞造成的伤害、抑制植物细胞生长和次级代谢物产生而言,对搅拌器加以改进后,搅拌式生物反应器就可以用于植物细胞培养。
2)鼓泡塔生物反应器:
主要优点是没有运动部件,操作不易染菌。
在无机械能的情况下,提供了较高的热能和质量传递,适于对剪切敏感的细胞培养,放大相对容易。
缺点:
流体流动形式难以确定,混合不匀,缺乏有关反应器内的非牛顿流体的流动与传递特性的数据等。
3)气升式生物反应器:
分为内循环式和外循环式两类,其流动性比鼓泡塔更为均匀,是培养植物细胞最适合的反应器之一,可以在低剪切力下达到较好的混合和较高的氧传递效果,运动部件不易污染,操作费用也很低。
缺点:
高密度培养时,混合不够均匀。
4)转鼓式生物反应器:
(动物细胞没有)
通过转动促进反应器内的氧及营养物质的混合。
设置挡板有助于提高氧传递。
在高密度培养时有较高的传氧能力。
高密度培养时,转鼓式优于搅拌式。
缺点:
难于大规模操作,放大困难。
5)固定化细胞生物反应器:
优点:
①可保护细胞免受剪切;②细胞可长时间重复使用;③易于实现细胞高密度培养;④细胞间的接触良好,易于分化,有利于次级代谢产物的合成;⑤减少细胞的遗传不稳定性;⑥易于实现连续性操作。
不同类型的生物反应器各有其优缺点,而改进的搅拌式生物反应器和气升式生物反应器可能更适合植物细胞的培养。
9、植物细胞大规模培养要综合考察以下因素:
①供氧能力及气泡分散程度。
②剪切力大小及对细胞的影响。
③高密度培养时培养液的混合程度。
④温度、及营养物浓度的控制能力。
⑤细胞团大小的控制能力。
⑥易于放大
10、酶在医药领域的应用:
谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)是酶学检测中最为重要的两项检测。
谷草转氨酶(AST)在心肌细胞中含量最高,但肝脏损害时其血清浓度也可升高,临床一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。
已知肝脏只要有1%的细胞坏死,便可使血清内酶活性增高1倍,因此丙氨酸转氨酶活性是肝细胞损害的敏感指标。
丙氨酸转氨酶在肝内的分布于活性超过其他任何脏器,所以丙氨酸转氨酶偏高具有特异性。
11、偶联率=1时,表示反应控制好,固定化或扩散限制引起的酶失活不明显;偶联率<1时,扩散限制对酶活力有影响;偶联率>1时,有细胞分裂或从载体排除抑制剂等原因。
12、培养基及其组成:
应用最广泛的是MS培养基和LS培养基。
13、固定化细胞法生产6-氨基青霉烷酸:
1)技术路线
2)工艺过程
①E.coli培养:
斜面培养基、发酵培养基
②E.coli固定化:
明胶、戊二醛(交联法)
③固定化E.coli反应堆制备:
填充床式的反应器
④转化反应:
加入一定量的青霉素G(或V)
⑤6-APA的提取:
有机溶剂提取、加活性炭脱色、结晶、抽干得成品