生物化学习题第二章蛋白质化学.docx
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生物化学习题第二章蛋白质化学
第二章
蛋白质化学
一、知识要点
（一）氨基酸的结构
蛋白质是重要的生物大分子，其组成单位是氨基酸。
组成蛋白质的氨基酸有20种，均
为α-氨基酸。
每个氨基酸的α-碳上连接一个羧基，一个氨基，一个氢原子和一个侧链R
基团。
20种氨基酸结构的差别就在于它们的R基团结构的不同。
根据20种氨基酸侧链R基团的极性，可将其分为四大类：
非极性R基氨基酸（8种）；
不带电荷的极性R基氨基酸（7种）；带负电荷的R基氨基酸（2种）；带正电荷的R基氨基
酸（3种）。
（二）氨基酸的性质
氨基酸是两性电解质。
由于氨基酸含有酸性的羧基和碱性的氨基，所以既是酸又是碱，
是两性电解质。
有些氨基酸的侧链还含有可解离的基团，其带电状况取决于它们的pK值。
由于不同氨基酸所带的可解离基团不同，所以等电点不同。
PI的定义。
除甘氨酸外，其它都有不对称碳原子，所以具有D-型和L-型2种构型，具有旋光性，
天然蛋白质中存在的氨基酸都是L-型的。
酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸具有紫外吸收特性，
在280nm处有最大吸收值，大多数蛋白质都具有这些氨基酸，所以蛋白质在280nm处也有
特征吸收，这是紫外吸收法定量测定蛋白质的基础。
氨基酸的α-羧基和α-氨基具有化学反应性，另外，许多氨基酸的侧链还含有羟基、氨
基、羧基等可解离基团，也具有化学反应性。
较重要的化学反应有：
（1）茚三酮反应，除脯
氨酸外，所有的α-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应，生成蓝紫色化合物，脯氨酸与茚三
酮生成黄色化合物。
（2）Sanger反应，α-NH2与2,4-二硝基氟苯作用产生相应的DNB-氨基
酸。
（3）Edman反应，α-NH2与苯异硫氰酸酯作用产生相应的氨基酸的苯氨基硫甲酰衍生
物（PIT-氨基酸）。
Sanger反应和Edmen反应均可用于蛋白质多肽链N端氨基酸的测定。
氨基酸通过肽键相互连接而成的化合物称为肽，由2个氨基酸组成的肽称为二肽，由3
个氨基酸组成的肽称为三肽，少于10个氨基酸肽称为寡肽，由10个以上氨基酸组成的肽称
为多肽。
（三）蛋白质的结构
蛋白质是具有特定构象的大分子，为研究方便，将蛋白质结构分为四个结构水平，包括
一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
一般将二级结构、三级结构和四级结构称为三
维构象或高级结构。
一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序。
肽键是蛋白质中氨基酸之间的主要连接
方式，即由一个氨基酸的α-氨基和另一个氨基酸的α-之间脱去一分子水相互连接。
肽键
具有部分双键的性质，所以整个肽单位是一个刚性的平面结构。
在多肽链的含有游离氨基的
一端称为肽链的氨基端或N端，而另一端含有一个游离羧基的一端称为肽链的羧基端或C
端。
蛋白质的二级结构是指多肽链骨架盘绕折叠所形成的有规律性的结构。
最基本的二级结
构类型有α-螺旋结构和β-折叠结构，此外还有β-转角和自由回转。
右手α-螺旋结构是
在纤维蛋白和球蛋白中发现的最常见的二级结构,每圈螺旋含有3.6个氨基酸残基，螺距为
0.54nm,螺旋中的每个肽键均参与氢键的形成以维持螺旋的稳定。
β-折叠结构也是一种常见
的二级结构，在此结构中，多肽链以较伸展的曲折形式存在，肽链（或肽段）的排列可以有
平行和反平行两种方式。
氨基酸之间的轴心距为0.35nm,相邻肽链之间借助氢键彼此连成片
层结构。
结构域是介于二级结构和三级结构之间的一种结构层次，是指蛋白质亚基结构中明显分
开的紧密球状结构区域。
超二级结构是指蛋白质分子中的多肽链在三维折叠中形成有规则的三级结构聚集体。
蛋白质的三级结构是整个多肽链的三维构象，它是在二级结构的基础上，多肽链进一步
折叠卷曲形成复杂的球状分子结构。
具有三级结构的蛋白质一般都是球蛋白，这类蛋白质的
多肽链在三维空间中沿多个方向进行盘绕折叠，形成十分紧密的近似球形的结构，分子内部
的空间只能容纳少数水分子，几乎所有的极性R基都分布在分子外表面，形成亲水的分子
外壳，而非极性的基团则被埋在分子内部，不与水接触。
蛋白质分子中侧链R基团的相互
作用对稳定球状蛋白质的三级结构起着重要作用。
蛋白质的四级结构指数条具有独立的三级结构的多肽链通过非共价键相互连接而成的
聚合体结构。
在具有四级结构的蛋白质中，每一条具有三级结构的皑链称为亚基或亚单位，
缺少一个亚基或亚基单独存在都不具有活性。
四级结构涉及亚基在整个分子中的空间排布以
及亚基之间的相互关系。
维持蛋白质空间结构的作用力主要是氢键、离子键、疏水作用力和范德华力等非共价键，
又称次级键。
此外，在某些蛋白质中还有二硫键，二硫键在维持蛋白质构象方面也起着重要
作用。
蛋白质的空间结构取决于它的一级结构，多肽链主链上的氨基酸排列顺序包含了形成复
杂的三维结构（即正确的空间结构）所需要的全部信息。
（四）蛋白质结构与功能的关系
不同的蛋白质，由于结构不同而具有不同的生物学功能。
蛋白质的生物学功能是蛋白质
分子的天然构象所具有的性质，功能与结构密切相关。
1．一级结构与功能的关系
蛋白质的一级结构与蛋白质功能有相适应性和统一性，可从以下几个方面说明：
（1）一级结构的变异与分子病
蛋白质中的氨基酸序列与生物功能密切相关，一级结构的变化往往导致蛋白质生物功能
的变化。
如镰刀型细胞贫血症，其病因是血红蛋白基因中的一个核苷酸的突变导致该蛋白分
子中β-链第6位谷氨酸被缬氨酸取代。
这个一级结构上的细微差别使患者的血红蛋白分子
容易发生凝聚，导致红细胞变成镰刀状，容易破裂引起贫血，即血红蛋白的功能发生了变化。
（2）一级结构与生物进化
研究发现，同源蛋白质中有许多位置的氨基酸是相同的，而其它氨基酸差异较大。
如比
较不同生物的细胞色素C的一级结构，发现与人类亲缘关系接近，其氨基酸组成的差异越
小，亲缘关系越远差异越大。
（3）蛋白质的激活作用
在生物体内，有些蛋白质常以前体的形式合成，只有按一定方式裂解除去部分肽链之
后才具有生物活性，如酶原的激活。
2．蛋白质空间结构与功能的关系
蛋白质的空间结构与功能之间有密切相关性，其特定的空间结构是行使生物功能的基
础。
以下两方面均可说明这种相关性。
（1）.核糖核酸酶的变性与复性及其功能的丧失与恢复
核糖核酸酶是由124个氨基酸组成的一条多肽链，含有四对二硫键，空间构象为球状分
子。
将天然核糖核酸酶在8mol/L脲中用β-巯基乙醇处理，则分子内的四对二硫键断裂，分
子变成一条松散的肽链，此时酶活性完全丧失。
但用透析法除去β-巯基乙醇和脲后，此酶
经氧化又自发地折叠成原有的天然构象，同时酶活性又恢复。
（2）血红蛋白的变构现象
血红蛋白是一个四聚体蛋白质，具有氧合功能，可在血液中运输氧。
研究发现，脱氧血
红蛋白与氧的亲和力很低，不易与氧结合。
一旦血红蛋白分子中的一个亚基与O2结合，就
会引起该亚基构象发生改变，并引起其它三个亚基的构象相继发生变化，使它们易于和氧结
合，说明变化后的构象最适合与氧结合。
从以上例子可以看出，只有当蛋白质以特定的适当空间构象存在时才具有生物活性。
（五）蛋白质的重要性质
蛋白质是两性电解质，它的酸碱性质取决于肽链上的可解离的R基团。
不同蛋白质所
含有的氨基酸的种类、数目不同，所以具有不同的等电点。
当蛋白质所处环境的pH大于pI
时，蛋白质分子带负电荷，pH小于pI时，蛋白质带正电荷，pH等于pI时，蛋白质所带净
电荷为零，此时溶解度最小。
蛋白质分子表面带有许多亲水基团，使蛋白质成为亲水的胶体溶液。
蛋白质颗粒周围的
水化膜（水化层）以及非等电状态时蛋白质颗粒所带的同性电荷的互相排斥是使蛋白质胶体
系统稳定的主要因素。
当这些稳定因素被破坏时，蛋白质会产生沉淀。
高浓度中性盐可使蛋
白质分子脱水并中和其所带电荷，从而降低蛋白质的溶解度并沉淀析出，即盐析。
但这种作
用并不引起蛋白质的变性。
这个性质可用于蛋白质的分离。
蛋白质受到某些物理或化学因素作用时，引起生物活性的丧失，溶解度的降低以及其它
性质的改变，这种现象称为蛋白质的变性作用。
变性作用的实质是由于维持蛋白质高级结构
的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体，但未涉及共价键的断裂。
有些变性是可逆的，有
些变性是不可逆的。
当变性条件不剧烈时，变性是可逆的，除去变性因素后，变性蛋白又可
从新回复到原有的天然构象，恢复或部分恢复其原有的生物活性，这种现象称为蛋白质的复
性。
（六）测定蛋白质分子量的方法
1．凝胶过滤法
凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。
由于不同排阻范围的葡聚糖
凝胶有一特定的蛋白质分子量范围，在此范围内，分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。
因此，用几种已知分子量的蛋白质为标准，进行凝胶层析，以每种蛋白质的洗脱体积对它们
的分子量的对数作图，绘制出标准洗脱曲线。
未知蛋白质在同样的条件下进行凝胶层析，根
据其所用的洗脱体积，从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量。
2．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子的大小、分子形状和所带
电荷的多少。
SDS（十二烷基磺酸钠）是一种去污剂，可使蛋白质变性并解离成亚基。
当蛋
白质样品中加入SDS后，SDS与蛋白质分子结合，使蛋白质分子带上大量的强负电荷，并
且使蛋白质分子的形状都变成短棒状，从而消除了蛋白质分子之间原有的带电荷量和分子形
状的差异。
这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小，蛋白质分子在电泳中的相对迁移
率和分子质量的对数成直线关系。
以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率作图，得到
标准曲线，根据所测样品的相对迁移率，从标准曲线上便可查出其分子质量。
3．沉降法（超速离心法）
沉降系数（S）是指单位离心场强度溶质的沉降速度。
S也常用于近似地描述生物大分
子的大小。
蛋白质溶液经高速离心分离时，由于比重关系，蛋白质分子趋于下沉，沉降速度
与蛋白质颗粒大小成正比，应用光学方法观察离心过程中蛋白质颗粒的沉降行为，可判断出
蛋白质的沉降速度。
根据沉降速度可求出沉降系数，将S带入公式，即可计算出蛋白质的
分子质量。
M
RTS
D（1−V）
单位：
g/mol
1S=1x10-13秒
-16（沉降系数）
R:
气体常数8.314J/mol.度；
D:
扩散系数cm2s-1
：
偏微比容（蛋白质为0.74ml.g–1）
:
溶剂密度
二、习
（一）名词解释
1．两性离子（dipolarion）
2．必需氨基酸（essentialaminoacid）
3．等电点（isoelectricpoint,pI）
4．稀有氨基酸（rareaminoacid）
5．非蛋白质氨基酸（nonproteinaminoacid）
6．构型（configuration）
7．蛋白质的一级结构（proteinprimarystructure）
8．构象（conformation）
9．蛋白质的二级结构（proteinsecondarystructure）
10．结构域（domain）
11．蛋白质的三级结构（proteintertiarystructure）
12．氢键（hydrogenbond）
13．蛋白质的四级结构（proteinquaternarystructure）
14．离子键（ionicbond）
15．超二级结构（super-secondarystructure）
16．疏水键（hydrophobicbond）
17．范德华力（vanderWaalsforce）
题
18．盐析（saltingout）
19．盐溶（saltingin）
20．蛋白质的变性（denaturation）
21．蛋白质的复性（renaturation）
22．蛋白质的沉淀作用（precipitation）
23．凝胶电泳（gelelectrophoresis）
24．层析（chromatography）
（二）
填空题
（二）填空题
1．氨；羧基；
2．16；6.25
3．谷氨酸；天冬氨酸；丝氨酸；苏氨酸半胱氨酸
4．苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸；紫外吸收
5．负极
6．组氨酸；半胱氨酸；蛋氨酸
7．α-螺旋结构；β-折叠结构
8．C=O；N=H；氢；0.54nm；3.6；0.15nm；右
9．脯氨酸；羟脯氨酸
10．极性；疏水性
11．蓝紫色；脯氨酸
12．肽键；二硫键；氢键；次级键；氢键；离子键；疏水键；范德华力
13．表面的水化膜；同性电荷
14．谷胱甘肽；巯基；还原剂
15．增加；盐溶；减小；沉淀析出；盐析；蛋白质分离
16．带电荷量；分子大小；分子形状；方向；速率
17．两性离子；最小
18．FDNB法（2,4-二硝基氟苯法）；Edman降解法（苯异硫氢酸酯法）
19．沉降法；凝胶过滤法；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）
20．不动；向正极移动；向负极移动；
21．两性离子；负；
22．3.22
23．氢键；
24．C；a；b
25．16672；66687；
26．50圈；27nm
1．蛋白质多肽链中的肽键是通过一个氨基酸的_羧基____基和另一氨基酸的_氨基____基连接而形成
的。
2．大多数蛋白质中氮的含量较恒定，平均为_16__%，如测得1克样品含氮量为10mg,则蛋白
质含量为____%。
3．在20种氨基酸中，酸性氨基酸有____天冬氨酸_____和___谷氨酸_____2种，具有羟基的氨基酸是___丝氨酸_____
和__苏氨酸_______，能形成二硫键的氨基酸是_____半胱氨酸_____.
4．蛋白质中的___酪氨酸______、___色氨酸________和____苯丙氨酸______3种氨基酸具有紫外吸收特性，因而
色氨酸使蛋白质在280nm处有最大吸收值。
5．精氨酸的pI值为10.76,将其溶于pH7的缓冲液中，并置于电场中，则精氨酸应向电场的
___阴极____方向移动。
6．组成蛋白质的20种氨基酸中，含有咪唑环的氨基酸是___组氨酸_____，含硫的氨基酸有
__半胱氨酸_______和_____甲硫氨酸______。
7．蛋白质的二级结构最基本的有两种类型，它们是_____α螺旋________和_____β折叠_________。
8．α-螺旋结构是由同一肽链的___羰基氧____和
_亚氨基_______间的__氢键_键维持的，螺距为__0.54nm____,每
圈螺旋含__3.6_____个氨基酸残基，每个氨基酸残基沿轴上升高度为_0.15nm________。
天然蛋白
质分子中的α-螺旋大都属于_右手__手螺旋。
9．在蛋白质的α-螺旋结构中，在环状氨基酸__脯氨酸__羟脯氨酸____存在处局部螺旋结构中断。
10．球状蛋白质中有__亲水___侧链的氨基酸残基常位于分子表面而与水结合，而有_疏水______侧链
的氨基酸位于分子的内部。
11．氨基酸与茚三酮发生氧化脱羧脱氨反应生成__紫色____色化合物，而__脯氨酸______与茚三酮反应
生成黄色化合物。
12．维持蛋白质的一级结构的化学键有___肽键____和__二硫键_____；维持二级结构靠___氢键_____键；维
持三级结构和四级结构靠__次级键_______键，其中包括___疏水作用_____、__范德华力______、_离子键_______和
_________.
13．稳定蛋白质胶体的因素是____水化层______________和______电荷层________________。
14．GSH的中文名称是_谷胱甘肽___________，它的活性基团是__________，它的生化功能是
____________________。
15．加入低浓度的中性盐可使蛋白质溶解度_增大_______，这种现象称为___盐溶_____，而加入高浓
度的中性盐，当达到一定的盐饱和度时，可使蛋白质的溶解度_减小_____并___沉淀_______,这种
现象称为___盐溶____,蛋白质的这种性质常用于____蛋白质的提纯_________。
16．用电泳方法分离蛋白质的原理，是在一定的pH条件下，不同蛋白质的__带电荷量______、
__相对分子质量_______和____极性_______不同，因而在电场中移动的__方向_____和__快慢_____不同，从而使蛋
白质得到分离。
17．氨基酸处于等电状态时，主要是以_兼性离子_______形式存在，此时它的溶解度最小。
❀18．鉴定蛋白质多肽链氨基末端常用的方法有__________和_______________。
FDNB法（2,4-二硝基氟苯法）；Edman降解法（苯异硫氢酸酯法）
❀19．测定蛋白质分子量的方法有_________、____________和__________________。
沉降法；凝胶过滤法；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）
20．今有甲、乙、丙三种蛋白质，它们的等电点分别为8.0、4.5和10.0,当在pH8.0缓冲液
中，它们在电场中电泳的情况为：
甲_不移动______，乙__阴极_____，丙____阳极____。
21．当氨基酸溶液的pH=pI时，氨基酸以__兼性离子___离子形式存在，当pH>pI时，氨基酸以_负______
离子形式存在。
22．谷氨酸的pK1（α-COOH）＝2.19,pK2（α-NH+3）=9.67,pKR（R基）=4.25,谷氨酸的等电
点为_3.22_________。
23．天然蛋白质中的α—螺旋结构，其主链上所有的羰基氧与亚氨基氢都参与了链内__氢键___
键的形成，因此构象相当稳定。
24．将分子量分别为a（90000）、b（45000）、c（110000）的三种蛋白质混合溶液进行凝
胶过滤层析，它们被洗脱下来的先后顺序是___cab_________。
25．肌红蛋白的含铁量为0.34%，其最小分子量是___164.7___.血红蛋白的含铁量也是0.34%，但
每分子含有4个铁原子，血红蛋白的分子量是________.16672；66687；
26．一个α-螺旋片段含有180个氨基酸残基，该片段中有__50___圈螺旋？
该α-螺旋片段的
轴长为_27nm____.
（三）选择题C：
5种氨基酸中只有赖氨酸为碱性氨基酸，其等电点为9.74,大于生理pH值，所以带正
电荷。
2．B：
人（或哺乳动物）的必需氨基酸包括赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、缬氨
酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸8种，酪氨酸不是必需氨基酸。
3．A：
酪氨酸和苯丙氨酸在280nm处的克分子消光系数分别为540何120,所以酪氨酸比苯
丙氨酸有较大吸收，而且大多数蛋白质中都含有酪氨酸。
肽键的最大吸收在215nm,半
胱氨酸的硫原子在280nm和215nm均无明显吸收。
4．D：
在此4种氨基酸中，只有赖氨酸的R基团可接受氢质子，作为碱，而其它3种氨基
酸均无可解离的R侧链。
5．B：
氨基酸的α-碳上连接的是亚氨基而不是氨基，所以实际上属于一种亚氨基酸，而其
它氨基酸的α-碳上都连接有氨基，是氨基酸。
6．B：
天然蛋白质的α-螺旋结构的特点是，肽链围绕中心轴旋转形成螺旋结构，而不是充
分伸展的结构。
另外在每个螺旋中含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,每个氨基酸
残基上升高度为0.15nm,所以B不是α-螺旋结构的特点。
7．C：
蛋白质处于等电点时，净电荷为零，失去蛋白质分子表面的同性电荷互相排斥的稳
定因素，此时溶解度最小；加入少量中性盐可增加蛋白质的溶解度，即盐溶现象；因为
蛋白质中含有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸，所以具有紫外吸收特性；变性蛋白质的溶解
度减小而不是增加，因为蛋白质变性后，近似于球状的空间构象被破坏，变成松散的结
构，原来处于分子内部的疏水性氨基酸侧链暴露于分子表面，减小了与水分子的作用，
从而使蛋白质溶解度减小并沉淀。
8．C：
甘氨酸的α-碳原子连接的4个原子和基团中有2个是氢原子，所以不是不对称碳原
子，没有立体异构体，所以不具有旋光性。
9．B：
双缩脲反应是指含有两个或两个以上肽键的化合物（肽及蛋白质）与稀硫酸铜的碱
性溶液反应生成紫色（或青紫色）化合物的反应，产生颜色的深浅与蛋白质的含量成正
比，所以可用于蛋白质的定量测定。
茚三酮反应是氨基酸的游离的α-NH与茚三酮之间
的反应；凯氏定氮法是测定蛋白质消化后产生的氨；紫外吸收法是通过测定蛋白质的紫
外消光值定量测定蛋白质的方法，因为大多数蛋白质都含有酪氨酸，有些还含有色氨酸
或苯丙氨酸，这三种氨基酸具有紫外吸收特性，所以紫外吸收值与蛋白质含量成正比。
10．D：
靡蛋白酶即胰凝乳蛋白酶作用于酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的羧基参与形成的肽键；
羧肽酶是从肽链的羧基端开始水解肽键的外肽酶；氨肽酶是从肽链的氨基端开始水解肽
键的外肽酶；胰蛋白酶可以专一地水解碱性氨基酸的羧基参与形成的肽键。
11．A：
蛋白质的等电点是指蛋白质分子内的正电荷桌能总数与负电荷总数相等时的pH值。
蛋白质盐析的条件是加入足量的中性盐，如果加入少量中性盐不但不会使蛋白质沉淀析
出反而会增加其溶解度，即盐溶。
在等电点时，蛋白质的净电荷为零，分子间的净电斥
力最小，所以溶解度最小，在溶液中易于沉淀，所以通常沉淀蛋白质应调pH至等电点。
12．A：
在蛋白质的空间结构中，通常是疏水性氨基酸的侧链存在于分子的内部，因为疏水
性基团避开水相而聚集在一起，而亲水侧链分布在分子的表面以充分地与水作用；蛋白
质的一级结构是多肽链中氨基酸的排列顺序，此顺序即决定了肽链形成二级结构的类型
以及更高层次的结构；维持蛋白质空间结构的作用力主要是次级键。
13．E：
脯氨酸是亚氨基酸,参与形成肽键后不能再与C=O氧形成氢键，因此不能形成α-螺
旋结构;氨基酸残基的支链大时，空间位阻大，妨碍螺旋结构的形成；连续出现多个酸
性氨基酸或碱性氨基酸时，同性电荷会互相排斥，所以不能形成稳定的螺旋结构。
14．C：
β-折叠结构是一种常见的蛋白质二级结构的类型，分为平行和反平行两种排列方
式，所以题中C项的说法是错误的。
在β-折叠结构中肽链处于曲折的伸展状态，氨基
酸残基之间的轴心距离为0.35nm,相邻肽链（或同一肽链中的几个肽段）之间形成氢键
而使结构稳定。
15．C：
蛋白质二级结构的两种主要类型是α-螺旋结构和β-折叠结构。
在α-螺旋结构中
肽链上的所有氨基酸残基均参与氢键的形成以维持螺旋结构的稳定。
在β-折叠结构中，
相邻肽链或肽段之间形成氢键以维持结构的稳定，所以氢键是维持蛋白质二级结构稳定
的主要作用力。
离子键、疏水键和范德华力在维持蛋白质的三级结构和四级结构中起重
要作用，而二硫键在稳定蛋白质的三级结构中起一定作用。
16．E：
肽键是连接氨基酸的共
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