培养基的质量控制.docx

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培养基的质量控制

惠山疾控

作业指导书

编号：

HSCDC/GC-76-2009

培养基质量控制规程

版本/修改次：

1/0

第1页共6页

1.目的

规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。

2．适用范围

适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。

3.职责

3.1检验人员：

按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。

3.2科室负责人：

负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。

4．使用前的质量控制

4.1生产企业提供的材料

培养基生产厂家随产品应提供下列文件：

培养基、独立成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株；技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。

4.2验收

实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。

4.3贮存及使用前质量确认

4.3.1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。

4.3.2验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单”，使用前对容器密闭性进行复查。

4.3.3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。

若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。

4.3.4制备好的成品培养基应建立“成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：

颜色是否发生变化?

/是否蒸发/脱水?

/是否有微生物生长?

等。

如果发生上述异常情况，则不应再使用。

5．制备好的成品培养基的质量控制

新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。

成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。

5.1物理指标控制

5.1.1测试20℃～25℃的pH值

5.1.2琼脂层厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质；凝胶稳定性、粘稠度和湿度。

5.2微生物学指标控制

可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”。

5.2.1微生物污染的控制

从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1%）平板或试管，置于37℃或按特定标准中规定的温度培养18h。

5.2.2生长特性

5.2.2.1生长率

惠山疾控

作业指导书

编号：

HSCDC/GC-76-2009

培养基质量控制规程

版本/修改次：

1/0

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将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。

5.2.2.1.1定量方法

生长率PR的计算：

PR=NS/NO

NS：

从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。

N0：

从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu）。

要求：

非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。

5.2.2.1.2半定量方法

半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G，G值不应超过标准规定的允许范围。

5.2.2.1.3定性方法

定性方法采用划线法观察。

5.2.2.2选择性

将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。

5.2.2.2.1定量方法

选择因子SF：

SF=DO-DS

DO：

能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度

DS：

能在测试培养基上显示生长的最高稀释度

要求：

非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。

5.2.3生理生化特性（选择性和特异性）

规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。

5.3性能评价和结果解释

按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。

表1计数用选择性培养基

培养基

用途

培养条件

测试菌株

参考培

养基

控制方法

判定标准

特征反应

Baird-

Parker

[S]

生长率

37℃24-48h

金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923

TSA

定量

PR≥0.5

黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外有透明带

选择性

37℃48h

大肠杆菌ATCC25922/8739

——

定性

全部抑制

——

特异性

37℃24-48h

表皮葡萄球菌ATCC12228

——

定性

——

黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外无透明带

MYP

[S]

生长率

30℃24-48h

腊样芽胞杆菌ATCC11778

TSA

定量

PR≥0.7

具沉淀带的粉色菌落

选择性

37℃48h

大肠杆菌ATCC25922

——

定性

全部抑制

——

特异性

37℃48h

枯草芽胞杆菌ATCC6633

——

定性

——

不具沉淀带的粉色菌落

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作业指导书

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培养基质量控制规程

版本/修改次：

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表1计数用选择性培养基（续）

培养基

用途

培养条件

测试菌株

参考培

养基

控制方法

判定标准

特征反应

VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂）

[S]

生长率

37℃24h

大肠杆菌ATCC25922/8739

TSA

定量

PR≥0.5

带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落

鼠伤寒沙门菌ATCC14028

选择性

37℃20h

粪链球菌ATCC29212/19433

——

定性

全部抑制

——

VRBL（紫红胆汁乳糖）

[S]

生长率

30℃20h

大肠杆菌ATCC25922/8739

TSA

定量

PR≥0.5

带有或不带沉淀带的淡紫色菌落

选择性

30℃20h

粪链球菌ATCC29212/19433

——

定性

全部抑制

——

特异性

30℃20h

铜绿假单胞菌ATCC27853

——

定性

--

无色至浅棕色菌落

CT-SMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂）

[S]

生长率

37℃24h

大肠杆菌O157：

H7

ATCC43894/43895

TSA

定量

PR≥0.5

透明菌落，表面淡黄棕色，菌落直径约1mm

选择性

37℃24h

金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923

定性

全部抑制

——

特异性

37℃24h

大肠杆菌ATCC11775/25922

——

定性

——

粉色菌落

BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤）

[L]

生长率

30℃24-48h

大肠杆菌ATCC25922/8739

TSA

半定量

浊度2+，导管1/3产气

产气并浑浊

弗氏柠檬酸杆菌

ATCC25922/8739

选择性

粪链球菌ATCC29212/19433

定性

不生长

——

EC

[L]

生长率

44℃24～48h

大肠杆菌ATCC25922

——

半定量

浊度2+，导气管1/3产气

产气并浑浊

选择性

44℃24～48h

铜绿假单胞菌ATCC27853b

——

定性

不生长

——

EC-MUG/

LS-MUG

[L]

生长率

44℃24～48h

大肠杆菌ATCC25922

——

半定量

浊度2+，导气管1/3产气

产气并浑浊，产生荧光

选择性

44℃24～48h

铜绿假单胞菌ATCC27853b

——

定性

不生长

——

乳糖胆盐发酵培养

[L]

生长率

37℃24h

大肠杆菌ATCC25922

——

半定量

导气管1/3产气

产气并变黄色

选择性

37℃24h

鼠伤寒沙门菌ATCC14028

——

定性

——

不产气、仍为紫色

LST（月桂酸肉汤）

[L]

生长率

37℃24h

大肠杆菌ATCC25922

——

半定量

导气管1/3产气

——

选择性

37℃24h

福氏志贺氏菌CMCC51572

——

定性

——

——

表2计数用非选择性培养基

培养基

用途

培养条件

测试菌株

参考培

养基

控制方法

判定标准

特征反应

PCA（平板计数琼脂）

[S]

生长率

30℃72h

大肠杆菌ATCC25922/8739

TSA

定量

PR≥0.7

——

金黄色葡萄球菌ATCC6538

枯草芽孢杆菌ATCC6633

惠山疾控

作业指导书

编号：

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培养基质量控制规程

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表3选择性增菌培养基

培养基

用途

培养条件

测试菌株

控制方法

判定标准

特征反应

EE

[L]

生长率

37℃24h

大肠杆菌ATCC25922/8739

半定量

VRBG上＞10CFU

粉红至红色菌落，有或没有沉淀带

鼠伤寒沙门菌ATCC14028

选择性

粪肠球菌ATCC29212

全部抑制

RVS

[L]

生长率

41.5℃24h

鼠伤寒沙门菌ATCC14028

半定量

XLD或其他选择性培养基上＞10CFU

——

肠炎沙门氏菌ATCC13076

铜绿假单胞菌ATCC27853

选择性

41.5℃24h

大肠杆菌ATCC25922

半定量

TSA上全抑制

——

粪链球菌

ATCC29212

TSA上＜10CFU

SC（亚硒酸盐胱氨酸）

[L]

生长率

37℃24h

鼠伤寒沙门菌ATCC14028

半定量

XLD或其他选择性培养基上＞10CFU

不同培养基上菌落特征不同（见标准）

+大肠杆菌ATCC25922

+铜绿假单胞菌ATCC27853b

选择性

37℃24h

大肠杆菌ATCC25922

半定量

TSA上＜10CFU

——

粪链球菌

ATCC29212

TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）

[L]

生长率

37℃24h

鼠伤寒沙门菌ATCC14028

半定量

XLD或其他选择性培养基上＞10CFU

不同培养基上菌落特征不同（见标准）

伤寒沙门菌CMCC50071

选择性

37℃24h

大肠杆菌ATCC25922

TSA上＜10CFU

——

碱性蛋白胨水

[L]

生长率

37℃24h

霍乱弧菌CMCC16109

半定量

TCBS或其他选择性培养基上＞10CFU

不同培养基上菌落特征不同（见标准）

副溶血性弧菌CMCC20001

选择性

37℃24h

大肠杆菌ATCC25922/8739

TSA上＜10CFU

——

福氏志贺氏菌CMCC51572

7.5%氯化钠肉汤[L]

生长率

37℃24h

金黄色葡萄球菌ATCC6538

半定量

B-P平板或其他培养基上＞10CFU