不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化.docx

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不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化

不同季节红叶石楠的叶绿素含量的变化

实验器材：

电热恒温水浴槽离心机紫外可见分光光度计电子天平超声波清洗剂研钵具塞试管试管架5ml移液管2ml移液管滴管试管剪刀比色皿洗耳球烧杯量筒滤纸称量纸

实验试剂：

提取液（80%丙酮：

95%乙醇为2:

1）CaCO3石英砂蒸馏水

实验材料：

新叶（变红，即红色）：

选取栽培条件、树体大小一致，健壮新梢3~5叶位

老叶（无变红，即绿色）：

选取栽培条件、树体大小一致，健壮新梢3~5叶位

测定方法：

1.研磨法

取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂，研磨5min成匀浆加入到离心管中，再加入5ml提取液，清洗研钵，然后加入离心管中重复2次，然后以3000r/min离心3min后进行检测。

（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。

实验3次，取平均值。

2.直接浸提法

取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20 mL具塞试管中,用提取液定容至刻度,于暗柜中静置48h浸取,以3000r/min离心3min后进行检测。

（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。

实验3次，取平均值。

3.加热浸提法

取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20mL具塞试管中,放入水浴锅50℃加热5h，将其转入离心管，以3000r/min离心3min后进行检测。

（若检测出的数值大于1，则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。

实验3次，取平均值。

4.超声波研磨法

取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入研钵中加提取液5ml,少许CaCO3和石英砂，研磨5min成匀浆加入到离心管中，再加入5ml提取液，清洗研钵，然后加入离心管中重复2次，然后将超声波清洗机的温度调为50℃，分别加热20min，40min，60min。

然后以3000r/min离心3min后进行检测。

（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。

实验3次，取平均值。

5.超声波浸提法

取新鲜叶片，洗净擦干，除去粗大的叶脉，将叶片剪碎，称取1g放入20 mL具塞试管中,用提取液定容至刻度,然后将超声波清洗机的温度调为50℃，加热40min然后以3000r/min离心3min后进行检测。

（若检测出的数值大于1，则则取上述色素提取液3ml再加入提取液10ml稀释后转入比色皿中，摇匀）以提取液为参比，利用紫外可见分光光度计，分别在645nm和663nm测定光密度，计算叶绿素a叶绿素b,叶绿素a+b的含量。

实验3次，取平均值。

计算方法：

取待测液，于663nm与645nm处测定吸光度值，按照Arnon公式计算叶绿素a和叶绿素b及叶绿素的含量

叶绿素a提取量（mg／g）=[12.7A663—2.69A645]V／（1000·W）

叶绿素b提取量（mg／g）=[22.9A645-4.68A663]V／（1000·W）

叶绿素总提取量（mg）=叶绿素a提取量+叶绿素b提取量

式中：

A663——波长663nm处的吸光度

A645——波长645nm处的吸光度

V——提取液的体积（mL）

W一叶片质量（g）

1.ArnonDLCopperenzymesinisolatedchloioplastspolyphenol

oxidaseinBetavulgaris[J]．PlantPhysiology，1949，24：

1-5

实验数据记录：

直接浸提法53h3月20日~3月22日

波长

A645

A663

绿色

0.551

0.525

0.816

0.510

0.756

0.476

平均值

0.708

0.504

红色

0.299

0.247

0.303

0.249

0.322

0.253

平均值

0.308

0.250

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.389

叶绿素b提取量（mg／g）=0.167

叶绿素总提取量（mg）=0.556

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.195

叶绿素b提取量（mg／g）=0.063

叶绿素总提取量（mg）=0.258

加热浸提法3月23日

波长

A645

A663

绿色

0.325

0.998

0.333

0.926

0.382

0.893

平均值

0.347

0.939

红色

0.117

0.365

0.127

0.386

0.115

0.362

平均值

0.120

0.371

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.727

叶绿素b提取量（mg／g）=0.237

叶绿素总提取量（mg）=0.964

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.293

叶绿素b提取量（mg／g）=0.529

叶绿素总提取量（mg）=0.822

研磨法3ml3月25日

波长

A645

A663

绿色

0.417

0.722

0.643

0.968

0.518

0.822

平均值

0.526

0.837

红色

0.570

0.986

0.533

0.763

0.375

0.568

平均值

0.493

0.772

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.369

叶绿素b提取量（mg／g）=0.325

叶绿素总提取量（mg）=0.694

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.340

叶绿素b提取量（mg／g）=0.307

叶绿素总提取量（mg）=0.647

超声波浸提法40min3月27日

波长

A645

A663

绿色

0.272

0.740

0.393

0.987

0.297

0.650

平均值

0.321

0.792

红色

0.127

0.347

0.123

0.340

0.183

0.530

平均值

0.144

0.406

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.613

叶绿素b提取量（mg／g）=0.226

叶绿素总提取量（mg）=0.839

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.318

叶绿素b提取量（mg／g）=0.093

叶绿素总提取量（mg）=0.411

超声波研磨法20min3月27日

波长

A645

A663

绿色

0.803

0.511

0.636

0.386

0.622

0.391

平均值

0.687

0.429

红色

0.397

0.263

0.756

0.538

0.549

0.275

平均值

0.567

0.359

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.326

叶绿素b提取量（mg／g）=0.181

叶绿素总提取量（mg）=0.507

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.273

叶绿素b提取量（mg／g）=0.148

叶绿素总提取量（mg）=0.421

超声波研磨法40min3月28日

波长

A645

A663

绿色

0.327

0.281

0.755

0.422

0.466

0.301

平均值

0.516

0.335

红色

0.538

0.366

0.554

0.363

0.640

0.407

平均值

0.577

0.379

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.256

叶绿素b提取量（mg／g）=0.354

叶绿素总提取量（mg）=0.610

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.290

叶绿素b提取量（mg／g）=0.146

叶绿素总提取量（mg）=0.436

超声波研磨法60min3月29日

波长

A645

A663

绿色

0.341

0.898

0.339

0.884

0.329

0.842

平均值

0.336

0.875

红色

0.290

0.711

0.219

0.529

0.315

0.753

平均值

0.275

0.664

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.681

叶绿素b提取量（mg／g）=0.240

叶绿素总提取量（mg）=0.921

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.513

叶绿素b提取量（mg／g）=0.213

叶绿素总提取量（mg）=0.726

超声波研磨法70min3月30日

波长

A645

A663

绿色

0.368

0.964

0.262

0.664

0.338

0.882

平均值

0.323

0.839

红色

0.141

0.353

0.178

0.486

0.190

0.472

平均值

0.170

0.437

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.652

叶绿素b提取量（mg／g）=0.231

叶绿素总提取量（mg）=0.883

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.340

叶绿素b提取量（mg／g）=0.123

叶绿素总提取量（mg）=0.463

超声波研磨法80min3月30日

波长

A645

A663

绿色

0.314

0.821

0.391

0.850

0.294

0.726

平均值

0.333

0.799

红色

0.156

0.395

0.163

0.417

0.146

0.380

平均值

0.155

0.397

老叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.617

叶绿素b提取量（mg／g）=0.259

叶绿素总提取量（mg）=0.876

新叶：

叶绿素a提取量（mg／g）=0.308

叶绿素b提取量（mg／g）=0.113

叶绿素总提取量（mg）=0.421

数据分析：

由上表可知超声波研磨法的超声最佳时间是60min，并且加热浸提法的提取叶绿素含量较高。

注明：

红线部分是没有进行稀释的，而黑色的是稀释了10ml的，并且研磨法是稀释了3ml。

因为红叶石楠的叶绿素没有人做过，所以我的提取剂以及配比是从有关植物叶绿素的提取的论文里参考的。

参考文献：

80%丙酮：

95%乙醇为2:

1——油菜叶绿素提取方法的研究

液料比1g：

20ml——青草叶绿素提取工艺的研究

提取剂用量20mL——冬青叶叶绿素提取工艺研究

研磨5min——叶绿素提取分离及观察体会