培养基的质量控制.docx

1、培养基的质量控制惠山疾控作 业 指 导 书编号：HSCDC/GC-76-2009 培养基质量控制规程版本 / 修改次：1/0第 1 页 共 6 页 1.目的规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。2适用范围适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。3. 职责3.1 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。3.2 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。4使用前的质量控制4.1生产企业提供的材料培养基生产厂家随产品应提供下列文件：培养基、独立成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；

2、性能评价和所用测试菌株；技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。4.2验收实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。4.3 贮存及使用前质量确认4.3.1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。4.3.2 验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单”，使用前对容器密闭性进行复查。4.3.3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。4.3.4

3、制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化?/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长 ?等。如果发生上述异常情况，则不应再使用。5制备好的成品培养基的质量控制新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。5.1物理指标控制5.1.1 测试2025的pH值5.1.2琼脂层厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质；凝胶稳定性、粘稠度和湿度。5.2微生物学指标控制可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1

4、-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”。5.2.1微生物污染的控制从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1%）平板或试管，置于37或按特定标准中规定的温度培养18h。5.2.2生长特性5.2.2.1生长率惠山疾控作 业 指 导 书编号：HSCDC/GC-76-2009 培养基质量控制规程版本 / 修改次：1/0第 2 页 共 6 页 将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。5.2.2.1.1定量方法生长率PR的计算： PR = NS/NONS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。N0：

5、从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应100cfu ）。要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；每平板（或每试管）的接种水平为10CFU100CFU。5.2.2.1.2 半定量方法半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G，G值不应超过标准规定的允许范围。5.2.2.1.3 定性方法定性方法采用划线法观察。5.2.2.2选择性将浓度为104CFU/mL106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定

6、值。5.2.2.2.1定量方法选择因子SF： SF = DO - DSDO：能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度 要求：非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。5.2.3生理生化特性（选择性和特异性）规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。5.3性能评价和结果解释按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。表1 计数用选择性培养基

7、培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应Baird-ParkerS生长率3724-48h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923TSA定量PR0.5黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外有透明带选择性3748h大肠杆菌ATCC25922/8739定性全部抑制特异性3724-48h表皮葡萄球菌ATCC12228定性黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外无透明带MYPS生长率3024-48h腊样芽胞杆菌ATCC11778TSA定量PR0.7具沉淀带的粉色菌落选择性3748h大肠杆菌ATCC25922定性全部抑制特异性3748h 枯草芽胞杆菌ATCC6633定性不具沉淀带的粉色菌落

8、惠山疾控作 业 指 导 书编号：HSCDC/GC-76-2009 培养基质量控制规程版本 / 修改次：1/0第 3 页 共 6 页 表1计数用选择性培养基(续)培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂）S生长率3724h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.5带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落鼠伤寒沙门菌ATCC14028选择性3720h粪链球菌ATCC29212/19433定性全部抑制VRBL（紫红胆汁乳糖）S生长率3020h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.5带有或不带沉淀带的淡紫色菌落选择性302

9、0h粪链球菌ATCC29212/19433定性全部抑制特异性3020h铜绿假单胞菌ATCC27853定性-无色至浅棕色菌落CT-SMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂）S生长率3724h大肠杆菌O157：H7ATCC43894/43895TSA定量PR0.5透明菌落，表面淡黄棕色，菌落直径约1mm选择性3724h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特异性3724h大肠杆菌ATCC11775/25922定性粉色菌落BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤）L生长率3024-48h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA半定量浊度2+，导管1/3产气产气并浑浊弗氏柠檬酸杆菌ATCC25922/87

10、39选择性粪链球菌ATCC29212/19433定性不生长ECL生长率442448h大肠杆菌ATCC25922半定量浊度2+，导气管1/3产气产气并浑浊选择性442448h铜绿假单胞菌ATCC27853b定性不生长EC-MUG/LS-MUGL生长率442448h大肠杆菌ATCC25922半定量浊度2+，导气管1/3产气产气并浑浊，产生荧光选择性442448h铜绿假单胞菌ATCC27853b定性不生长乳糖胆盐发酵培养L生长率3724h大肠杆菌ATCC25922半定量导气管1/3产气产气并变黄色选择性3724h鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性不产气、仍为紫色LST（月桂酸肉汤）L生长率3724h

11、大肠杆菌ATCC25922半定量导气管1/3产气选择性3724h福氏志贺氏菌CMCC51572定性表2 计数用非选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应PCA（平板计数琼脂）S生长率3072h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.7金黄色葡萄球菌ATCC6538枯草芽孢杆菌ATCC6633惠山疾控作 业 指 导 书编号：HSCDC/GC-76-2009 培养基质量控制规程版本 / 修改次：1/0第 4 页 共 6 页 表3 选择性增菌培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应EEL生长率3724h大肠杆菌ATCC25922/8739

12、半定量VRBG上10CFU粉红至红色菌落，有或没有沉淀带鼠伤寒沙门菌ATCC14028选择性粪肠球菌ATCC29212全部抑制RVSL生长率41.524h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量XLD或其他选择性培养基上10CFU肠炎沙门氏菌ATCC13076铜绿假单胞菌ATCC27853选择性41.524h大肠杆菌ATCC25922半定量TSA上全抑制粪链球菌ATCC29212TSA上10CFUSC(亚硒酸盐胱氨酸)L生长率3724h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量XLD或其他选择性培养基上10CFU不同培养基上菌落特征不同（见标准）+大肠杆菌ATCC25922+铜绿假单胞菌ATCC2785

13、3b选择性3724h大肠杆菌ATCC25922半定量TSA上10CFU粪链球菌ATCC29212TTB(四硫磺酸钠煌绿增菌液)L生长率3724h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量XLD或其他选择性培养基上10CFU不同培养基上菌落特征不同（见标准）伤寒沙门菌CMCC50071选择性3724h大肠杆菌ATCC25922TSA上10CFU碱性蛋白胨水L生长率3724h霍乱弧菌CMCC16109半定量TCBS或其他选择性培养基上10CFU不同培养基上菌落特征不同（见标准）副溶血性弧菌CMCC20001选择性3724h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA上10CFU福氏志贺氏菌CMCC515727.5%氯化钠肉汤L生长率3724h金黄色葡萄球菌ATCC6538半定量B-P平板或其他培养基上10CFU