浅论依达拉奉在鼠氧自由基心肌损害和人病毒性心肌炎中的抗氧化作用研究.docx

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浅论依达拉奉在鼠氧自由基心肌损害和人病毒性心肌炎中的抗氧化作用研究

浅论依达拉奉在鼠氧自由基心肌损害和人病毒性心肌炎中的抗氧化作用研究

【摘要】目的研究依达拉奉在鼠氧自由基（OFR）心肌损害和人病毒性心肌炎（VMS）中的抗氧化作用。

方法通过检测大鼠心肌细胞培育液的心肌细胞存活力（CMV），超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA），肌钙蛋白T（cTnT）指标以对比依达拉奉、维生素C和辅酶Q10对经氧自由基预处理的心肌细胞的保护作用。

检测治疗前后血清SOD，MDA,cTnT指标以对比依达拉奉、维生素C和辅酶Q10对VMS患者的治疗作用。

结果

（1）大鼠实验示：

依达拉奉组CMV高于维生素C组（）和辅酶Q10组（）,SOD活性高于维生素C（）;MDA低于维生素C组（）及辅酶Q10组（）;cTnT低于维生素C组（）及辅酶Q10组（）。

（2）VMS研究示：

经治疗，依达拉奉组患者SOD活性上升高于维生素C组及辅酶Q10组（均为）;MDA和cTnT下降高于维生素C组及辅酶Q10组（MDA均为，cTnT均为）。

结论依达拉奉在鼠OFR心肌损害和VMS的抗氧化治疗中有明显效果。

【关键词】依达拉奉;氧自由基;病毒性心肌炎

　　ABSTRACTObjectiveTostudytheanti-oxygeneffectofedaravoneontheinjuredmyocardialcellsofratsbyoxygenfreeradicals（OFR）andonthoseofpatientswithviralmyocarditis.MethodsThedetectedindexofcardiomyocytesviability（CMV）,superoxidedismutase（SOD）,malondialdehyde（MDA）andtroponinT（cTnT）oftheinjuriedmyocardialcellsofratsbyOFRwereappliedinthecomparativeobservationoftheprotectiveeffectofedaravone,VitaminCandcoenzymeQ10onthemyocardialcellspre-preparedbyOFR;theindexofSOD,MDAandcTnTinserumdetectedbeforeandaftertreatmentwereappliedinthecomparativeobservationofthetherapeuticeffectofedaravone,VitaminCandcoenzymeQ10onpatientswithviralmyocarditis（VMS）.Results

（1）Theexperimentonratsshowedout:

theCMVinedaravonegroupwashigherthanthatinVitaminCgroup（）andthatincoenzymeQ10group（）;theSODactivityinedaravonewashigherthanthatinVitamingroup（）;theMDAandcTnTinedaravonegroupwerelowerthanthoseinVitaminCgroup（）andthoseincoenzymeQ10group（）.

（2）TheobservationofthepatientswithVMSshowedout:

theSODactivityofthepatientsinedaravonegrouprosehigherthanthatinVitaminCgroup（）andthatincoenzymeQ10group（）;thedecreaseofMDAandcTnTinedaravonegroupwasmoresignificantthatthatinVitaminCgroup（）andthatincoenzymeQ10group（）.ConclusionsEdaravoneisofobviouseffectontheinjuriedmyocardialcellsofratsandinanti-oxygentreatmentofthepatientswithVMS.

　　KEYWORDSedaravoneoxygenfreeradicalsviralmyocarditis

　　国内外多项研究已证实氧自由基（oxygenfreeradicalsOFR）对心血管系统的损害[1-2],OFR参与了心肌炎、心力衰竭、克山病和冠心病等多种心血管疾病的发生发展过程，尤其在病毒性心肌炎（VMS）的过氧化损害中起重要作用。

目前VMS的抗氧化治疗主要是大剂量维生素C,但剂量过大可使血液酸度升高，对心肌亦有损害。

其他抗氧化剂如辅酶Q10存在难溶解，易沉淀，质量不稳定等工艺问题。

依达拉奉（Edaravon3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）是一种新型氧自由基清除剂，该药能高效清除病变部位氧自由基，在脑缺血再灌注损伤的治疗中有一定疗效，因此用于VMS的抗氧化治疗应具有很大潜力。

本研究旨在观察依达拉奉对氧自由基所致大鼠心肌损害的保护作用和对人VMS的治疗作用，探讨其机制，为临床寻找VMS抗氧化治疗的可行方法提供参考。

　　1材料与方法

　　研究对象和材料

（1）实验动物：

wistar大鼠乳鼠10只，购于四川大学华西医学中心，平均体重（250±20）g（合格证号：

川实动管第70号）。

（2）临床患者：

2007年5月～2009年6月间就诊于我院满足：

①发病1周内，②肌钙蛋白T（cTnT）阳性，③特异型柯萨奇B组病毒（CVB）IgM阳性，符合1999年全国心肌炎心肌病专题研讨会提出的成人急性心肌炎诊断参考标准的患者30名，平均（±）岁。

（3）材料：

小牛血清由成都华西生物研究所提供;DMEM培养基、胰蛋白酶由GIBCO公司（美国）提供;依达拉奉注射液（10mg/5ml）由先声药业提供（国药准字H20031342）;辅酶Q10注射液（5mg/250ml）由西南药业提供（国药准字H10061135）;丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）实剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

　　方法

　　动物实验

　　模型制作及指标测定参考文献方法在四川大学华西基础医学与法医学院实验室进行大鼠模型制作：

wistar大鼠无菌条件下开胸取心，剪碎，胰蛋白酶消化成单细胞，用含胎牛血清、青霉素、链霉素的DMEM培养基制成心肌细胞悬液。

接种于六孔板，密闭静置37℃培养，第3天供实验用。

用Mossman法测定心肌细胞存活力（CMV）;肌钙蛋白T（cTnT）测试仪测算cTnT浓度;硫代巴比妥酸（TBA）法测算MDA活性;黄嘌呤氧化酶法测算SOD活力。

　　实验分组及指标测算大鼠心肌细胞随机分为5组：

第Ⅰ组：

对照组;第Ⅱ组：

（H2O2组）心肌细胞培养液中加入200μmol/LH2O2;第Ⅲ组：

（H2O2加维生素C组）培养液中加入200μmol/LH2O2和50mg/L维生素C;第Ⅳ组：

（H2O2加辅酶Q10组）培养液中加入200μmol/LH2O2和5mg/L辅酶Q10注射液;第Ⅴ组：

（H2O2加依达拉奉组）培养液中加入200μmol/LH2O2和30mg/L依达拉奉注射液。

于20min后测算各组CMV，SOD活力，MDA，cTnT指标。

　　临床研究

　　药物干预及实验分组本研究程序符合人体实验伦理标准，所有患者均需签署知情同意书。

入院后诊断为VMS的患者按计算机产生的随机序号分为维生素C组、辅酶Q10组及依达拉奉组，均常规给予卧床休息，利巴韦林抗病毒感染及对症治疗。

维生素C组（第Ⅰ组）给予静脉维生素C500mg/d;辅酶Q10组（第Ⅱ组）给予静脉辅酶Q105mg/d;依达拉奉组（第Ⅲ组）给予静脉依达拉奉50mg/d治疗;疗程7天。

　　监测指标所有患者治疗前检测血清SOD，MDA,cTnT，治疗7天后复查SOD，MDA,cTnT，并测算各指标治疗前后差值。

实验结束后对三组患者平均年龄、性别比（男/女）、入院cTnT值和CVBIgM滴度等基本情况进行比较。

　　统计学处理实验数据采用“均数±标准差（±s）”表示，应用统计软件对实验数据进行分析，多组间比较应用单因素方差分析，组间两两比较应用q检验。

　　2结果

　　大鼠心肌细胞实验示（表1）:

（1）H2O2组心肌细胞CMV低于对照组（），维生素C、辅酶Q10及依达拉奉组CMV高于H2O2组（各组均为），但均低于对照组（各组均为）。

依达拉奉组CMV高于维生素C组（）和辅酶Q10组（）。

（2）H2O2组SOD活性低于对照组（）;MDA和cTnT均高于对照组（）。

维生素C、辅酶Q10及依达拉奉组SOD活性均高于H2O2组（各组均为）;MDA和cTnT均低于H2O2组（各组均为）。

依达拉奉组SOD活性高于维生素C（）;MDA低于维生素C组（）及辅酶Q10组（）;cTnT低于维生素C组（）及辅酶Q10组（）。

　　VMS患者抗氧化治疗实验示（表2）：

依达拉奉组SOD活性上升高于维生素C组（）及辅酶Q10组（）;MDA下降高于维生素C组（）及辅酶Q10组（）;cTnT下降高于维生素C组（）及辅酶Q10组（）。

　　经统计学分析，各组患者间平均年龄、性别比（男/女）、cTnT值和CVBIgM滴度均为，无统计学差异。

表1各组大鼠心肌细胞生化指标比较表2各组VMS患者生化指标差值（治疗前后差值的绝对值）比较注：

*与Ⅰ、Ⅱ组比较,△与Ⅰ、Ⅱ组比较

　　3讨论

　　正常心肌代谢可产生H2O2、·O-2、·OH等高活性物质，即所谓OFR。

OFR可作用于生物膜中多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化反应，造成心肌细胞膜脂质过氧化作用和巯基氧化作用，损伤细胞膜，使大量细胞外Ca2+进入细胞内，造成细胞内钙超负荷，引起细胞致死性损伤。

在正常情况下体内存在清除自由基和抑制自由基反应的酶系统，如SOD、GSH-PX（谷胱甘肽过氧化物酶）等，使机体维持自由基产生和清除的动态平衡，防止自由基损伤。

当机体感染病毒或细菌时，中性粒细胞在吞噬微生物时耗能增加，产生大量OFR，同时免疫反应过程中产生的抗体复合物、补体等可促进吞噬细胞产生OFR,从而引起心肌过氧化损伤。

故应用抗氧化剂清除OFR以治疗急性VMS有一定的疗效。

　　近年临床治疗VMS的抗氧化剂主要包括维生素C、黄芪及其提取物[8-9]和辅酶Q10[10]等,而研究发现依达拉奉作为一种新型自由基清除剂除抑制花生四烯酸脂氧合酶途径[11]外，尚能有效清除羟自由基（·OH）[12]，故具有比传统抗氧化剂更强的抑制过氧化损伤作用。

　　本实验以维生素C和辅酶Q10作为对比剂，选择机体内脂质过氧化的终产物MDA反映过氧化程度、SOD活性反映机体清除OFR的能力、cTnT反映心肌细胞损伤程度，研究新型抗氧化剂依达拉奉对VMS的治疗作用。

结果显示依达拉奉对氧自由基所致大鼠心肌损害的恢复CMV和SOD活性，减少MDA和cTnT升高的疗效优于维生素C及辅酶Q10;对VMS患者恢复SOD活性、降低MDA和cTnT的疗效优于维生素C及辅酶Q10。

从动物实验和临床试验两方面证实依达拉奉的抗氧化能力优于传统抗氧化剂，从而为临床治疗心肌炎开拓了新的治疗理论和方法，为依达拉奉在临床的应用提供了新的依据。

　　我们的研究尚存在一定局限性，如样本数量较小，不能完全除外入选患者混杂因素的影响。

确切结论仍需大样本多中心研究进一步明确。

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