疫苗原液抗原含量测定方法验证方案资料.docx
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疫苗原液抗原含量测定方法验证方案资料
原液抗原含量测定方法验证方案
吉林亚泰生物药业股份有限公司
2011年X月
方案批准
题目
原液抗原含量测定方法验证方案
起草人部门职务起草日期
审核人部门职务审核日期
批准人部门职务批准日期
目录
1.目的……………………………………………………………………………………………1
2.范围和责任…………………………………………………………………………………1
3.人员确定………………………………………………………………………………………1
4.引用标准……………………………………………………………………………………1
5.材料……………………………………………………………………………………………1
5.1仪器设备……………………………………………………………………………………1
5.2器材、用具…………………………………………………………………………………1
6.风险因素分析…………………………………………………………………………………1
7.内容…………………………………………………………………………………………1
7.1检查法验证简述……………………………………………………………………………1
7.2验证方法……………………………………………………………………………………1
7.3验证步骤……………………………………………………………………………………1
8.偏差……………………………………………………………………………………………1
9.结果评价及建议………………………………………………………………………………1
10.最终批准………………………………………………………………………………………1
11.附录………………………………………………………………………………………1
1.
目的
在检测人用狂犬病疫苗中病毒抗原相对含量之前，需验证在实际检验中所采用的检验方法的专属性、精密度、线性和范围均能达到检验要求，确保试验结果的准确性和可靠性。
2.
范围和责任
2.1.
质量控制部：
负责再验证实施全过程的组织和再验证报告的起草。
2.2.
质量保证部：
分别负责监控验证全过程和记录填写。
3.
人员确定
姓名
部门
验证职务
签名
日期
组长
组员
组员
4.
引用的标准
说明本《抗原含量试验操作SOP》（JYT-SOP03-5-0-001）。
人用狂犬病疫苗中病毒抗原相对含量检测试剂（酶联免疫法）说明书。
5.
材料
5.1.
仪器设备：
微量混匀仪、自动酶标仪、自动洗板机、恒温培养箱
5.2.
器材用具：
微量移液器、1000µl吸头、200µl吸头、离心管
6.
风险因素分析
评估
项目
潜在风险
风险
级别
控制措施
是否需要确认
重复性
试验方法的重复性不能达到试验的要求。
高
按相关法规的要求，通过检验数据表明方法的重复性能达到试验的要求。
是
精密度
检验数据的随机变动因素对试验的影响
中
通过检验数据确认随机变动因素对试验无影响。
是
操作
人员操作不纯熟导致稀释过程中试验样品混淆
高
对相关的操作人员进行严格的操作规程的培训，确保验证过程按文件规定执行。
是
7.
内容
7.1.
检查法验证简述
在检测人用狂犬病疫苗中病毒抗原相对含量之前，需验证在实际检验中所采用的检验方法的专属性、精密度、线性和范围均能达到检验要求，确保试验结果的准确性和可靠性。
7.2.
验证方法：
本验证采用双抗体夹心ELISA，用多株抗狂犬病毒单克隆抗体包被微孔板，与抗狂犬病毒糖蛋白酶标抗体等试剂组成，用于检测狂犬病疫苗中病毒抗原相对含量。
每次试验设空白、阴性对照（样品稀释液）和阳性对照各1孔、做好标记。
阳性对照用0.5ml蒸馏水溶解，并混匀，取100µl加到阳性孔。
将其余板条各孔加样品稀释液，每孔100µl。
将自备的标准品及样品分别加入对应每孔，每孔100µl，平行倍比稀释，轻轻震荡混匀，稀释最后一孔时弃去多余的100µl液体。
将30倍浓缩的洗涤液用蒸馏水稀释至工作浓度，作为洗涤液备用。
弃去板中液体，甩干，用洗涤液加满各孔，再弃去板中液体，甩干；重复洗板共5次。
加入酶结合物（空白孔不加），每孔100µl，用封口膜覆盖包被板，置于37℃温育30分钟。
弃去板中液体，甩干，用洗涤液加满各孔，再弃去板中液体，甩干；重复洗板共5次。
依次加入底物A、B液，每孔50µl，用封口膜覆盖包被板，置于37℃避光显色15分钟。
立即加入终止液，每孔各50µl；置于酶标仪450nm波长处，读取各孔A值。
7.3.
验证步骤
7.3.1.
专属性
7.3.1.1.
目的：
通过检测的试验数据表明其中可能存在的杂质对原液抗原含量试验无干扰。
7.3.1.2.
操作：
取生产中所使用的原液、小牛血清、PBS，人血白蛋白各3批，进行抗原含量检测试验，通过检测的试验数据表明其中可能存在的杂质对原液抗原含量试验无干扰。
7.3.1.3.
可接受标准：
通过检测的试验数据表明其中可能存在的杂质对原液抗原含量试验无干扰。
7.3.1.4.
记录：
见附录1。
7.3.2.
重复性
7.3.2.1.
目的：
通过检验数据表明方法的重复性能达到试验的要求。
7.3.2.2.
操作：
方法重复性的确定至少要取方法范围内样品的4个浓度级别，每个浓度级别至少检测3次。
通过检验数据表明方法的重复性能达到试验的要求。
7.3.2.3.
可接受标准：
通过检验数据表明方法的重复性能达到试验的要求。
7.3.2.4.
记录：
见附录2。
7.3.3.
精密度
7.3.3.1.
目的：
通过检验数据确认随机变动因素对试验的影响。
7.3.3.2.
操作：
在规定的试验条件下，取同一个均匀样品3批，由两个不同的实验人员进行多次检测，通过检验数据确认随机变动因素对试验的影响。
7.3.3.3.
可接受标准：
通过检验数据确认随机变动因素对试验无影响。
7.3.3.4.
记录：
见附录3。
7.3.4.
线性
7.3.4.1.
目的：
通过试验中参考品浓度进行测定，确认其相关系数是否达到试验要求。
7.3.4.2.
操作：
通过试验中参考品浓度进行测定，以参考品的浓度及其对应的吸光度进行线性回归分析，求出回归方程及相关系数。
7.3.4.3.
可接受标准：
通过试验中参考品浓度进行测定，确认其相关系数是否达到试验要求。
7.3.4.4.
记录：
见附录4。
原液抗原含量检验已按照方案所列验证测试清单进行了确认，并对检验结果进行确认结果见附录。
8.
偏差
偏差记录名称及编号
偏差是否已解决或已有解决方案
追踪人
结果分析与评价：
本次原液抗原含量检验方案确认无偏差产生。
评价人：
日期：
负责人：
日期：
QA人员：
日期：
9.
结果评价及建议
评价人：
年月日
验证状态的维持；下次再验证的时间。
10.
最终批准：
最终批准：
年月日
11.
附录
11.1.
附录1：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验专属性检查试验结果
11.2.
附录2：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验重复性检查试验结果
11.3.
附录3：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验精密度检查试验结果
11.4.
附录4：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验曲线方程及相关系数结果
附录1：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验专属性检查试验结果
验证次数
检品名称
一次
二次
三次
四次
五次
人用狂犬病疫苗原液
小牛血清
PBS
人血白蛋白
检验人
复核人
附录2：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验重复性检查试验结果
验证日期
检品批号及浓度
年月日
年月日
年月日
2×
4×
8×
16×
检验人
复核人
附录3：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验精密度检查试验结果
验证日期
检验人及检品批号
年月日
年月日
年月日
复核人
附录4：
人用狂犬病疫苗中病毒抗原含量检验曲线方程及相关系数结果
验证日期
方程及相关系数
年月日
年月日
年月日
曲线方程
相关系数r
检验人
复核人
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