常用缓冲液配置.docx

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常用缓冲液配置

实验室常用缓冲液配置方案

1）1MTrisHCl（pH7.4,7.6,8、0）

组份浓度:

1MTris-HCl

配制量：

1L

配制方法：

1、称量12L1gTris置于1L烧杯中。

2、加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。

3、按下表量加入浓盐酸调节所需要得pH值.

PH值

浓HC1

7、4

约70ml

7、6

约60ml

8、0

约42ml

4、将溶液定容至1L。

5、高温高压灭菌后，室温保存。

注意:

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液得pH值随温度得变化差异很大，温

度每升高IC,溶液得pH值大约降低0.03个单位0

2）10xTEBuffer（pH7>4,7、6,8>0）

组份浓度:

100mMTris-HCL10niMEDTA

配制量：

1L

配制方法：

1、量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HClBuffer（PH7.4,7.6&0）

100ml

500mMEDTA（PH8.0）

20ml

2、向烧杯中加入约800ml得去离子水，均匀混合。

3、将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。

4、室温保存。

3）15MTris-HCl（pH8.8）

组份浓度:

L5MTris-HCl

配制虽:

1L

配制方法：

1、称量18L7gTrisl^于1L烧杯中。

2、

3、

4、

5、

加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。

用浓盐酸调节pH值至8、8。

将溶液立容至1L。

高温高压灭菌后，室温保存。

注意:

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液得pH值随温度得变化差异很大，温度每升高1C,溶液得pH值大约降低0.03个单位0

4）3M醋酸钠（pH5、2）

组份浓度:

3M酣酸钠

配制M:

100ml

配制方法：

1、称量40.8gNaAc-3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml得去离子水搅拌溶解

2、加入冰酷酸调节pH值至5、2

3、加去离子水将溶液泄容至100ml

4高温高压灭菌后，室温保存。

5）PBSBuffer

组份浓度：

137mMNaCL2.7niMKCl.lOmMNa2HPO4,2niMKH2PO4配制量:

1L

配制方法：

1、称量下列试剂，置于IL饶杯中。

NaCi

8g

KCl

D.2g

Na2HPO4

1.42g

KH2PO4

D・27g

2、向烧杯中加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。

3、滴加浓盐酸将pH值调节至7、4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4、高温高压灭菌后，室温保存。

注意:

上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要，可在配方中补充1mMCaC12与0.5inMMgCI2o6）10M醋酸钱

组份浓度：

10M酣酸彼

配制M：

100ml

配制方法：

1、称量77、1g醋酸彼置于100〜200ml烧杯中，加入约30ml得去离子水搅拌溶解。

2、加去离子水将溶液立容至100mlc

3、使用0、22mm滤膜过滤除菌。

4、密封瓶口于室温保存。

注意:

酣酸彼受热易分解，所以不能高温高压灭菌》

7）苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）

配制方法：

1、说明:

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）。

氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相得分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现得气泡。

2、配制方法:

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积得氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4C保存。

8）10%（W/V）SDS

组份浓度:

10%（W/V）SDS

配制is：

100ml

配制方法：

1、称量iOg高纯度得SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml得去离子水.68°C加入溶解

2、滴加浓盐酸调节pH值至7、2

3、将溶液立容至100ml后，室温保存。

9）2NNaOH

组份浓度：

2NNaOH

配制M：

100ml

配制方法：

1、量取80ml去离子水置于100-200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2、称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。

3、待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积是容至100ml。

4、将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10）2、5NHC1

组份浓度：

2、5NHC1

配制M：

100ml

配制方法：

1、在7&4ml得去离子水中加入21、6ml得浓盐酸（11、6N）,均匀混合。

2、室温保存。

11）5MNaCI

组份浓度:

5MNaCl

配制量：

1L

配制方法：

1、称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml得去离子水后搅拌溶解。

2、加去离子水将溶液立容至1L后，适量分成小份。

3、高温高压灭菌后,4・C保存。

11）20%（VV/V）Glucose

组份浓度：

20%（W/V）Glucose

配制虽:

100ml

配制方法：

1、称取20gGlucose置于100〜200ml烧杯中，加入约80ml得去离子水后，搅拌溶解。

2、加去离子水将溶液楚容至100ml。

3、高温高压灭菌后,4・C保存。

12）Solution1（质粒提取用）

组份浓度：

25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA.50niMGlucose配制L

配制方法：

1、量取下列溶液，置于IL烧杯中。

lMTris-HCI（PH8.0）

25ml

0・5MEDTA（PH8、0）

20ml

20%Gkicosc（l・nM）

45ml

|dH2O机0ml

2、高温高压灭菌后,49保存。

3、使用前每50ml得Solution1中加入2nil得RNaseA（20mg/ml）。

13）SolutlonH（质粒提取用）

组份浓度：

200mMNaOH.l%（W/V）SDS

配制量:

500ml

配制方法：

1、量取下列溶液，置于500ml烧杯中

10%SDS50ml

2NNaOH50ml

2、加灭菌水立容至500mL充分混匀

3、室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意:

SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌

14）Solution111（质粒提取用）

组份浓度：

3MKOAc.5MCH3COOH配制量:

500ml

配制方法：

1、称量下列试剂，置于500ml烧杯中。

KOAc

147g

CH3COOH

57.5ml

2、加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3、加去离子水将溶液主容至500mlo

4、高温高压灭菌后,4・C保存。

15）0.5MEDTA（pH8.0）

组份浓度：

0.5MEDTA

配制量：

1L

配制方法：

称取186.1gNa2EDTA-2H2O.置于1L烧杯中。

2、加入约800ml得去离子水，充分搅拌。

3、用NaOH调节pH值至8、0（约20gNaOH）o注意:

pH值至8、0时.EDTA才能完全溶解。

4、加去离子水将溶液容至1L。

5、适量分成小份后，高温高压灭菌。

6、室温保存。

16）1MDTT

组份浓度：

1MDTT

配制M:

20ml

配制方法：

1、称取3.09gDTT,加入到50ml塑料离心管内。

2、加20ml得0、01MNaOAc（pH5、2）,溶解后使用0、22mm滤器过滤除菌。

3、适量分成小份后「20・C保存。

17）10mMATP

组份浓度:

10mMATP

配制M:

20ml

配制方法：

1、称取121mgNa2ATP-3H2O,加入到50ml塑料离心管内。

2、加20ml得25niMTris-HCl（pH8.0）,搅拌溶解。

3、适量分成小份后,-2（rc保存。

一、常用贮液与溶液

Imol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量得水中，便终体积为lOmL分装成小份贮存于-2（rc。

Imol/L精胺（Spermine）:

溶解3.48g精胺于足量得水中，使终体积为lOmL分装成小份贮存于-20'Co

lOmol/L乙酸胺（ammoniumacetate）:

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水立容至1L后，用0、22um孔径得滤膜过滤除菌。

lOmg/ml牛血淸蛋白（BSA）:

加lOOmg得牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9、5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不就是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动,直至牛血淸蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水宦容到lOmL然后分装成小份贮存于-20^0

imol/L二硫苏糖醇（DTT）:

在二硫苏糖醇5g得原装瓶中加32、4ml水，分成小份贮存于-209。

或转移lOOmg得二硫苏糖醇

至微量离心管，加0、65ml得水配制成Imol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetale）:

溶解78.5g乙酸钾于足量得水中，加水立容到100ml。

Imol/L氯化钾（KCI）:

溶解7.46g氯化钾于定量得水中，加水立容到lOOmL

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）:

溶解40.8g得三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液得pH至5、2,再加水左容到lOOmL

0、5mol/LEDTA:

配制等摩尔得Na2EDTA与NaOH溶液（0、5mol/L）,混合后形成EDTA得三钠盐。

或称取186.1g得Na2EDTA-2H2O20g得NaOH,并溶于水中旋容至1L„

Imol/LHEPES:

将23、SgHEPES溶于约90ml得水中,fflNaOH调pH（6、8-8、2）,然后用水宦容至lOOmk

Iniol/LHCI:

加8、6ml得浓盐酸至91、4ml得水中。

25mg/mlIPGT:

溶解250mg得IPGT（异丙基硫代-p-D-半乳糖昔）于10ml水中，分成小份贮存于-20*C»

lmol/LMgCI2:

溶解20.3gMgCI2-6H2O于足量得水中淀容到100ml。

lOOmmol/LPMSF:

溶解174mg得PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量得异丙醇中,定容到lOmL分成小份井用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20-Co

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）:

将200mg得蛋白酶L加入到9、5nil水中，轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水主容到lOml,然后分装成小份贮存于-2（rC。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase—freeRNase）:

溶解lOmg得胰蛋白RNA酶于1ml得lOmmol/L得乙酸钠水溶液中（pH5、0）。

溶解后于水浴中煮沸15miiK使DNA酶失活。

用Imol/L得Tris-HCl调pH至7、5,于-209贮存。

（配制过程中要戴手套）

5niol/L氯化钠（NaCl）:

溶解29.2g氯化钠于足量得水中，定容至lOOmk

10N氢氧化钠（NaOH）:

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水得烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L.

10%SDS（十二烷基硫酸钠）:

称取1OOgSDS慢慢转移到约含0.9L得水得烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水宦容至1L„

2mol/L山梨（糖）g?

（Sorbitol）:

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100%三氯乙酸（TCA）:

在装有SOOgTCA得试剂瓶中加入100ml水，用磯力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2、5%X-gal（5-j^-4-氯-3」引喙一卩-半乳糖昔）:

溶解25mg得X-gal于1ml得二甲基甲酰胺（DMF）.用铝箔包裹装液管，贮存于-200

lOOxDenhardt试剂（Denhardfsregent）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分得用量

2%聚蔗糖（FicolL400型）

2%聚乙烯毗咯烷酮（PVP4））

2%BSA（组分V）水

2g

2g

2g

加水至总体枳为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容Q过滤除菌及杂质,分装成小份于-ZOOC贮存。

lOx标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

配制10ml溶液乞成分得用量

0、5mol/LTris-HCl100niniol/LMgCI2lOOmniol/LDTT2mmoI/LATP

5mmoI/L盐酸亚精胺（可选）

0、5mg/mlBSA（组分V）（可选）水

5mlImol/L贮液

ItnlImoI/L贮液

ItnlImoI/L贮液

200U1100mmol/L贮液50ul1nimol/L贮液

0、5ml10mg/mL贮液

2、25ml

将配制好得缓冲液分装成小份,贮存于・20匸°

100mniol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）町以购买到lOOmmol/L纯dNTPs贮液・・80匸可贮存至少6个月°lOminol/LdNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分得用量

lOmmoI/LdATP

2ul100mmol/LdATP贮液

lOmmoI/LdCTP

2ul100mmol/LdCTP贮液

lOnimoI/LdGTP

2ul100mmol/LdGTP贮液

lOnimoI/LdTTP

2ul100mmol/LdTTP贮液

水

12ul

20^PEG8OOO/2.5MNaCI

成分及终浓度

配制lOnH溶液各成分得用量

质量浓度为20%聚乙二醇

2、3mol/L氯化钠水

20g

50ml5mol/L氯化钠或14・6g固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠得烧杯中，加水至终体积lOOmr用磁力搅拌器搅拌溶解。

20xSSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分得用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）

88.2g

Smol/L氯化钠

175.3g

水

补足IL

溶解拧檬酸三钠（二水）与氯化钠于约0.9L水中,加几滴10NNaOH溶液调pH为7、0,用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加lOOulDEPC于100ml水中，使DEPC得体积分数为0、1%。

在37匸温浴至少12h•然后在15psi条件下髙压灭菌20min・以使残余得DEPC失活“DEPC会与胺起反应环可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）

直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺得玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌Ih.可去除甲酰胺中得离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-8（rc贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）

按照下表所给世得体积•混合1mol/L得磷酸二氢钠（单碱）肪Imol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液,获得所需pH得磷酸缓冲液。

配制1mol/L得磷酸二氢钠（NaH2PO4・H2O）贮液:

溶解138g于足量水中，使终体积为1L:

1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1moI/L

磷酸二氢钠（ml）

TE（用于悬浮与贮存DNA）

成分及终浓度

配制lOOinl溶液各成分得用量

1Ommol/LTris—HCIImmol/LEDTA水

1ml1mol/LTris-HCI（pH7.4・8、0.25*0200ul0.5mol/LEDTA（pH8、0）

98、8nil

Tris缓冲液（Tris・HClbuffer）

将121g得Tris碱溶解于约0.9L水中•再根据所要求得pH（25°C下）加一定量得浓盐酸（n、6N）・用水调整终体枳至1L。

二、电泳缓冲液、染料与凝胶加样液电泳缓冲液

SOxTrls-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液齐成分得用量

2mol/LTris碱Imol/L乙酸100nimol/LEDTA水

242g

57、1ml得冰乙酸（17、4mol/L）

200ml得0、5moI/LEDTA（pH8、0）补足IL

SxTrls-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制IL溶液齐成分得用量

445mmol/LTris碱

445nimol/L硼酸盐

10nimol/LEDTA

水

54g

27・5g硼酸

20ml得0、5mol/LEDTA（pH8、0）补足1L

染料

1%漠酚蓝（bromophenolblue）

加Ig水溶性钠型浪酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1%二甲苯青FF（x>knecyanoleFF）溶解Ig二甲苯青FF于足dK中,宦容到lOOmL

lOmg/ml得漠化乙锭（ethidiumbromide）

小心称取Ig浪化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4C贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6x碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、3N氢氧化钠

6mmoI/LEDTA

18%聚蔗糖（400型）

0、15%浪甲酚绿

0、25%二甲苯青FF

300U110N氢氧化钠

120U10.5mol/LEDTA（pH8、0）

l.Sg

15mg

25mg

水I补足到10ml

6x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、15%浪酚蓝

0、15%二甲苯青FF

5nimol/LEDTA

15%聚蔗糖（400型）水

1、5ml1%淚酚蓝

1、5ml1%二甲苯青FFlOOulO、5mol/LEDTA（pH8、0）l・5g

补足到10ml

6x澳酚蓝/二甲苯膏/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、25%浪酚蓝

0、25%二甲苯青FF

15%聚蔗糖（400型）水

2、5ml1%淚酚蓝

2、5ml1%二甲苯青FFl・5g

补足到10ml

6x甘油凝胶上样液（49贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、15%浪酚蓝

0、15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

50%甘油

水

1、5ml1%淚酚蓝

1、5ml1%二甲苯青FFlOOulO、5mol/LEDTA（pH8、0）3ml

3、9ml

6x蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、15%浪酚蓝

0、15%二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

40%聚蔗糖

水

1、5ml1%浪酚蓝

K5ml1%二甲苯青FFlOOulO、5mol/LEDTA（pH8、0）4g

补足到10ml

lOx十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0、2%浪酚蓝

0、2%二甲苯青FF

200mmol/LEDTA

0、1%SDS

50%甘汕

水

20mg

20mg

4ml0、5mol/LEDTA（pH8、0）

lOOul10%SDS

5ml

补足到10ml

三.常用培养基

1）LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白淼

lOg

酵母提取物

5g

氮化钠

lOg

如果需要用INNaOH（〜1ml）调整pH至7、0,再补足水至1L。

注:

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L・上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L.

SOB培养基

将下列组分溶解在0・9L水中：

蛋白腺

20g

酵母提取物

5g

氮化钠

O.Sg

1mol/L氯化钾

2、5ml

用水补足体积到1L。

分成lOOmi得小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后,再在毎100ml得小份中加1ml火过菌得Imol/L氯化镁。

2）SOC培养基

成分、方法同SOB培养基得配制，只就是在培养基冷却到室温后，除了在毎100ml得小份中加Iml火过菌得1mol/L氯化镁外，再加2ml火菌得Imol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到lOOmL用0.22um得滤膜过滤除菌）。

3）TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白淼

12g

酵母提取物

24g

甘汕

4ml

各组分溶解后髙压灭菌。

冷却到60C,再加100ml火菌得170mmol/LKH2PO4/0、72mol/LK2HPO4得溶液（2、31g得KH2PO4与12、54gK2HPO4溶在足量得水中，使终体积为100ml.高压灭菌或用0、22um得滤膜过滤除菌）。

4）2xYT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白淼

16g

酵母提取物

iOg

氮化钠

4ml

如果需要用INNaOH（〜1ml）调整pH至7、0•再补足水至1L。

注:

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L・卜.层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

5）YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白淼

20g

酵母提取物

lOg

匍萄糖

20g

用水补足体积为1L后，高压火菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1、6g色氨酸，因为YPD培养基就是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四、常用抗生素

1）氨节青霉素（ainpicillin）（100nig/nil）

溶解Ig氨节青蠹素钠盐于足量得水中，最后立容至10ml。

分装成小份于-2（rC贮存。

常以25ug/ml-50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。

2）殺节青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0、5g竣节青蠹素二钠盐于足量得水中，最后宦容至10ml。

分装成小份于-2（rc贮存。

常以25ug/ml-50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。

3）甲氧西林（inethicillin）（100ing/inl）

溶解Ig甲氧西林钠于足量得水中，最后楚容至lOmlo分装成小份于-2（rC贮存。

常以37、5ug/ml终浓度与lOOug/ml氨节青霉素一起添加于生长培养基。

4）卡那霉素（kanainycin）（10ing/inl）

溶解lOOmg卡那霊余于足量得水中，最后是容至lOmL分装成小份于-209贮存。

常以10ug/ml-50ug/ml得