食品微生物检验技术实验指导.docx

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食品微生物检验技术实验指导

食品微生物检验技术实验指导

实验一培养基的配制及器材的灭菌

 一、目的要求

   1、学习并熟练培养基的制备的方法、步骤和技术。

   2、学习和掌握高压蒸汽灭菌的具体操作方法和技术。

   3、为下一次实验做好实验前的准备。

二、实验原理

    培养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，它是进行科学研究，生产微生物制品及应用等方面的基础。

由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多，要根据培养目的和检测需要不同，选择配制不同的培养基。

    从培养基的用途来区分，培养基可分为选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基等。

    选择培养基在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。

如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长；而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长；结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。

   增殖培养基在自然界中，不同种的微生物常生活在一起，为了分离我们所需要的微生物，在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基，这种培养基常用于菌种筛选和选择增菌中。

在某种程度上讲，增殖培养基也是一种选择培养基。

   鉴别培养基在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。

这样的培养基称之为鉴别培养基。

例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。

有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。

例如食品检验中常用的麦康凯培养基是一例。

它含有胆盐、乳糖和中性红。

胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用（选择性），乳糖和中性红（指示剂）能帮助区别乳糖发酵肠道菌（如大肠杆菌）和不能发酵乳糖的肠道致病菌（如沙门氏菌和志贺氏菌）。

   灭菌原理：

高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。

待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。

导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。

一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。

干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。

因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。

但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。

三、试剂和仪器

   1、药品及试剂：

   牛肉膏、蛋白胨、 琼脂、 MgSO4·7H2O FeSO4、NaCl等

   2、仪器

   天平、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱

   3、玻璃器材及其它

   试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、药匙、玻璃漏斗、pH试纸（5.5-9.0）、棉花、牛皮纸、记号笔、棉线、纱布、吸管（1ml）、培养皿、玻璃珠。

四、方法步骤

（一）、配制培养基

配制培养基的制备与分装步骤

   1、称量 除琼脂外，按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入适当大小的烧杯中。

蛋白胨极易吸水，称量时动作要快。

补足所需水分，混匀后加入琼脂。

  2、加热溶解 向烧杯内加入所需水量的一部分，放到电炉上加热，同时不断进行搅拌，使其溶解，最后补足所需水分。

加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。

  3、调pH值 用精密pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。

  4、加入琼脂融化 向溶液中加入所需的碎琼脂，在电炉上一面加热一面搅拌，直到琼脂完全融化后才能停止搅拌，并加入热水补足水分。

   5、过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。

用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。

没有悬浮物的不用过滤。

   6、分装将培养基趁热加至漏斗上进行分装。

如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中，装试管时，装量不要超过试管的1/4；如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于三角瓶或锥形瓶内，一般以其容积的1/2为宜。

注意管口不要沾上培养基。

在漏斗下口处套有一段透明胶管，胶管下部用弹簧夹夹紧。

分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。

分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。

   7、加塞、包扎、标记加上塞子，然后在外面用一层牛皮纸包扎。

试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。

   分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。

堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。

棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。

棉塞做成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。

棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。

棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。

塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆扎，准备灭菌。

（二）、培养基及器材的灭菌

   杀菌操作流程：

   检查杀菌锅各部件是否正常→加水→装锅→加盖密封→通电加热→排空气（大量蒸汽排出时，维持5min）→升温→恒温杀菌→断电降温→开盖→取出物品

   培养基、无菌水等，放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。

   1、含糖培养基：

115℃灭菌10min或113℃灭菌15min

   2、无糖培养基：

121℃灭菌15～20min

    玻璃器皿：

干热灭菌，放入烘箱加热灭菌：

160～165℃灭菌2h；或湿热灭菌：

121℃灭菌20～30min。

五、思考题      

   1、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？

如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？

   2、加压蒸汽灭菌的原理是什么？

是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？

为什么？

   3、干热灭菌应该注意哪些事项？

   4、管口、瓶口为什么要用棉塞？

能否用木塞或棉皮塞代替？

为什么？

实验二酱油中菌落总数的测定

一、目的要求

   1、了解细菌总数检验的意义。

   2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法

   3、掌握国际法测定菌落总数的方法和技能

二、实验原理

菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。

菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

三、实验仪器与材料

恒温箱、水浴锅、天平、可调式电炉、试管、吸管、三角平等

营养琼脂、生理盐水、样品（酱油、乳粉）

四、实验程序与步骤

（一）、基本操作过程：

   样品称量→样品稀释→倾注平皿→培养24小时→计数报告。

（二）、样品的稀释（样品的处理）

样品：

酱油

 外包装消毒→无菌称样品25g→加无菌生理盐水→加盖振荡摇均匀

    1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。

以无菌操作吸取检样25ml，放入含有225ml灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量玻璃珠），经充分振摇做成1:

10的稀释液。

若为固体检样，在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：

10的均匀稀释液。

    2、用1ml灭菌吸管，吸取1∶10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1∶100稀释液。

    3、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管。

    4、根据对检样污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的稀释液1ml于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。

    5、用1ml生理盐水作空白对照试验，做2个平皿。

     注意：

   ①吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部，也不得触及管内稀释液。

    ②吸管插入检样液内取样稀释时，插入深度要达2.5cm以上,调整时应使管尖与容器内壁紧贴。

   ③进行稀释时，应使吸管内的液体沿管壁小心流加入，以免增加检液。

   ④每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。

（三）、倒平板

   稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃的营养琼脂培养基（放置于46℃水浴保温）倾注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。

    注意：

   ①培养基不能触及平皿口边沿，加入培养基后可正反两个方向旋转，但不可用力过度，以免溅起触及上盖。

   ②检样从开始稀释到倾注最后一个平皿，所用时间不宜超过20min。

（四）、培养

   待琼脂凝固后，翻转平皿，置36±1℃温箱内培养24h后取出，立即计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。

      注意：

（1） 琼脂凝固后，就立即将平板放入培养箱内进行培养，以免细菌蔓延生长。

（2） 如果把不能立即计数，要将平板放入0～4℃冰箱中，但不能超过24h。

    不同产品菌落总数测定的培养时间：

    肉、乳、蛋及制品：

                   37℃培养48h

   水产品：

                             30℃培养48h：

   清凉饮料、调味品、糕点、果脯、酒类等：

37℃培养24h

五、思考题 

 1、食品检验为什么要测定细菌菌落总数？

   2、食品中检出的菌落总数是否代表该食品上的所有细菌数？

为什么？

   3、为什么营养琼脂培养基在使用前要保持地（46±1）℃的温度？

4、培养时为什么要把培养皿倒置培养？

实验三鲜肉中大肠菌群的测定   

一、目的要求

   1、了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义。

   2、学习并掌握大肠菌群检验的原理和方法。

二、实验原理

    大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

一般认为该菌群细菌可包括：

大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。

它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。

    食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number-简称MPN）表示。

三、实验仪器与材料

显微镜、恒温箱、水浴锅、天平、可调式电炉、试管、吸管、三角平等；乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵管、革兰氏染色液、生理盐水、鲜肉等

四、方法与步骤

程序：

样品处理及初发酵接种→EMB平板分离→乳糖发酵（证实试验）接种、镜检、靛基质试验→观察乳糖发酵结果

（一）样品处理及初发酵接种：

1、样品处理与稀释（无菌操作）

  样品：

鲜肉

（1）先将鲜肉进行表面消毒处理，即沸水内烫3-5秒或烧灼消毒。

再用无菌剪刀剪取深层肌肉25克，放于含有225ml灭菌生理盐水的玻璃瓶内（内置玻璃珠），经摇床以8000-10000r/min的转速处理1min做成1:

10的均匀稀释液。

（2） 取一支1ml灭菌吸管吸取1:

10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管使其充分混合均匀，做成1:

100的稀释液

（3）按上法进行操作依次做成10倍递增稀释液。

2、乳糖初发酵试验（无菌操作）

根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管。

（1）用1ml移液管吸取稀释液1ml分别注入单料乳糖胆盐发酵管中，每个稀释度接种3支，共接种9支。

（2）放入培养箱培养：

   将接种后的乳糖胆盐发酵管置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产酸产气者（培养液由紫蓝色变成黄色并有气泡），则按下列程序进行试验。

（二）EMB平板分离

   将产气的发酵管分别转种在EMB琼脂平板上（一管对一个平板），置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并挑取可疑菌落做：

革兰氏染色和证实试验。

   在EMB平板上的典型菌落：

呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。

由于药物影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。

（三）乳糖复发酵（证实试验）接种、镜检、靛基质试验

1、乳糖发酵接种

　　从EMB平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。

2、进行镜检

   从EMB平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色。

大肠菌群菌：

革兰氏染色阴性无芽胞短杆菌。

3、进行靛基质试验

   向培养后的蛋白胨水中沿管壁加入靛基质试剂（欧—波试剂）0.5mL，静置片刻，观察液面。

阳性反应者，液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。

则证实为粪大肠菌群阳性。

（四）观察乳糖发酵结果及器材的消毒和清洗

1、观察乳糖发酵结果

   观察：

乳糖发酵管内是否有气体产生

   凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。

2、查表报告结果

　　根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）大肠菌群的MPN值。

根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）粪大肠菌群的MPN值。

五、思考题      

   1、大肠菌群检验中为什么首先要用乳糖胆盐发酵管？

   2、为什么大肠菌群的检验要经过复发酵才能证实？

   3、复发酵时为什么使用乳糖发酵管但不需要加胆盐？

4、所有发酵管均为阴性反应时，检验结果可否报告为“零”？

实验四鲜蛋蛋液中志贺氏菌及其检验

一、目的要求

1、了解志贺氏菌生物学特性及原理

2、掌握志贺氏菌检验方法

二、实验原理

志贺氏菌属（Shigella）的细菌是细菌性痢疾的病原菌，通称痢疾杆菌。

临床上能引起痢疾症状的病原生物很多，有志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫、以及病毒等均可引起人类痢疾，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见。

人类对痢疾杆菌有很高的易感性。

在幼儿可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。

所以在食物和饮用水的卫生检验时，常以是否含有志贺氏作为指标。

志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3μm,宽0.5-0.7μm。

不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，不运动，有菌毛。

志贺氏菌属的主要鉴别特征为：

无鞭毛，不运动，对各种糖的利用能力较差，并且在含糖的培养基内一般不产生气体。

志贺氏菌的进一步分群分型有赖于血清学试验。

三、实验仪器与材料

1、恒温箱、水浴锅、天平、可调式电炉、试管、吸管、三角瓶

2、GN增菌液、EMB培养基、SS琼脂、三糖铁斜面、葡萄糖半固体培养蛋白胨水、5%乳糖发酵管、甘露醇发酵管、棉子糖发酵管、甘油发酵管、兔血浆、多价血清和26种因子血清

四、操作步骤

1、样品处理

无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化。

2、增菌培养

放于36℃培养6～8h。

培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。

3、接种选择性平板及培养

取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和EMB（伊红美蓝）琼脂平板各1个。

放于36℃培养18～24h。

结果：

志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落

4、接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基

从SS、EMB琼脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。

一般应多挑几个菌落，以防遗漏。

经36℃培养18～24h，分别观察结果。

结果：

乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力

可以弃去的培养物：

（1）在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；

（2）在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；

（3）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；

（4）产气的培养物；

（5）有动力的培养物；

（6）产生硫化氢的培养物。

5、血清学分型和进一步的生化试验

凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。

血清学分型鉴定：

从三糖铁琼脂上挑取培养物，做玻片凝集试验。

（1）先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；

（2）如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。

（3）如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。

福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。

可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

　　第4步、4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。

如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。

进一步的生化试验

已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做5%乳糖发酵、甘露醇、棉子糖、甘油的发酵、靛基质试验。

（1）接种生化培养基

从三糖铁琼脂上挑取培养物上,拌种到：

5%乳糖、甘露醇、棉子糖、甘油、靛基质培养基中

（2）观察试验结果

志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。

但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。

志贺氏菌属四个群的生化特性

生化群

5%乳糖发酵

甘露醇

棉子糖

甘油

靛基质

A群：

痢疾志贺氏菌

－

－

－

（＋）

－／＋

B群：

福氏志贺氏菌

－

＋

＋

－

（＋）

C群：

鲍氏志贺氏菌

－

＋

－

（＋）

－／＋

D群：

宋内氏志贺氏菌

+/（+）

＋

＋

d

－

注：

＋阳性；－阴性；－／＋多数阴性,小数阳性;；（＋）迟缓发酵；d有不同生化型

结果报告：

综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告

五、思考题

1、志贺氏菌在三糖铁培养基上的反应结果如何？

解释这些现象？

2、志贺氏菌检验有哪5个基本步骤？

实验五午餐牛肉罐头中金黄葡萄球菌的检验

一、目的要求：

了解金黄葡萄球菌的生物学特性

掌握金黄葡萄球菌检验原理和检验方法

二、实验原理：

金黄葡萄球菌耐盐性强，在100-150g/L氯化钠培养基中能生长，适宜生长的盐浓度为5-7.5%，可以利用这个特性对金黄葡萄球菌增菌，抑制杂菌。

金黄葡萄球菌可产生溶血素，在血平板上生长，菌落周围有透明的溶血环；可产生卵磷脂酶，分解卵磷脂产生甘油脂和可溶性磷酸胆碱，所以在baird-parker（含卵黄和亚碲酸钾）平板上生长，菌落为黑色，周围有一浑浊带,在其外层有一透明圈，利用此特性可分离金黄葡萄球菌；金黄葡萄球还可产生凝固酶，酶可使血浆中的可溶性纤维蛋白原变成不溶解的纤维蛋白，使血浆凝固，这是鉴定致病性金黄葡萄球菌的重要指标，是否是致病的金黄葡萄球菌主要看它是否产生凝固酶。

三、实验试剂及器材：

1、培养基与试剂：

胰酪胨大豆肉汤；75个/L氯化钠肉汤；血琼脂平板；baird-parker平板；肉浸液肉汤；灭菌盐水；兔血浆

2、器具及其他用品

显微镜；恒温箱；离心机；灭菌吸管；灭菌试管；均质器；载玻片；L型涂棒；酒精灯；接种环等

四、实验内容

1、检样处理与增菌培养

称取25g固体样品；吸取25mL液体样品，加入225mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。

　　吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨豆肉汤50mL培养基内，置36±1℃温箱培养24h。

在肉汤中呈混浊生长，在胰酪陈大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长

2、平板分离

用接种环将增菌液划线接种于血平板和baird-parker平板，（36±1）℃培养24h，

结果：

血平板：

菌落成金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有透明溶血圈（β型）

Baird－Parker平板：

圆形、光滑凸起、湿润、直径为2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。

用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度。

3、革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验

挑取金黄色葡萄球菌可疑菌落进行革兰氏染色。

结果：

为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5-1μm

如发现葡萄球菌,再做血浆凝固E试验

吸取1∶4新鲜兔血浆0.5mL，放入于8mm×100mm试管内，再加入培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡摇匀，放36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。

同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照

4、结果报告

（1）初步报告：

根据血平板培养计数和镜检，如发现有G+葡萄串状球菌存在，且有溶血性，则初步报告为：

“有金黄色葡萄球菌存在，1g样品约含多少。

”

（2）结果报告：

根据培养特性、镜检、生化试验、动物试验结果，可报告为：

“是否是致病性葡萄球菌”.

五、思考题

1、金黄色葡萄球菌在B-P平板上的菌落特征如何，说明其原理。

2、金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征如何，说明其原理。

3、确认葡萄球菌为金黄色葡萄球菌的依据至少应包括哪几个试验？

4、金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？

实验六霉菌和酵母菌的检验   

（9课时） 

一、目的要求

   1、掌握测定霉菌和酵母菌的方法和技能

   2、熟练无菌操作技术。

二、实验原理

　霉菌和酵母可造成食品腐败变质。

有些霉菌的有毒代谢产物能引起急性和慢性中毒，特别是有些霉菌毒素具有强烈的致癌性。

一次大量食入或长期少量食入，均能诱发癌症。

目前已知的产毒霉菌如青霉、曲霉和镰刀菌在自然界中分布较广，对食品的侵染机会较多。

因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。

目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。

我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。

三、实验仪器与材料

恒温箱、水浴锅、天平、可调式电炉、试管、吸管、三角平等

高盐察氏培养基生理盐水、样品（酱油、乳粉）

四、方法步骤

（一）基本操作过程：

   样品称量→样品的稀释→倾注平皿→培养5天→→计数报告。

（二）样品的稀释（样品的处