不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化.docx
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不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化
不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化
实验器材:
电热恒温水浴槽离心机紫外可见分光光度计电子天平超声波清洗剂研钵具塞试管试管架5ml移液管2ml移液管滴管试管剪刀比色皿洗耳球烧杯量筒滤纸称量纸
实验试剂:
提取液(80%丙酮:
95%乙醇为2:
1)CaCO3石英砂蒸馏水
实验材料:
新叶(变红,即红色):
选取栽培条件、树体大小一致,健壮新梢3~5叶位
老叶(无变红,即绿色):
选取栽培条件、树体大小一致,健壮新梢3~5叶位
测定方法:
1.研磨法
取新鲜叶片,洗净擦干,除去粗大的叶脉,将叶片剪碎,称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂,研磨5min成匀浆加入到离心管中,再加入5ml提取液,清洗研钵,然后加入离心管中重复2次,然后以3000r/min离心3min后进行检测。
(若检测出的数值大于1,则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中,摇匀)以提取液为参比,利用紫外可见分光光度计,分别在645nm和663nm测定光密度,计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。
实验3次,取平均值。
2.直接浸提法
取新鲜叶片,洗净擦干,除去粗大的叶脉,将叶片剪碎,称取1g放入20 mL具塞试管中,用提取液定容至刻度,于暗柜中静置48h浸取,以3000r/min离心3min后进行检测。
(若检测出的数值大于1,则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中,摇匀)以提取液为参比,利用紫外可见分光光度计,分别在645nm和663nm测定光密度,计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。
实验3次,取平均值。
3.加热浸提法
取新鲜叶片,洗净擦干,除去粗大的叶脉,将叶片剪碎,称取1g放入20mL具塞试管中,放入水浴锅50℃加热5h,将其转入离心管,以3000r/min离心3min后进行检测。
(若检测出的数值大于1,则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中,摇匀)以提取液为参比,利用紫外可见分光光度计,分别在645nm和663nm测定光密度,计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。
实验3次,取平均值。
4.超声波研磨法
取新鲜叶片,洗净擦干,除去粗大的叶脉,将叶片剪碎,称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂,研磨5min成匀浆加入到离心管中,再加入5ml提取液,清洗研钵,然后加入离心管中重复2次,然后将超声波清洗机的温度调为50℃,分别加热20min,40min,60min。
然后以3000r/min离心3min后进行检测。
(若检测出的数值大于1,则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中,摇匀)以提取液为参比,利用紫外可见分光光度计,分别在645nm和663nm测定光密度,计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。
实验3次,取平均值。
5.超声波浸提法
取新鲜叶片,洗净擦干,除去粗大的叶脉,将叶片剪碎,称取1g放入20 mL具塞试管中,用提取液定容至刻度,然后将超声波清洗机的温度调为50℃,加热40min然后以3000r/min离心3min后进行检测。
(若检测出的数值大于1,则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中,摇匀)以提取液为参比,利用紫外可见分光光度计,分别在645nm和663nm测定光密度,计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。
实验3次,取平均值。
计算方法:
取待测液,于663nm与645nm处测定吸光度值,按照Arnon公式计算叶绿素a和叶绿素b及叶绿素的含量
叶绿素a提取量(mg/g)=[12.7A663—2.69A645]V/(1000·W)
叶绿素b提取量(mg/g)=[22.9A645-4.68A663]V/(1000·W)
叶绿素总提取量(mg)=叶绿素a提取量+叶绿素b提取量
式中:
A663——波长663nm处的吸光度
A645——波长645nm处的吸光度
V——提取液的体积(mL)
W一叶片质量(g)
1.ArnonDLCopperenzymesinisolatedchloioplastspolyphenol
oxidaseinBetavulgaris[J].PlantPhysiology,1949,24:
1-5
实验数据记录:
直接浸提法53h3月20日~3月22日
波长
A645
A663
绿色
0.551
0.525
0.816
0.510
0.756
0.476
平均值
0.708
0.504
红色
0.299
0.247
0.303
0.249
0.322
0.253
平均值
0.308
0.250
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.389
叶绿素b提取量(mg/g)=0.167
叶绿素总提取量(mg)=0.556
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.195
叶绿素b提取量(mg/g)=0.063
叶绿素总提取量(mg)=0.258
加热浸提法3月23日
波长
A645
A663
绿色
0.325
0.998
0.333
0.926
0.382
0.893
平均值
0.347
0.939
红色
0.117
0.365
0.127
0.386
0.115
0.362
平均值
0.120
0.371
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.727
叶绿素b提取量(mg/g)=0.237
叶绿素总提取量(mg)=0.964
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.293
叶绿素b提取量(mg/g)=0.529
叶绿素总提取量(mg)=0.822
研磨法3ml3月25日
波长
A645
A663
绿色
0.417
0.722
0.643
0.968
0.518
0.822
平均值
0.526
0.837
红色
0.570
0.986
0.533
0.763
0.375
0.568
平均值
0.493
0.772
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.369
叶绿素b提取量(mg/g)=0.325
叶绿素总提取量(mg)=0.694
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.340
叶绿素b提取量(mg/g)=0.307
叶绿素总提取量(mg)=0.647
超声波浸提法40min3月27日
波长
A645
A663
绿色
0.272
0.740
0.393
0.987
0.297
0.650
平均值
0.321
0.792
红色
0.127
0.347
0.123
0.340
0.183
0.530
平均值
0.144
0.406
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.613
叶绿素b提取量(mg/g)=0.226
叶绿素总提取量(mg)=0.839
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.318
叶绿素b提取量(mg/g)=0.093
叶绿素总提取量(mg)=0.411
超声波研磨法20min3月27日
波长
A645
A663
绿色
0.803
0.511
0.636
0.386
0.622
0.391
平均值
0.687
0.429
红色
0.397
0.263
0.756
0.538
0.549
0.275
平均值
0.567
0.359
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.326
叶绿素b提取量(mg/g)=0.181
叶绿素总提取量(mg)=0.507
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.273
叶绿素b提取量(mg/g)=0.148
叶绿素总提取量(mg)=0.421
超声波研磨法40min3月28日
波长
A645
A663
绿色
0.327
0.281
0.755
0.422
0.466
0.301
平均值
0.516
0.335
红色
0.538
0.366
0.554
0.363
0.640
0.407
平均值
0.577
0.379
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.256
叶绿素b提取量(mg/g)=0.354
叶绿素总提取量(mg)=0.610
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.290
叶绿素b提取量(mg/g)=0.146
叶绿素总提取量(mg)=0.436
超声波研磨法60min3月29日
波长
A645
A663
绿色
0.341
0.898
0.339
0.884
0.329
0.842
平均值
0.336
0.875
红色
0.290
0.711
0.219
0.529
0.315
0.753
平均值
0.275
0.664
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.681
叶绿素b提取量(mg/g)=0.240
叶绿素总提取量(mg)=0.921
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.513
叶绿素b提取量(mg/g)=0.213
叶绿素总提取量(mg)=0.726
超声波研磨法70min3月30日
波长
A645
A663
绿色
0.368
0.964
0.262
0.664
0.338
0.882
平均值
0.323
0.839
红色
0.141
0.353
0.178
0.486
0.190
0.472
平均值
0.170
0.437
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.652
叶绿素b提取量(mg/g)=0.231
叶绿素总提取量(mg)=0.883
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.340
叶绿素b提取量(mg/g)=0.123
叶绿素总提取量(mg)=0.463
超声波研磨法80min3月30日
波长
A645
A663
绿色
0.314
0.821
0.391
0.850
0.294
0.726
平均值
0.333
0.799
红色
0.156
0.395
0.163
0.417
0.146
0.380
平均值
0.155
0.397
老叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.617
叶绿素b提取量(mg/g)=0.259
叶绿素总提取量(mg)=0.876
新叶:
叶绿素a提取量(mg/g)=0.308
叶绿素b提取量(mg/g)=0.113
叶绿素总提取量(mg)=0.421
数据分析:
由上表可知超声波研磨法的超声最佳时间是60min,并且加热浸提法的提取叶绿素含量较高。
注明:
红线部分是没有进行稀释的,而黑色的是稀释了10ml的,并且研磨法是稀释了3ml。
因为红叶石楠的叶绿素没有人做过,所以我的提取剂以及配比是从有关植物叶绿素的提取的论文里参考的。
参考文献:
80%丙酮:
95%乙醇为2:
1——油菜叶绿素提取方法的研究
液料比1g:
20ml——青草叶绿素提取工艺的研究
提取剂用量20mL——冬青叶叶绿素提取工艺研究
研磨5min——叶绿素提取分离及观察体会