R2A琼脂培养基适用性检查方案.docx
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R2A琼脂培养基适用性检查方案
R2A琼脂培养基适用性检查方案
文件编号：
VP-QC-2015-05
起草人：
审核人：
批准人：
批准日期：
年月日
目录
1概述1
2验证目的及范围1
3验证小组人员组成及职责1
4验证依据2
5验证前准备2
6验证的实施2
7偏差处理5
8验证数据及评估5
9验证报告及评审5
10再验证及周期5
11验证文件及归档5
12附件5
1验证目的及范围
2015版《中华人民共和国药典》中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为R2A琼脂培养基。
为了保证纯化水微生物限度检查的准确性和可靠性，需对该R2A琼脂培养基进行适用性检查实验。
2验证方法
照2015版药典非无菌产品产品微生物限度检查：
微生物计数法（通则1105）中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。
3.验证小组人员组成及职责：
3.1验证小组由以下部门人员组成：
质量部、QC、生产部。
3.2验证小组组成及职责列表
组成
职责
QC
1.负责起草验证方案的起草
2.负责本方案的培训
3.仪器仪表校验确认
4.负责验证的实施
5.负责数据的收集和整理
6.负责数据分析
7.负责完成验证报告
质量部
1.负责验证方案、验证报告的审核与批准
2.负责验证现场的监督审查
生产部
1.负责保障设备、器具的完好
2.负责动力系统的保障
4验证接受标准
4.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；
4.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
5.验证前准备
5.1验证人员培训：
验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
5.3确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
5.4相关文件
序号
相关文件
文件编号
1
DHG型电热恒温鼓风干燥箱操作规程
WI-100
2
BSC-100-II-B2生物安全柜操作和维护保养规程
WI-101
3
WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器使用和维护保养规程
WI-103
4
DK型电热恒温水浴锅操作规程
WI-104
5
HWS型恒温恒湿箱操作规程
WI-105
6
JA2003N电子天平操作及维护保养规程
WI-106
7
PHS-3C型PH计操作及维护保养规程
WI-108
8
SHP-3C型低温生化培养箱操作及维护保养规程
WI-109
9
YJ-875SDB型净化操作台的操作及维护保养规程
WI-113
10
《培养基管理规程》
WI-76
6.验证的实施
6.1实验材料
6.1.1培养基
类别
培养基名称
厂家
批号
验证培养基
R2A琼脂培养基
对照培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基
6.1.2仪器设备
DHG型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器、DK型电热恒温水浴锅、HWS型恒温恒湿箱（30～35℃）、JA2003N电子天平、PHS-3C型PH计、SHP-3C型低温生化培养箱（20～25℃）、YJ-875SDB型净化操作台。
6.1.3稀释剂：
PH无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
6.1.4计数用培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基
6.1.5验证用菌株
铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]
枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]
6.1.6灭菌前调节PH溶液：
10%碳酸钠溶液或1mol/L氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L盐酸溶液。
6.2验证内容
6.2.1培养基的配制灭菌过程
将分装包装好的培养基分别放入灭菌器中121℃灭菌15分钟后取出。
取1管已灭菌的培养基，放冷至25℃测定pH值，应在7.20.2范围内。
6.2.1.4外观性状
灭菌后的培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培养基沾染等，均应挑出弃去。
将制备好的培养基保存在2～25℃、避光的环境中，在存放2周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明。
6.2.2菌液制备
接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时。
6.2.3菌液计数（每种菌液接种2个）
6.2.3.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌（50～100cfu/ml）各1ml加入无菌培养皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时，计数每株试验菌平行制备2个平皿。
6.2.4培养基适用性检查
6.2.4.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时；分别计数。
同时取相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
6.2.4.2取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于（50～100cfu/ml）的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌1ml各2支，另1支不接种作为空白对照，置30~35℃培养箱培养48小时，逐日观察结。
同时取相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
6.2.5结果判定：
6.2.5.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；
6.2.5.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
7.偏差处理
验证的数据产生的任何偏差，应及时进行偏差调查，按照《化验室偏差管理规程》进行处理并如实记录，给出合理的偏差处理措施，并上报验证领导小组，记录备案，并且根据处理措施进行相应的处理，并对处理的过程、结果进行记录与跟踪。
验证小组根据数据分析，做出相应的评定与结论，报请验证委员会批准。
8验证数据及评估
验证小组对验证检测数据进行评估，并对结果进行评价
结果评价：
评价人：
日期：
9.验证报告及评审
9.1验证小组依据本方案实施验证，编写验证报告。
9.2验证小组组织专业人员对验证报告进行评审。
9.3QA对验证报告给出结论，验证合格发放验证合格证。
10.再验证及周期
10.1纯化水微生物限度检查用的A2R琼脂培养基的适用性检查验证，其再验证周期一般为三年，以证实确认培养基的可靠性。
10.2当药典中纯化水微生物限度检查法发生变更时，需进行再验证；
10.2当所用到的检验设备出现故障进行重大维修，尤其是关键部件的维修；仪器的性能发生了明显的偏移，已不能再满足检验产品质量的要求时，均需要对该检验方法进行重新确认，以证明变更对已经确认的效果无影响。
11.验证文件归档
验证结束，全部验证文件（验证方案、验证报告、验证记录、验证合格证等）归档质量部。
12.附件
12.1验证小组组成及职责
12.2验证前确认记录
13.5验证结果评估记录
13.6验证合格证
验证前确认记录
一、验证前仪器仪表确认
序号
名称
编号
上次校验时间
是否在有效期内
1
2
3
4
5
确认人：
日期：
试验材料表
一、计数用培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基：
批号：
来源：
三、验证用菌种
菌种类型
菌种代数
批号
来源
铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]
枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]
四、灭菌前调节pH溶液
溶液名称
配制批号
配制日期
有效期至
配制人
10%碳酸钠溶液
1mol/l氢氧化钠溶液
15%冰醋酸溶液
1mol/l盐酸溶液
检查人：
日期:
复核人：
日期：
附表2
培养基的pH值
培养基名称
配制批号
灭菌前pH值
灭菌后pH值
判定结果
检查人：
日期:
复核人：
日期：
附表3
外观性状
培养基名称
批号
灭菌后外观检查
保存2周后外观检查
结果判定
日期：
日期：
检查人：
日期:
复核人：
日期：
表4
培养基无菌性检查表
培养基名称
管数
培养时间（天）
培养温度
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
1
2
3
4
5
结论
检查人/日期：
复核人/日期：
注：
“+”为生长，“-”为不生长。
附表7
菌种计数表
计数培养基
培养温度（℃）
培养时间（h）
菌种
类型
稀释
级数
菌落数（cfu/ml）
平皿1
平皿2
平均值
胰酪大豆胨琼脂培养基
枯草芽孢杆菌
铜绿假单胞菌
结果
评价
查人/日期：
复核人/日期：
菌落计数结果（cfu∕ml）
试验次数
10-5稀释
10-6稀释
10-7稀释
1
2
3
1
2
3
1
2
3
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
验证合格证书
验证方案名称：
无菌检查用培养基适用性检查验证方案
验证方案编号：
VP-QC-2015-02
验证报告名称：
无菌检查用培养基适用性检查验证报告（NO.）
验证报告编号：
VR-QC-2015-02
严格按照本方案规定项目进行了验证，验证合格，批准允许投入使用。
有效期：
批准人：
年月日
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
备注：
1.严格按批准方案进行，当验证条件发生变更时应报质量部审核，并经批准后再进行重新验证。
2.当中国药典中无菌检查方法发生变更时，应重新进行验证。
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