常用缓冲液配置.docx

1、常用缓冲液配置实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris HCl (pH7. 4,7. 6,8、0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1、 称量12L1 gTris置于1 L烧杯中。2、 加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。3、 按下表量加入浓盐酸调节所需要得pH值.PH值浓HC17、4约 70ml7、6约 60ml8、0约 42ml4、 将溶液定容至1L。5、 高温高压灭菌后，室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液得pH值随温度得变化差异很大，温度每升高IC,溶液得pH值大约降低0. 03个单位02)10xTE Buffer (pH

2、7 4,7、6, 8 0)组份浓度:100 mM Tris-HCL 10 niM EDTA配制量：1 L配制方法：1、量取下列溶液，置于1L烧杯中。1M Tris-HCl Buffer(PH7. 4,7. 6& 0)100ml500mM EDTA(PH8. 0)20ml2、 向烧杯中加入约800 ml得去离子水，均匀混合。3、 将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4、 室温保存。3)15 M Tris-HCl (pH8. 8)组份浓度:L5M Tris-HCl配制虽:1 L配制方法：1、称量18L7gTrisl于1 L烧杯中。2、3、4、5、加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。用浓盐酸调节

3、pH值至8、8。将溶液立容至1 L。高温高压灭菌后，室温保存。注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液得pH值随温度得变化差异很大，温 度每升高1C,溶液得pH值大约降低0. 03个单位04)3 M 醋酸钠(pH5、2)组份浓度:3M酣酸钠配制 M :100ml配制方法：1、 称量40.8g NaAc-3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml得去离子水搅拌溶解2、 加入冰酷酸调节pH值至5、23、 加去离子水将溶液泄容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCL 2.7 niM KCl. lOmM Na2HPO4,

4、 2 niM KH2PO4 配制量:1 L配制方法：1、称量下列试剂，置于IL饶杯中。NaCi8gKClD.2gNa2HPO41.42gKH2PO4D27g2、 向烧杯中加入约800 ml得去离子水，充分搅拌溶解。3、 滴加浓盐酸将pH值调节至7、4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4、 高温高压灭菌后，室温保存。注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要，可在配方中补充1 mM CaC12与0.5 inM MgCI2o 6)10 M醋酸钱组份浓度：10 M酣酸彼配制 M： 100 ml配制方法：1、 称量77、1 g醋酸彼置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml得去离子水

5、搅拌溶解。2、 加去离子水将溶液立容至100 mlc3、 使用0、22 mm滤膜过滤除菌。4、 密封瓶口于室温保存。注意:酣酸彼受热易分解，所以不能高温高压灭菌7)苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：1、 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白 质变性并有助于液相与有机相得分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现得气泡。2、 配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积得氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃 瓶中4C保存。8)10% (W/V) SDS组份浓度:10% (W/V)SDS配制 is： 100ml配

6、制方法：1、称量iOg高纯度得SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml得去离子水.68C加入溶解2、 滴加浓盐酸调节pH值至7、23、 将溶液立容至100ml后，室温保存。9)2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制 M：100 ml配制方法：1、 量取80 ml去离子水置于100-200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能 使玻璃烧杯炸裂)。2、 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。3、 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积是容至100 ml。4、 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10)2、5NHC1组份浓度：2、5NHC1配制

7、M： 100 ml配制方法：1、 在7& 4 ml得去离子水中加入21、6ml得浓盐酸(11、6N),均匀混合。2、 室温保存。11)5 M NaCI组份浓度:5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1、 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml得去离子水后搅拌溶解。2、 加去离子水将溶液立容至1 L后，适量分成小份。3、 高温高压灭菌后,4C保存。11)20% (VV/V) Glucose组份浓度：20% (W/V) Glucose配制虽:100 ml配制方法：1、 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml得去离子水后，搅拌溶解。2、

8、 加去离子水将溶液楚容至100 ml。3、 高温高压灭菌后,4C保存。12)Solution 1(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl(pH8. 0), 10 mM EDTA. 50 niM Glucose 配制L配制方法：1、量取下列溶液，置于IL烧杯中。lMTris-HCI(PH8. 0)25ml05MEDTA(PH8、0)20ml20%Gkicosc(lnM)45ml|dH2O 机 0ml2、 高温高压灭菌后,49保存。3、 使用前每 50 ml 得 Solution 1 中加入 2 nil 得 RNase A(20 mg/ml)。13)Solutlon H(质粒提取用)组

9、份浓度：200mM NaOH.l %(W/V)SDS配制量:500ml配制方法：1、 量取下列溶液，置于500ml烧杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2、 加灭菌水立容至500mL充分混匀3、 室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌14)Solution 111(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc. 5 M CH3COOH 配制量:500 ml配制方法：1、称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc147gCH3COOH57. 5 ml2、 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3、 加去离子水将溶液主容至500 mlo4、 高

10、温高压灭菌后,4C保存。15)0.5 M EDTA(pH8. 0)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取 186. 1 gNa2EDTA-2H2O.置于 1 L 烧杯中。2、 加入约800 ml得去离子水，充分搅拌。3、 用 NaOH 调节 pH 值至 8、0(约 20gNaOH)o 注意:pH值至8、0时.EDTA才能完全溶解。4、 加去离子水将溶液容至1 L。5、 适量分成小份后，高温高压灭菌。6、 室温保存。16)1 MDTT组份浓度：1MDTT配制M :20 ml配制方法：1、 称取3. 09 g DTT,加入到50 ml塑料离心管内。2、 加20 ml得0、01

11、M NaOAc(pH5、2),溶解后使用0、22 mm滤器过滤除菌。3、适量分成小份后20C保存。17)10 mMATP组份浓度:10mMAT P配制M :20 ml配制方法：1、 称取121 mg Na2ATP-3H2O,加入到50 ml塑料离心管内。2、 加 20 ml 得 25 niM Tris-HCl(pH8. 0),搅拌溶解。3、 适量分成小份后,-2(rc保存。一、常用贮液与溶液Imol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量得水中，便终体积为lOmL分装成小份 贮存于-2(rc。Imol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量得水中，使终体积为

12、lOmL分装成小份贮存于 -20ColOmol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水立容至1L后，用0、22um 孔径得滤膜过滤除菌。lOmg/ml牛血淸蛋白(BSA):加lOOmg得牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶) 于9、5ml水中(为减少变性，须将蛋白加入水中，而不就是将水加入蛋白)，盖好盖后，轻轻摇动,直至牛血淸蛋白完全溶解为 止。不要涡旋混合。加水宦容到lOmL然后分装成小份贮存于-200imol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g得原装瓶中加32、4ml水，分成小份贮存于-209。 或转移lOOmg得二硫苏糖醇至微量

13、离心管，加0、65ml得水配制成Imol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassium acetale):溶解78.5g乙酸钾于足量得水中，加水立容到100ml。Imol/L氯化钾(KCI):溶解7.46g氯化钾于定量得水中，加水立容到lOOmL3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g得三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液得pH 至5、2,再加水左容到lOOmL0、5mol/LEDTA:配制等摩尔得Na2EDTA与NaOH溶液(0、5mol/L),混合后形成EDTA得三 钠盐。或称取186.1g得Na2EDTA-2H2O 20g得NaOH,并溶于水中

14、旋容至1LImol/LHEPES:将 23、SgHEPES 溶于约 90ml 得水中,ffl NaOH 调 pH(6、8-8、2),然后用水宦 容至lOOmkIniol/LHCI:加8、6ml得浓盐酸至91、4ml得水中。25mg/ml IPGT:溶解250mg得IPGT(异丙基硫代-p-D-半乳糖昔)于10ml水中，分成小份贮存于 -20*Clmol/LMgCI2:溶解20.3g MgCI2-6H2O于足量得水中淀容到100ml。lOOmmol/L PMSF:溶解174mg得PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量得异丙醇中,定容到lOmL分 成小份井用铝箔将装液管包裹或贮存于-20-Co20mg/m

15、l蛋白酶K(proteinase K):将200mg得蛋白酶L加入到9、5nil水中，轻轻摇动,直至蛋 白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水主容到lOml,然后分装成小份贮存于-2(rC。10mg/mlRnase(无 DNase)(DNase free RNase):溶解 lOmg 得胰蛋白 RNA 酶于 1ml 得 lOmmol/L得乙酸钠水溶液中(pH 5、0)。溶解后于水浴中煮沸15miiK使DNA酶失活。用Imol/L 得Tris-HCl调pH至7、5,于-209贮存。(配制过程中要戴手套)5niol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量得水中，定容至lOOmk10N氢氧化钠

16、(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水得烧杯中(磁力搅拌器搅拌)，氢氧 化钠完全溶解后用水定容至1L.10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取1 OOgSDS慢慢转移到约含0.9L得水得烧杯中，用磁力搅拌器 搅拌直至完全溶解。用水宦容至1L2mol/L山梨(糖)g?(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。100%三氯乙酸(TCA):在装有SOOgTCA得试剂瓶中加入100ml水，用磯力搅拌器搅拌直至完 全溶解。(稀释液应在临用前配制)2、5% X-gal(5-j-4-氯-3引喙一卩-半乳糖昔):溶解25mg得X-gal于1ml得二甲基甲酰胺 (

17、DMF).用铝箔包裹装液管，贮存于-200lOOxDenhardt 试剂(Denhardfs regent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分得用量2% 聚蔗糖(FicolL400 型)2%聚乙烯毗咯烷酮(PVP4)2%BSA(组分 V) 水2g2g2g加水至总体枳为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容Q过滤除菌及杂质,分装成小份于-ZOOC贮存。 lOx标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液乞成分得用量0、5mol/LTris-HCl 100niniol/LMgCI2 lOOmniol/L DTT

18、2mmoI/L ATP5mmoI/L盐酸亚精胺（可选）0、5mg/ml BSA（组分 V）（可选） 水5ml Imol/L 贮液Itnl ImoI/L 贮液Itnl ImoI/L 贮液200U1 100 mmol/L 贮液 50ul 1 nimol/L 贮液0、5ml 10 mg/mL 贮液2、25ml将配制好得缓冲液分装成小份,贮存于20匸100 mniol/L dNTP 溶液(dNTP solutions) 町以购买到lOOmmol/L纯dNTPs贮液80匸可贮存至少6个月 lOminol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分得用量lOmmoI/LdATP2ul 100

19、mmol/L dATP 贮液lOmmoI/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液lOnimoI/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液lOnimoI/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20 PEG 8OOO/2.5M NaCI成分及终浓度配制lOnH溶液各成分得用量质量浓度为20%聚乙二醇2、3mol/L氯化钠 水20g50ml 5 mol/L氯化钠或146g固体氯化 钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠得烧杯中，加水至终体积lOOmr用磁力搅拌器搅拌溶解。20xSSC成分及终浓度配制1L溶液各成分得用量300mmol/L柠

20、檬酸三钠（二水）88.2gSmol/L氯化钠175.3g水补足IL溶解拧檬酸三钠（二水）与氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7、0,用水补 足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加lOOul DEPC于100ml水中，使DEPC得体积分数为0、1%。在37匸温浴至少12h然后 在15 psi条件下髙压灭菌20min以使残余得DEPC失活“DEPC会与胺起反应环可用DEPC 处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺得玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌Ih. 可去除甲酰胺中得离子。经Whatm

21、an 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-8（rc贮存 （防止氧化）。磷酸缓冲液(phosphate buffer)按照下表所给世得体积混合1 mol/L得磷酸二氢钠（单碱）肪Imol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液, 获得所需pH得磷酸缓冲液。配制1 mol/L得磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液:溶解138g于 足量水中，使终体积为1L:1 mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积 为 1L。1 moI/L磷酸二氢钠（ml）TE（用于悬浮与贮存DNA）成分及终浓度配制lOOinl溶液各成分得用量1 Ommol/L TrisHCI Immol/LEDTA

22、 水1ml 1 mol/L Tris-HCI(pH7. 48、0.25*0 200ul 0. 5mol/LEDTA(pH8、0)98、8nilTris 缓冲液(TrisHCl buffer)将121g得Tris碱溶解于约0.9L水中再根据所要求得pH(25C下)加一定量得浓盐酸(n、6N) 用水调整终体枳至1L。二、电泳缓冲液、染料与凝胶加样液 电泳缓冲液SOxTrls-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液齐成分得用量2mol/LTris 碱 Imol/L乙酸 100 nimol/L EDTA 水242g57、1ml 得冰乙酸（17、4mol/L）200ml 得 0、5 moI/L E

23、DTA（pH 8、0） 补足ILSxTrls-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制IL溶液齐成分得用量445 mmol/LTris 碱445 nimol/L 硼酸盐10 nimol/L EDTA水54g275g硼酸20 ml 得 0、5mol/LEDTA（pH8、0） 补足1L染料1 % 漠酚蓝(bromophenol blue)加Ig水溶性钠型浪酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF(xkne cyanole FF) 溶解Ig二甲苯青FF于足dK中,宦容到lOOmLlOmg/ml 得漠化乙锭(ethidium bromide)小心称取Ig浪化乙锭，转移到广口瓶

24、中，加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝 箔包裹装液管，于4C贮存。凝胶上样液(gel loading solutions)6x碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0、3N氢氧化钠6 mmoI/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0、15%浪甲酚绿0、25%二甲苯青FF300U1 10N氢氧化钠120U10. 5mol/LEDTA（pH8、0）l.Sg15mg25mg水 I补足到10ml6x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0、15%浪酚蓝0、15%二甲苯青FF5 nimol/L EDTA15%聚蔗糖（400型） 水1、

25、5ml 1%淚酚蓝1、5ml 1%二甲苯青FF lOOulO、5mol/LEDTA（pH8、0） l5g补足到10ml6x澳酚蓝/二甲苯膏/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0、25%浪酚蓝0、25%二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型） 水2、5ml 1%淚酚蓝2、5ml 1 %二甲苯青 FF l5g补足到10ml6x甘油凝胶上样液（49贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0、15%浪酚蓝0、15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水1、5ml 1%淚酚蓝1、5ml 1 %二甲苯青 FF lOOulO、5mol/LEDTA（pH8、0） 3

26、ml3、9ml6x蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0、15%浪酚蓝0、15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水1、5ml 1%浪酚蓝K 5ml 1%二甲苯青FF lOOulO、5mol/LEDTA（pH8、0） 4g补足到10mllOx十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0、2%浪酚蓝0、2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0、1%SDS50%甘汕水20mg20mg4ml0、5mol/L EDTA（pH8、0）lOOul 10% SDS5ml补足到10ml三.常用培养基1） LB培养基将下列

27、组分溶解在0.9L水中:蛋白淼lOg酵母提取物5g氮化钠lOg如果需要用INNaOH（1ml）调整pH至7、0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L 上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L.SOB培养基将下列组分溶解在09L水中：蛋白腺20g酵母提取物5g氮化钠O.Sg1 mol/L氯化钾2、5 ml用水补足体积到1L。分成lOOmi得小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在毎100ml得小 份中加1ml火过菌得Imol/L氯化镁。2）SOC培养基成分、方法同SOB培养基得配制，只就是在培养基冷却到室温后，除了在毎100ml得小份中加 Iml火过菌得1 mol/L氯化镁外，再加2ml火菌

28、得Imol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再 用水补足到lOOmL用0. 22um得滤膜过滤除菌）。3）TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白淼12g酵母提取物24g甘汕4ml各组分溶解后髙压灭菌。冷却到60C,再加100ml火菌得170mmol/L KH2PO4/0、72 mol/L K2HPO4得溶液（2、31g得KH2PO4与12、54gK2HPO4溶在足量得水中，使终体积为100ml. 高压灭菌或用0、22um得滤膜过滤除菌）。4）2xYT培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白淼16g酵母提取物iOg氮化钠4ml如果需要用INNaOH（1ml）调整pH至7、0再补足水至1

29、L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L 卜.层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。5）YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白淼20g酵母提取物lOg匍萄糖20g用水补足体积为1L后，高压火菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添 加1、6g色氨酸，因为YPD培养基就是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌 前加入20g琼脂粉。四、常用抗生素1)氨节青霉素(ainpicillin)(100nig/nil)溶解Ig氨节青蠹素钠盐于足量得水中，最后立容至10ml。分装成小份于-2(rC贮存。常以 25ug/ml-50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。2)殺节青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0、5g竣节青蠹素二钠盐于足量得水中，最后宦容至10ml。分装成小份于-2(rc贮存。常 以25ug/ml-50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。3)甲氧西林(inethicillin)(100ing/inl)溶解Ig甲氧西林钠于足量得水中，最后楚容至lOmlo分装成小份于-2(rC贮存。常以37、5ug/ml 终浓度与lOOug/ml氨节青霉素一起添加于生长培养基。4)卡那霉素(kanainycin)(10ing/inl)溶解lOOmg卡那霊余于足量得水中，最后是容至lOmL分装成小份于-209贮存。常以 10ug/ml-50ug/ml得