Agilent高效液相验证.docx
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Agilent高效液相验证
编号：
STP-YZ-HY-004-00
检测仪器验证报告
Agilent—1200高效液相色谱仪
浙江花园药业有限公司
1概述：
高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
1.1设备的描述
本公司所用的高效液相色谱仪是由在线脱泡机、四元泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器以及相关管路等组成，主要是针对本公司所有适用高效液相色谱法分析的各种产品而购入的，该设备现安装于QC三楼仪器室（三）。
设备名称：
高效液相色谱仪型号：
Agilent-1200
生产厂商：
USAAgilentTechnologies
1.2设备档案
资料名称
编号
存放地点
1.3仪器备件
备件名称
提供厂家或型号
数量
存放地点
1.4维修服务
单位名称
联系人
地址
电话
1.5设备选择标准依据来源与验证标准
1.5.1JJG705-2002液相色谱仪检定规程
1.5.2《中国药典》2005年版
1.5.3Agilent-1200高效液相色谱仪操作和维护保养规程（SOP-QC-GY-032-00）
2验证目的：
为了确保Agilent-1200高效液相色谱仪的设计符合要求，为了确保使用该仪器的所检测数据真实可靠，为了确保该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标。
3参与验证的相关部门及其职责
3.1验证小组
3.1.1负责验证方案的审批；
3.1.2负责验证数据及结果的审核；
3.1.3负责验证报告的审核；
3.1.4负责验证周期的确认；
3.1.5负责发放验证证书；
3.2工程部
3.2.1负责设备的安装、调试，并做好相应的记录；
3.2.2负责建立设备档案；
3.2.3负责拟定验证周期；
3.2.4负责收集预、安装确认的试验记录；
3.3质量管理部
3.3.1负责对验证参数要求进行确认；
3.3.2负责根据检验结果出具检验报告单；
3.3.3负责仪器、仪表的校验；
3.3.4负责起草设备操作、清洁和维护保养等方面的标准操作规程；
3.3.5负责设备日常的维护保养工作；
4验证内容
4.1四元泵
4.1.1泵的耐压性
将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1ml/min，按Agilent-1200高效液相色谱仪操作和维护保养规程启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹，卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5min应不漏液；
压力最大允许值
泵压力
是否漏液
结果
检查人/日期：
复核人/日期：
4.1.2泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
2.0
测量次数
3
3
3
流动相收集时间
10
5
5
允许误差
SS
5%
3%
2%
SR
3%
2%
2%
注：
①最大流量的设定值可根据用户使用情况而定。
②对特殊的、流量小的仪器，流量的设定可根据用户使用情况选大、中、小三个流量，流动相的收集时间则根据情况适当的缩短或延长。
启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式
（1）、
（2）计算SS和SR，结果记录在下表中；
流量（ml/min）
次数
W1
W2
W2-W1
SS
SR
0.5
1
2
3
1.0
1
2
3
2.0
1
2
3
注：
Ss=（
-Fs）/Fs×100%式
（1）
SR=（Fmax-Fmin）/
×100%式
（2）
式中：
Fm——Fm=（W2-W1）/（ρ•t），流量实测值，ml/min；
W2——容量瓶+流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；
ρ——试验温度下流动相的密度，g/mL；t——收集流动相的时间，min；
——同一组测量的算术平均值，mL/min；FS——流量设定值，mL/min；
Fmax——同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min。
检查人/日期：
复核人/日期：
4.1.3梯度误差
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，C溶剂为甲醇，C经由5个阶梯从0变到100%，如下图所示，将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线，求出A、C溶剂不同比例时的记录仪读数，重复测量2次，计算平均值。
从C溶剂的含量及对应的记录仪读数，按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci最大者作为仪器梯度误差，应不超过±3%，结果记录在下表中；
次数
第一阶段读数
第二阶段读数
第三阶段读数
第四阶段读数
第五阶段读数
1
2
Gci
注：
Gci=（
-
）/
×100%式（3）
式中：
Gci——第i段梯度误差（%）；
——第i段记录仪读数平均值；
——各段记录仪读数平均值的平均值。
检查人/日期：
复核人/日期：
4.1.4泵控制流动相比例的精密度
开启仪器，按照下表中的流动相比例设定流动相，用两量筒（已校验）接收流动相，经10分钟，比较在设定流动相比例的理论流出量与实际流出量，误差允许范围：
F（1-F）10%，F为所测流动相组分所占的体积比：
序号
设定流动相比例
实际流出量
误差
结果
1
A
B
C
D
2
A
B
C
D
3
A
B
C
D
检查人/日期：
复核人/日期：
4.2柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定
将温度计（已校验，分度值为0.1℃）放置在柱温箱内，选择35℃和45℃进行检定，按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值，平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC，结果记录在下表，柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃；
设定温度
实测温度
平均值
ΔTS
TC
结果
35℃
1
2
3
4
5
6
7
45℃
1
2
3
4
5
6
7
检查人/日期：
复核人/日期：
4.3紫外-可见检测器
4.3.1基线噪音和基线漂移
选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长设定为254nm，待仪器稳定后，记录基线30min，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度，计算基线噪音，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线噪音应不超过5×10-4；
衰减倍数
测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度
基线噪音
结果
注：
Nd=KB
式中：
K：
衰减倍数；B：
测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度
基线漂移在1h内偏离原点的值为（AU/h），应不超过5×10-3AU/h。
检查人/日期：
复核人/日期：
4.3.2最小检测浓度
在4.3.1的色谱条件下，进样量20µl；取适量的萘，用甲醇稀释制成1×10-7g/ml的溶液，连续进样6次，记录萘/甲醇溶液的色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰—峰高，按下式来计算最小检测浓度（CL），应不超过1×10-7g/ml，结果记录在下表；
萘的称样量
稀释倍数
萘的色谱峰高
平均峰高
最小检测浓度
结果
注：
CL=
2Nd×c×V
H×20
式中：
Nd：
基线噪声峰—峰高；c：
标准溶液浓度；H：
标准溶液的色谱峰高；V：
进样体积
检查人/日期：
复核人/日期：
5整机性能
在4.3.2所记录的色谱图中，按下式计算Rsd值，Rsd≤2.0%，并将结果记录在下表中；
品名
称样量
项目指标
实验结果
结果
分离度（R）≥1.5
Rsd≤2%
图谱文件名
峰面积（A）
平均数（M）
Rsd值
结果
注：
M=（A1+A2+……An）/n
Rsd=
式中：
M：
峰面积平均数；A：
峰面积；n：
测量次数
检查人/日期：
复核人/日期：
6偏差说明及措施：
7验证小组人员签字/日期：
8偏差处理及验证总结报告
在整个验证工作全部结束后，起草验证方案的部门负责对验证工作进行总结，并做出科学的评价，对验证结果评价的内容包括：
8.1.验证活动是否有遗漏；
8.2验证实施过程中对验证方案有无修改；修改的原因、依据及是否经过批准；
8.3验证记录是否完整；
8.4验证试验结果是否符合规定；偏差及对偏差的说明是否合理；是否需要进一步补充试验；
验证结果由验证小组审核，验证报告经验证小组组长批准后生效。
9再验证要求：
9.1再验证周期：
9.1.1设备大修后需再校验；
9.1.2由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证；
9.1.3由于温度变化、机械振动或腐蚀作用及其它原因可能使设备的某些性能随时间而变化，应进行周期性再验证；
9.1.4高效液相色谱仪的验证周期为一年，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。
9.2再验证内容：
进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。
10验证综合评价及建议：
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