促黄体生成激素作业指导书医学检验.docx
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促黄体生成激素作业指导书医学检验
《文件已阅声明表》
《Procedurecirculationform》
文件名称:
促黄体生成激素作业指导书表号:
KM-MP03•02•02
已阅声明：
本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。
（Ihaveunderstoodtherelevantcontentofthedocument.Iwillkeepthedocumentsecretandberesponsibletoproperlyperformprocedure）
阅读人签名表
姓名（NAME）
职务（POSITION）
签名（SIGNATURE）
签名日期（DATE）
《文件修改记录页》
《Procedureamendmentform》
表号:
KM-MP03•02•03
序号
NO.
页码（Page）
内容更改说明（DescriptionofModifiedcontents）
审批人
（Approvedby）
批准生效日期
（Approveddate）
1
换版
《文件信息表》
《Procedureinformationform》
表号:
KM-MP03•02•04
文件名
TitleofDOC.（Doc.Code）
促黄体生成激素作业指导书（KM-SOP0300•310）
版本号（EditionNo.）
Edition3.0
生效日期（Operativedate）
2008-01-13
文控部门
（Doc.ControlDept.）
实验室文控室
回顾日期/签名（Reviewdate/signature）
回顾日期（Reviewdate）
回顾人员签名（Signature）
替代文件（Replaces）
促黄体生成激素作业指导书（KM-SOP0300•310）Edition2.0
存放地点（Location）/持有人（Holder）
No.Location（Holder）No.Location（Holder）
1诊断部文控室（陈彬）
2
2发光室（段学成）
作者签名/日期（Authorsignature/date）
陈鲜美
审批人签名/日期（Authorizedby:
Signature/Date）
陈建波
接收人签名/日期
（Receiptor/Date）
副本数（copyNo.）
本文件是第个文件拷贝/共发放2个文件拷贝。
促黄体生成激素检测作业指导书
（AnalysisofLuteinizingHormone（LH）byIMMULITE2000）
1.原理（Testprinciple）:
固相、夹心化学发光免疫量度检测（asolid-phase,two-sitechemiluminescentimmunometricassay）：
包括免疫反应和化学反应,利用在化学反应中释放大量自由能产生激发态中间体,当其回到稳定的基态时,同时也发射出光子，利用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。
2.样本收集和储存（SpecimenCollectionandStorage） :
标本收集（Specimencollection）:
血清（serum）;单次用量（volume）250μl，仪器加样量（samplingvolume）75μl。
拒收标本（Specimenrejection）：
推荐使用超速离心清除脂血（lipoprotein）样本。
溶血（hemolysis）样本提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。
血清（serum）样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在。
为避免纤维蛋白对结果的影响必须确保离心处理前样本已经完全充分凝集。
对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。
源于不同生产商的血样收集试管，由于原材料和添加剂不同，包括凝胶或物理涂层、促凝剂和/或抗凝剂，可能导致得到不同的结果。
本试剂盒没有对所有可能应用的收集管类型进行测试。
标本储存条件（specimenstorageconditions）：
室温（roomtemperature）:
24h,2-8℃2周；-20℃2个月；十天后处理标本。
3、试剂（Reagent）:
3.1美国DPCIMMULITE2000原装试剂。
L2KLH2200T
3.1.1试剂内组份（Components）：
ⅠLH包被珠（L2LH12）
包被珠包装带有条码。
一个包装200个。
包被有单克隆鼠抗LH。
2～8℃可稳定至失效期。
L2KLH2：
1个L2KLH6：
3个
ⅡLH试剂楔（L2LHA2）
试剂楔带有条码。
11.5mL碱性磷酸酶标记的多克隆山羊抗LH液。
2～8℃可稳定保存至失效期。
L2KLH2：
1个L2KLH6：
3个
使用前将试剂楔顶部穿孔部位的胶条撕开，注意不要损坏条码。
揭掉试剂楔顶部的铝箔封条，将试剂楔滑盖的顶部搭扣在下方的斜坡上。
ⅢLH校正（LLHL，LLHH）
两瓶（低、高）含LH的非人类血清基质。
复溶每瓶加4.0mL蒸馏水或去离子水。
复溶后2～8℃可稳定保存30天，-20℃可以保存（分装）6个月。
L2KLH2：
1套L2KLH6：
2套
校正前将相应的分装标签（随试剂盒提供）贴于实验管上，以便分析仪上的读码器能够读取条码。
3.1.2未随试剂盒提供的组分
L2SUBM：
化学发光底物
L2PWSM：
探针清洗液
L2KPM：
探针清洗试剂盒
L2RXT：
反应管（一次性）
CON6：
三水平、多成分的质控
其它必需：
蒸馏水或去离子水、实验试管、
3.2试剂准备（Reagentpreparation）：
将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。
Putreagentfromrefrigeratorytoroomtemperatureforpropertime;Newreagentlotsmustbetestedinparallelwitholdlotsbeforeorconcurrentlywithbeingplacedinservicetoensurethatthecalibrationofthenewlotofreagenthasmaintainedconsistentresultsforpatientspecimens.Recordtheresults.
4仪器（Instrument）：
美国DPCIMMULITE2000.
4.1仪器准备（Prepareapparatus）：
使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的蒸馏水，清冼液，底物及样本杯。
然后运行仪器操作软件。
而后排水及底物，防止内有残留气柱。
将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。
5.安全防范（SafetyPrecautions）：
操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。
6校准（Calibration）：
6.1校准品储存和使用（Calibrationmaterialstorageandusage）：
美国IMMULITE2000原装校准品。
要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。
Stopusingoverduecalibrationmaterial.useitwithinexpirationdate,storagein2-8℃
复溶（Calibrationmaterialresolved）：
用复溶专用加样枪准确吸取4mL去离子水于瓶中，溶解静置1小时，混匀并用有盖小子弹头分装600μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。
Labelconfectingdate,calibrationlot,personwhoconfected,expirationdate.then
复溶后校准品成分的稳定性：
保存于15~25℃，可稳定8小时
保存于2~8℃，可稳定2天
保存于（-15）~（-25）℃，可稳定1个月（不可反复冻融）。
6.2校准周期（RecommendedAdjustmentInterval）：
4周（4weeks）。
6.3当下列任何一种情况出现时，请重新校准：
（Iifoneofthetwohappens,recalibration）
⑴试剂批号改变（Reagentlotchanges）
⑵根据质控需要进行校准（Recalibrationbasedonqualitycontrolproblem）
6.4步骤：
将两个样本管中分别加入至少500ul的A，B校准品，并一一对应分别贴上校准条码，放入样本架上。
将样品架推入样品槽中，点击RUN。
然后在计算机屏幕上选择kits项，用扫码器扫描药盒上的条码，选择worklist项，输入校正信息，输入是需在ADJUSTOR中的Kitlot一栏中输入校正信息，并申请LH检测项目，开始校准。
校准同时加上质控品。
对校准结果进行判定。
7操作过程：
（ProceduralSteps）
7.1将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。
7.2取出空样本架，将含有血清的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。
因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul。
（样本用量75ul）交待清楚实验号与样本架号的对应关系，便于联机。
7.3点击RUN。
在[WORKLIST]中输入实验号，在[AssignTubePosition]中指定样品位置，在Tests中指定LH项目。
结果出来后，在菜单[tool]中的export按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。
7.4数据联机入系统（SenddatatoLIS）
数据审核（Datacheckup）：
联机是否正确？
审查结果是否正确?
实验号与样本架号的对应，原始导出结果与系统结果是否对应等。
8质量控制（Qualitycontrol）：
使用CON6质控品做质控，每工作日至少做两个浓度的值，二个浓度其靶值和SD参阅质控图。
最大允许误差ALE为25%。
室内质控CV为L:
9.79%;H:
7.58%,偏移为6.96%,过程稳定性<2%.根据公式:
△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用计算软件可得,低值选择的质控规则:
13s/22s/R4s/41sN=2;高值选择的质控规则13s/22s/R4s/41sN=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理
9.稀释（Dilution）：
当结果超过AMR时，需要稀释，如果需要手工稀释，按以下标准
稀释材料（dilutionmaterial）:
MD2（IMMULITE2000多成份稀释液）
最大稀释倍数（dilutiontimes）:
1:
9（25ulsample:
225uldiluents）
10.计算（Calculations）：
N/A
11.参考范围（Expectedvalues）：
95%范围单位（mIU/ml）
成年男性：
0.8-7.6
健康成年女性：
滤泡期：
1.1-11.6
中期：
17.0-77.0
黄体期：
0-14.7
经期：
0-12.0
绝经期初始：
11.3-39.8
12方法的局限性（MethodLimitations）：
12.1精密度（Precision）：
12.1.1批间精密度：
（mIu/ml）：
Ø低值：
高值：
Ø
Ø算术均数（Mean）=10.76算术均数（Mean）=29
Ø
Ø标准差（SD）=0.70标准差（SD）=1.03
Ø
Ø变异系数（CV）=7.1%变异系数（CV）=6.22%
Ø
12.1.2批内精密度：
（mIu/ml）：
算术均数（Mean,M）=24.9400。
标准差（Standaredeviation,S）=0.6310。
变异系数（Coefficientofvariation,CV）=2.53%。
12.2灵敏度（Sensitivity）：
0.05mIu/ml
12.3分析测试范围（AMR）：
0-200mIu/ml
12.4病人结果报告范围（CRR）：
0-2000mIu/ml
12.5干扰物质（InterferingSubstances）：
如人血清中嗜异性抗体。
12.6注意事项（Notices）。
仅供体外诊断使用。
●试剂：
2～8℃保存。
其处理应遵守相应的法律规定。
●
●对于所有组份都要将其视为传染原，按照全球传染病预防法来处理和防范。
源自人血的原材料全部经过检验，与梅毒、HIV1&2抗体、HBsAg和HCV抗体没有反应。
●
●加入浓度小于0.1g/dL的叠氮钠作为防腐剂。
其处理措施应采用在铅或铜质容器中以大量水冲洗，避免易爆的金属叠氮化合物聚集而产生潜在爆炸危险。
●
●化学发光底物：
避免污染和日光直射。
（参见说明）
●
●水：
使用蒸馏水或去离子水
●
13结果解释（InterpretationofResults）：
◆由于LH呈脉冲式分泌，所以从同一个体在同一天内取样获得的检测结果可能在参考范围内有很大波动，这反映的是生理变化，而不是技术或方法学上有错误。
◆
◆由于HCG有交叉反应所以在HCG含量较高标本LH可能会出现假阳性现象。
◆
◆人血清中的嗜异性抗体与试剂盒组分中的免疫蛋白发生反应，从而干扰体外免疫检测。
所以检测结果要与临床检查，病史和其他的检查结合使用。
◆
14临床意义（ClinicalSignificance）:
由于LH和FSH的作用是互相协同的，故两者常同时测定，它们是研究和判断下丘脑—垂体—性腺轴功能的常规检查方法，在预测排卵时间上，LH检查具有特殊重要意义，LH的测定还可以用于不孕症诊断，内分泌治疗监测等。
脑垂体前叶丘脑下部促性腺激素释放激素的控制下分泌促性腺激素即促卵泡激素（FSH）和黄体生成激素（LH），两者均为糖蛋白。
LH和FSH在生育年龄女性随月经周期出现周期性变化。
LH在卵泡早期处于低水平，以后逐渐上升，至排卵前24小时左右与FSH同时出现高峰，而且是较FSH更高的陡峰，24小时后最高值骤降，黄体后期逐渐下降。
排卵期出现的LH陡峰是预测排卵的重要指标。
女性：
LH和FSH协同作用促使卵泡成熟及雌激素合成，继而引起排卵，使卵泡变成黄体，间质生长，合成孕酮。
男性：
能促间质生长，合成雄激素，使间质细胞分泌睾酮，并协同FSH使精子成熟。
FSH、LH在女性月经周期内血清浓度有规律性起落，排卵期出现一高峰，绝经期FSH明显增高，男性无明显周期性变化，50岁后有增高趋势。
测定LH/FSH比值如LH/FSH>3表明LH呈高值，FSH处于低水平，有助于诊断多囊卵巢综合症。
●LH增高见于：
多囊卵巢综合症，卵巢功能衰退，卵巢切除后，真性卵巢发育不全，
Turner综合症，席汉氏综合症，垂体腺瘤术后，子宫内膜异位症。
●LH降低见于：
长期口服避孕药。
★★闭经病理部位的诊断。
1、FSH、LH异常低值或仅LH低，FSH在正常下限—垂体、下丘脑性闭经（提示促性腺功能不足）。
2、FSH、LH异常高值或仅FSH高——卵巢性闭经（提示卵巢功能衰竭）。
★★男性性功能低下鉴别
1、FSH、LH、T低——称低促性腺激素型性功能低下，提示为下丘脑，垂体功能减
低——继发性睾丸功能低下。
2、FSH、LH高，T低——称高促性腺激素型性功能低下——原发性睾丸功能衰竭。
★★儿童性早熟鉴别
1、FSH、LH同时升高——真性性早熟，中枢型。
2、FSH、LH不高——假性性早熟，外周型。
★★预测排卵，确定授精时间，测LH、FSH、E2峰值。
15参考文献（References）：
1）BoscatoLM，StuartMC.Heterophilicantibodies：
aproblemforallimmunoassays.ClinChen1988：
34：
27-33
2）IMMULITE试剂说明书
3）中华医学检验全书
4）IMMULITE2000操作说明书
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