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第七节非发酵菌群

一、概述

所谓非发酵菌群是指一大群不发酵葡萄糖，需氧或兼性厌氧的无芽胞革兰阴性菌。

近年来，由于广谱抗菌药物、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用，导致机体微生态失调和抵抗力下降，非发酵菌引起机会感染或医院内感染日益增多，如败血症、呼吸系统或泌尿系统感染、伤口及皮肤感染、脑膜炎及角膜溃疡等。

由于该群细菌生化反应之间共性少，根据科-属-种的鉴定程序，选用葡萄糖氧化发酵（O/F试验）、氧化酶试验、动力、菌落色素等试验，必要时可做鞭毛染色观察。

氧化-发酵（O/F）试验对非发酵菌群的鉴定非常关键，试验培养基中的蛋白质浓度是2g/L，而不是10g/L，可避免细菌利用蛋白质所产生的胺中和分解糖产生的酸，造成错误判断成不利用糖。

多数非发酵菌广泛存在于自然界，培养和鉴定温度应选与自然界环境温度相适应的30℃为宜，动力检查应培养于18℃~20℃，在此温度下有利于其鞭毛蛋白的合成。

多数非发酵菌氧化酶试验阳性。

非发酵菌的鉴定可选用目前公认质量好的市购成套专用试剂盒如API—20NE等进行编码鉴定，，也可用自动化仪器如Vitek、Biolog、Microscan、Sceptor等鉴定。

非发酵菌群属间生物学特性的主要区别见表6-7-53。

表6-7-53非发酵菌群属间生物学特性的主要区别

试验

菌属

假单胞菌属

黄杆菌属

不动杆

菌属

产碱杆

菌属

丛毛菌属

摩拉菌属

氧化酶试验

+/–

葡萄糖试验O/F

0/-

-/0

0/-

–

动力

+/-

–

菌落色素

不定

橙黄色

无色

淡黄色

无色

鞭毛部位

端毛

周毛

丛毛

–

注：

“+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性；O/-表示氧化葡萄糖/不发酵葡萄糖；-/O表示不氧化葡萄糖/发酵葡萄糖；+/－表示多数菌株（90%以下）阳性，少数菌株阴性；－/+表示多数（90%以下）阴性，少数菌株阳性

二、假单胞菌属

（一）生物学特性

本属细菌为革兰阴性、直或微弯杆菌，较细长、专性需氧，在普通培养基上能生长。

大多数菌种有动力，有鞭毛、无荚膜和芽胞、氧化酶阳性（少数也可阴性）。

铜绿假单胞菌是临床最常见的分离菌，在血平板上35℃培养18h～24h后，形成大而扁平、湿润、有金属光泽、有生姜味的灰绿色或兰绿色的菌落（也可以产生荧光素、红脓素等），大部分形成透明溶血环。

荧光假单胞菌的最适生长温度为25℃~30℃。

部分假单胞菌属在35℃培养时不能生长，室温过夜时，则见到生长的菌落。

铜绿假单胞菌具有O抗原和H抗原。

应用O抗原可对铜绿假单胞菌进行血清分型，目前可分为20个血清型。

（二）微生物学检验

临床常见假单胞菌的生物学特性鉴定见表6-7-54。

铜绿假单胞菌的绿脓素鉴定用氯仿提取液提取色素后，加入1mol/L盐酸呈粉红色，即为绿脓素，为铜绿假单胞菌所特有。

有荧光素的假单胞菌属荧光群只有三个种，可用42℃生长试验、硝酸盐产气、明胶液化以及乙酰胺水解试验鉴别见表6-7-54。

表6-7-54临床常见假单胞菌的主要生物学特性鉴定

菌种

麦芽糖

O/F

葡萄糖

荧

光

素

绿

脓

素

氧

化

酶

硫化氢

精

氨

酸

双

水

解

酶

赖氨酸

鸟

氨

酸

七

叶

苷

明

胶

乙

酰

胺

对多粘菌素敏感

鞭

毛

数

目

铜绿假单胞菌

－/+

－

+/－

－

+/－

≤3

荧光假单胞菌

－/+

－

恶臭假单胞菌

－/+

－

+/－

－

嗜麦芽窄食假单胞菌

－

洋葱假单胞菌

+/－

－

+/－

－

腐败假单胞菌

+/－

－

斯氏假单胞菌

－

产碱假单胞菌

－

食酸假单胞菌

－

－-

－

+/－

睾丸酮假单胞菌

－

+/－

鼻疽假单胞菌

－

+/－

－

注：

+表示90%以上的菌株阳性（或发酵糖）；－表示90%以上的菌株阴性（或不发酵糖）；+/－表示多数菌株（90%以下）阳性（或发酵糖），少数菌株阴性；－/+表示多数（90%以下）阴性（或不发酵糖），少数菌株阳性

表6-7-55荧光群假单胞菌的主要生物学特性鉴别

菌名

42℃生长试验

硝酸盐产气

明胶液化

乙酰胺水解

铜绿假单胞菌

+/–

荧光假单胞菌

–

恶臭假单胞菌

–

–/+

–

注：

+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性；+/－表示多数菌株（90%以下）阳性，少数菌株阴性；－/+表示多数（90%以下）阴性，少数菌株阳性

无绿脓素、荧光素的铜绿假单胞菌，菌落大多为粘液状，与荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的主要生物学特性鉴定见表6-7-55。

嗜麦芽窄食单胞菌前称嗜麦芽假单胞菌，经DNA-rRNA杂交、DNAG+Cmol%，细胞脂肪酸组成等研究后曾归入黄单胞菌属，但由于无黄单胞菌素，近年许多学者建议归入窄食单胞菌属。

本菌为革兰阴性杆菌，一端丛鞭毛，大多在1～3根之间，氧化酶阴性（少数阳性）。

最适生长温度为35℃，临床实验室常将生化反应在25℃～30℃培养后进行鉴定。

血平板培养18h～24h后菌落较小，48h后，开始β-溶血，有草绿色色素扩散在溶血区内,菌落呈“双圈状”或“牛眼状”，并伴有淡黄色色素。

O-F培养基中，由于该菌氧化麦芽糖能力比葡萄糖快而得名。

氧化酶阴性、KIA不发酵葡萄糖、半固体动力呈阳性，则考虑本菌。

与有关菌株的主要生物学特性鉴别如下表6-7-56。

（三）临床意义

假单胞菌属在自然界如水、空气、土壤广泛存在，也存在于人体皮肤和肠道，组成人体的正常菌群。

各种原因导致机体免疫功能下降（如手术、化疗、激素治疗、抗菌药物的治疗、免疫抑制剂使用、以及慢性消耗性疾病），尤其是灼伤病房患者、ICU病房患者、最容易引起铜绿假单胞菌感染。

常见有皮肤、呼吸道、泌尿道和伤口以及菌血症、中耳炎、心内膜炎、角膜溃疡、褥疮等感染；治疗可选氧哌嗪青霉素、妥布霉素、丁胺卡那、环丙沙星、头孢他定、舒普深和亚胺培南等。

嗜麦芽窄食单胞菌在自然界广泛存在，常定植于人呼吸道及粪便中。

该菌为条件致病菌，可引起呼吸道感染、心内膜炎、脑膜炎、泌尿道感染及伤口感染等。

近年来已成为院内感染的重要病原菌。

由于该菌对亚胺培南天然耐药，实验室应注意本菌如出现敏感结果时也应报告为耐药。

近年来临床对亚胺培南的使用增加，故而嗜麦芽分离率仅次于铜绿假单胞菌和不动杆菌。

该菌的耐药程度高，抗菌药物选择难，必须依赖于实验室，常选择抗菌药物为：

头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、复方新诺明等。

表6-7-56嗜麦芽窄食单胞菌与相关菌的主要生物学特性鉴别

菌名

氧化酶

色素

动力

ONPG

DNA酶

七叶苷

赖氨酸

鸟氨酸

洋葱假单孢菌

–/淡黄

–

嗜麦芽窄食假单孢菌

–

淡黄

–

黄杆菌属

橙黄色

–

+/–

–

注：

+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性；+/－表示多数菌株（90%以下）阳性，少数菌株阴性

二、不动杆菌属

（一）生物学特性

不动杆菌属细菌为不发酵糖类、氧化酶阴性、动力阴性及硝酸盐还原试验阴性的革兰阴性球杆菌，单个或成双排列，属奈瑟菌科，涂片分布均匀，革兰染色不易脱色，称之谓“浓染”，易误认为革兰阳性菌，无芽胞及鞭毛。

需氧，在普通培养基上生长良好，最适温度35℃，有些株在42℃可生长。

血平板上培养18h~24h可见圆形、白色、光滑、边缘整齐直经约1.5mm~2.0mm大小的菌落，有时可见β-溶血。

（二）微生物学检验

该属细菌氧化酶、吲哚、硫化氢、甲基红、动力和V－P试验均阴性，葡萄糖不发酵，可利用不同的有机酸。

常见不动杆菌的主要生物学特性见表6-7-57。

表6-7-57常见不动杆菌的主要生物学特性

试验

醋酸钙不动杆菌

鲍曼不动杆菌

溶血不动杆菌

琼氏不动杆菌

约翰逊不动杆菌

洛菲不动杆菌

耐放射线不动杆菌

35℃生长

100

硝酸盐还原试验

10%乳糖

100

明胶液化

葡萄糖氧化

100

绵羊血琼脂溶血

100

反乌头酸盐利用

100

β-丙氨酸利用

100

DL-4氨基丁酸盐利用

100

L-精氨酸利用

100

壬二酸盐利用

100

枸橼酸盐利用

100

戊二酸盐利用

100

L-组胺酸利用

100

DL-乳酸盐利用

100

D-苹果酸盐利用

100

丙二酸盐利用

100

注：

所有数值表示实验菌株的阳性百分率

（三）临床意义

本菌为条件致病菌，广泛存在于空气中以及自然界，近年来临床感染有增加的趋势。

可从尿液、脓汁、分泌物、痰、咽拭子、血液和脑脊液等标本尤其是烧伤病人的烧伤部位分泌物及老年性慢性支气管炎患者呼吸道标本分中离到该菌。

三、产碱杆菌属

（一）生物学特性

革兰阴性短杆菌，有时呈弧形，成对或链状排列。

具有周身鞭毛，多数无荚膜，需氧，营养要求不高，最适生长温度为25℃~35℃，能在普通培养基上生长，除木糖氧化亚种外，均不氧化葡萄糖，血平板上可形成灰色、扁平、边缘菲薄的较大菌落。

在蛋白胨肉汤中产氨、可使pH上升至8.6以上，为本菌的特点。

氧化酶和触酶阳性，石蕊牛乳培养基中和O-F培养基中产碱，脲酶、靛基质、硫化氢、明胶、VP、甲基红反应、苯丙氨酸脱氨酶和精氨酸双水解酶阴性。

（二）微生物学检验

产碱杆菌属为周身有鞭毛，O-F培养基中葡萄糖产酸为木糖氧化亚种，不产酸的为其它产碱杆菌。

产碱杆菌属的主要生物学特性鉴定见表6-7-58。

表6-7-58产碱杆菌属的主要生物学特性

硝酸盐还原

丙二酸盐

葡萄糖酸盐

O/F

木糖

葡萄糖

脱硝产碱杆菌木糖氧化亚种

–

脱硝产碱杆菌脱硝亚种

+/–

–/–

粪产碱杆菌

–

–/–

注：

+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性；+/－表示多数菌株（90%以下）阳性，少数菌株阴性；

O表示O/F培养氧化糖；-/-表示O/F培养均不氧化和发酵糖

（三）临床意义

粪产碱杆菌广泛存在于自然界如水、土壤、人和动物的肠道及皮肤，是人类的正常菌群，也是医院感染重要的条件致病菌。

可从人血液、呼吸道、尿液及脑脊液等标本中分离到。

临床感染标本中脱硝产碱杆菌木糖氧化亚种分离率比粪产碱杆菌高。

四、黄杆菌属

（一）生物学特性

革兰阴性杆菌、无动力、无荚膜和芽胞。

菌落圆形光滑、透明或半透明、亮黄色。

脑膜败血性黄杆菌的菌落大小为1mm~1.5mm，其它为2mm~3mm。

在固体培养基上大多数菌株产生淡黄或橙黄色脂溶性色素，氧化酶、DNA酶和ONPG大多阳性，吲哚阳性或阴性。

营养要求不高，个别菌种培养需要添加辅助生长因子。

在普通营养琼脂和麦康凯平板上生长，血平板上不溶血，最适温度为25~30℃，需氧生长。

（二）微生物学检验

黄杆菌属细菌吲哚试验应培养48h后用二甲苯提取，再加入吲哚试剂。

通常微弱发酵葡萄糖，产酸量少且时间长。

大多数菌水解七叶苷，液化明胶。

主要菌种间的生物学特性见表6-7-59。

表6-7-59黄杆菌属主要菌种的生化特性

试验

脑膜炎败血黄杆菌

短小黄杆菌

芳香黄杆菌

嗜糖黄杆菌

嗜醇黄杆菌

Ｏ/Ｆ

葡萄糖

–

木糖

–

甘露醇

–

蔗糖

–

乳糖

–

麦芽糖

–

尿素酶

–

吲哚

–

明胶液化

–

七叶苷水解

–

注：

+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性

（三）临床意义

本菌属存在于水、土壤、植物中，是引起医院感染的常见菌之一，常引起手术后感染或败血症等。

脑膜败血性黄杆菌可引起新生儿脑膜炎，且死亡率高。

近几年黄杆菌属感染有增加的趋势，对广谱抗菌药物耐药程度高，但对利福平、红霉素、氯林可霉素及复方新诺明等抗菌药物仍较敏感。

五、军团菌属

（一）生物学特性

军团菌于1976年首次在美国费城一次退伍军人集会后的呼吸道感染标本中分离到，故称作军团菌，是一种具有高度爆发性、流行性的呼吸道感染病原菌。

本菌为革兰阴性杆菌，大小为2~3μm×0.3~0.4μm，无芽胞、无荚膜。

革兰染色可见菌体有空泡。

多形性，可出现丝状体，具有极端鞭毛或侧鞭毛，能运动。

苏丹黑、碱性沙黄染色可见菌体内有蓝黑色或蓝灰色脂滴。

氧减少时不生长或生长缓慢，初次分离在含有2.5%~5%CO2环境中生长良好。

最适生长温度为35℃，最适pH为6.9~7.0。

营养要求较为苛刻，且生长缓慢，半胱氨酸和铁为其特殊营养需要。

在活性碳酵母浸膏培养基（CYE琼脂）上经35℃培养4~5天可生长出很小的菌落，数日后可增大至4~5mm,有光泽、灰白色、具粘性。

在Feeley-Garman培养基中培养3~5天可见针尖大小菌落，在紫外线照射下可发出黄色荧光。

（二）微生物学检验

触酶阳性，尿素酶阴性，液化明胶，不分解糖类，硝酸盐还原阴性，部分菌株氧化酶阳性，多数菌株产生β-内酰胺酶。

在普通营养琼脂或血平板上不生长，在含有铁和半胱氨酸的CYE与F-G培养基上才能生长。

军团菌属主要生物学特征见表6-7-60。

表6-7-60军团菌属种间的主要生物学特性鉴别

菌名

CYE琼脂荧光

血平板及普通平板上生长

F-G褐色素

β-内酰胺酶

明胶酶

氧化酶

马尿酸水解

嗜肺军团菌

暗黄

–

米克戴德军团菌

暗黄

–

长滩军团菌

暗黄

+/-

华兹沃思军团菌

暗黄

+/-

约旦军团菌

伯兹曼军团菌

淡兰

+/-

杜莫夫军团菌

淡兰

戈尔曼军团菌

淡兰

阿尼斯军团菌

淡兰

辛辛那提军团菌

注：

+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性；+/－表示多数菌株（90%以下）阳性，少数菌株阴性

（三）临床意义

军团菌可引起军团军病，最主要是由嗜肺军团菌，为一种全身性疾病，可分为轻型和重症型。

轻型类似流感，病人有发热、头痛、无力等症状，称为庞地亚克热（Pontiacfever）。

重症型是以肺部感染为主的多器官损害，发病初起时有胸痛、咳嗽、发热等症状，最终导致呼吸衰竭死亡。

军团菌亦是医院感染的病原菌之一，当患有慢性疾病的住院患者以及各种原因导致机体免疫功能低下的患者更易感染。

六、莫拉菌属

（一）生物学特性

新版伯杰手册按球菌和球杆菌将莫拉菌属分为布兰汉亚属和莫拉亚属，后者为革兰阴性球杆菌，有时可呈多形性，成双或短链状，无芽胞和鞭毛，但有些菌株有荚膜。

需氧，多数菌在普通培养基上能生长，少数菌株需在培养基中加入兔血清才能生长，如缺陷莫拉菌不能在SS平板上生长。

在血平板上生长成光滑的直径为

～0.5mm半透明菌落，48h后菌落直径可达1mm，不溶血。

其特点是氧化酶和触酶阳性，不分解任何糖类，不产生吲哚，在65g/LNacl肉汤中不生长。

（二）微生物学检验

标本接种血平板或含有血清的培养基分离培养。

经24h培养可见针尖大小的菌落，结合染色镜检及生化反应进行鉴定。

莫拉菌属的主要生物学特性见表6-7-61

（三）临床意义

本菌为条件致病菌，引起人类的感染有肺炎、脑脓肿或脑膜炎、心内膜炎、败血症、中耳炎、眼结膜炎等。

表6-7-61莫拉菌属的主要生物学特性

试验

缺陷莫

拉菌

非液化

莫拉菌

犬莫

拉菌

林肯莫

拉菌

奥斯陆

莫拉菌

亚特兰大

莫拉菌

苯丙酮酸

莫拉菌

动力

触酶

生长：

麦康凯培基

42℃

基础培养基醋酸盐

尿素酶

苯丙氨酸脱氨酶

明胶液化

硝酸盐还原

氮气产生

DNA酶

注：

+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性；+/－表示多数菌株（90%以下）阳性，少数菌株阴性；D表示数据分散；/表示无统计资料；V表示不定；d表示迟缓

第八节小细菌

小细菌指的是一些无动力、无芽胞、菌体小的革兰阴性球杆菌，且对营养要求苛刻。

主要有嗜血杆菌属、布鲁菌属、弗朗西斯菌属、鲍特菌属和巴斯德菌。

一、嗜血杆菌属

（一）生物学特性

嗜血杆菌属为一群无动力、无芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，营养要求较高，在培养基中必须加入新鲜血液（含有X和V因子）才能生长因而得名嗜血杆菌。

属内许多流感嗜血杆菌株有荚膜，多见于b血清型，并有较强的毒力。

需氧或兼性厌氧，接种万古霉素巧克力琼脂，初次培养于5%～10%C02环境中生长良好。

可见0.5～1mm小菌落，灰白色、圆形、光滑、半透明。

流感嗜血杆菌荚膜株培养过夜后形成较大、粘稠的菌落，产生V因子的金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌同时培养时可见卫星现象。

一般血平板上生长不良。

（二）微生物学检验

临床标本分离时，凡血琼脂上发育迟缓，经35℃24h培养，菌落仅针尖大小，氧化酶阳性，涂片为革兰阴性卵圆形或点状小杆菌，而普通琼脂不生长，首先考虑嗜血杆菌属。

共性为需X或V因子，兼性厌氧或CO2有促进生长作用。

葡萄糖为发酵型，硝酸盐还原试验阳性，无血液培养中不生长。

根据溶血和X、V因子等主要生物学特性的鉴别见表6-7-62。

根据吲哚、尿素酶及鸟氨酸脱羧酶试验不同将流感嗜血杆菌分为8个生物型。

见表6-7-63。

（三）临床意义

流感嗜血杆菌为上呼吸道的正常菌群，有荚膜的b型株很少，可引起人急性咽炎、喉炎、气管炎、肺炎、中耳炎、脑膜炎、心包炎以及骨髓炎等。

有荚膜的流感嗜血杆菌可引起全身性感染。

无荚膜的菌株引起局部的上呼吸道邻近部位感染。

副流感嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、溶血性嗜血杆菌和副溶血性嗜血杆菌栖居人的上呼吸道，可引起呼吸道感染，心内膜炎、菌血症、败血症和脑脓肿等。

副嗜沫嗜血杆菌，可引起亚急性心内膜炎，也可从尿液及脓液中分离到本菌。

杜克嗜血杆菌，可引起软性下疳，有时与淋病奈瑟菌同时感染。

表6-7-62嗜血杆菌属主要生物学特性

菌名

CO2

生长因子

需

生

长

溶血性

氧化酶

触酶

吲哚

尿素

水解

脱羧酶

硝酸盐还原

糖发酵试验

荚

膜

X因子

V因子

鸟氨酸

精氨酸

赖氨酸

葡萄糖

乳糖

木糖

甘露醇

蔗糖

果糖

山梨醇

流感嗜血杆菌

+/-

副流感嗜血杆菌

+/-

溶血嗜血杆菌

副溶血嗜血杆菌

嗜泡沫嗜血杆菌

副嗜泡沫嗜血杆菌

杜克氏嗜血杆菌

埃及嗜血杆菌

注：

+表示90%以上的菌株阳性；－表示90%以上的菌株阴性；+/－

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