流式细胞仪结构及工作原理.docx

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流式细胞仪结构及工作原理

流式细胞仪结构及工作原理

三个子系统

一个流式细胞仪山三个主要系统组成：

射流系统、光学系统、电子系统

电子系统

射流系统

:

I

■:

I样胡

Ifl

greeni——滤镜

LJbqflU

样品液的压力与鞘液的不同，样品液压力更岛。

样品液压力能调2以增人或减小抽样核心的宽度，从而提高或降低采样率。

抽样核心越宽，接受激光越少，检测灵皺度也降低。

因此对于需要高灵嫩度的实验操作•例如DNA分析，需要用较窄的抽样核心（低采样率）。

光学系统

光学系统功能包括：

提供激发光源（激光发射器）

收集散光（透镜）

将特足波长的光传到相应探测器（滤镜）

光学系统乂由两部分组成：

激发系统与收集系统

激发系统山蓝、红激光发射器，光束形成棱镜，方向盘•聚焦激光束并将其指向射流液的透镜组成

收集系统用丁•收集样品经过激光束时产生的光。

具休來说，透镜收集粒子与激光碰掠后相互作用形成的光,矛个光镜系统和滤镜将收集到的光按波长传至相应光探测器。

滤镜仃如卜三种:

Shortpass

460500540

Bandpass

460500540

通过率

aoueu一wsuon举

wavelength（nm）

t

滤镜使波K>475nm

XL<520nm的光通过

滤镜使波长2500nm的光通过

滤镜使波B<<500nm的光通过

电子系统

电了系统的主要功能包括:

蚩:

化电压脉冲

将模拟信号转化为数字信号

将数据传至计算机用J・・分析

AmplifierSignalProcessor

Photodetectors

ComputerWorkstation

电子系统由光电探测器（Photodetectors）＞放大器（Amplifier）、信号处理器（SignalProcessor）以及计算机工作站（ComputerWorkstation）组成

光电控测器又由光电倍增管和光电••极管组成

光电倍增管比光电:

极管敏感,用

J・・探测非正向散射及荧光产牛的较弱信号

光电:

极管不如光电倍增管敏感,用于探测正向散射产生的较强的信号

光信号到达光电探测器后即被转化为电信号

电脉活因此产生并由电子系统处理

waste

•—光电二极管

正向散射

levels150-999volts

探测器放大器

放大器对传入信号进行修饰，转为电压信号输出

laser

laser

7

1

laser

7

■

time

time

颗粒经过激光束时产个电斥脉冲，半颗粒到达激光束中央时电压值达到最大。

信号处理器从电斥脉冲产工时开始工作,经处理的信号包括脉冲峰值.脉冲区域及脉冲宽度。

只有同于规左阈值的电压才能被处理。

voltage

0volt

p

光信号被转换为相应同等人小的电斥信号后被进一步处理成为相应数值。

这些数据瑕后被计算机以流式细胞仪标准版式存储卜•來。

根据记录数据在坐标上做图，每个数据对应个点。

众多点构成儿个密集区域，即区分出记录颗粒的不同类型。

这样得到的图即为流式细胞仪标准版式。

FSCSSCFITC

各种不同的标准版式

histogramplot

contourplot

o

•riririr

FTC-A

3-Dplot

biexponentialscaling

流式细胞仪的分选功能

如图所示，绿色的细胞被充以圧电，红色细胞被充以负电。

因此当二者混金物通过止负电极板时，绿色的细胞偏向负极板，红色的细胞偏向正极板。

二者分开并分别注入下方收集管。