一步一步教你读流式图凋亡和坏死的区别.docx
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一步一步教你读流式图凋亡和坏死的区别
一步一步教你读流式图:
凋亡和坏死的区别
2008-08-0500:
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流式图调亡坏死区别
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下图为坏死图。
坏死的位于G0/G1峰前的峰形为从左至右的反抛物线形。
如下:
而APOptosis则是一个较为对称的峰。
如下:
.
而有时凋亡和坏死同时存在。
如下图:
蓝色的为apo峰(第一个三角),而白色的为坏死峰。
第二个三角为G0/G1峰。
第三个为异倍体G0/G1峰。
实际上,很多时候我们诱导的凋亡峰不像上图那样明显,如下:
原因要从实验的原理开始,到细胞状态,实验步骤,试剂效能等,一一分析。
例如,某因素诱导的凋亡需要较长时间,而我们培养时间还没到,就有可能不出凋亡峰;或是在早期凋亡是用PI染色做SUB-G1,凋亡率会不高,而用API法则更好地测出其凋亡率。
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famsking
一步一步教你读流式图:
凋亡诱导
2008-08-0500:
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流式图教程调亡诱导
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先发一张关于PI染色的uv诱导凋亡的图片,这是con:
这是诱导凋亡的流式图,我们称之为sampl:
那么怎么看这两张图呢?
首先,我们要知道各个参数的意义。
这在流式原理中有介绍。
然后,我们要知道各个图之间的联系。
大家看一下下面的图。
R1主要代表粘连细胞
R2主要代表G2/M期细胞
R3主要代表G0/G1期细胞
R4主要代表s期细胞
R5主要代表凋亡细胞
“主要”是因为大家可以看到设的gate后各个gate中的细胞有位置重叠。
FL2-W/FL2-A和FL2-A/COUNT之间的关系。
这两张图的最大区别在于G0/G1期前面的亚G1峰。
这个峰就是FL2-W/FL2-A图上的左下方的“小尾巴”,小尾巴越大,SUB-G1峰就越高。
也就是说凋亡的越多。
当然这需要跟整张图比较,就是选取mark后测量其gate%。
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famsking
一步一步教你读流式图:
表型CD4CD8
2008-08-0500:
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表型CD4CD8流式图教程
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大鼠外周血T细胞CD亚群CD4/CD8比值所做的流式分析图
右上角的图片是CD4和CD8的双荧光检测。
右下象限是CD8单阳性,左上是CD4单阳,右上为二者双阳,左下为双阴。
比例如图。
剩下的二图为CD4、CD8直方图。
实际上用刚才的双标也可以看出比例来。
R1为淋巴细胞群体,是您的目的细胞群体,针对这一群细胞进行分析!
一步一步教你读流式图:
sub-G1凋亡图
2008-08-0500:
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流式图sub-G1凋亡图教程
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凋亡都比较多,但遗憾的是与G1峰分得不是很开,因此,Modfit分析的时候,会根据结果用统计学原理将它们分为Apo和G1,但这样可能掩盖真正的结果!
建议做PI染色的时候,在PBS洗两次后,加入PCbuffer,这是一种轻破膜剂,可以使断裂成小片断的DNA出细胞而降低其在FL2-Ad上的值,这样就容易区分G1和APO了。
凋亡诱导,左边为对照,右边为凋亡组
对照很好,cv值不错,凋亡率控制得也不错!
凋亡非常明显,而且峰也很漂亮。
唯一的美中不足就是凋亡峰的位移稍低,如能用PCbuffer轻破膜,效果将更漂亮!
请查阅cnki中关于Sub-G1法测凋亡的关于PCbuffer的使用方法(作者:
龚建平关键字:
Sub-G1查),将对实验有很大帮助!
细胞周期分析,modifit,不知凋亡细胞为什么没和G1期分开?
右图为对照,左图实验组
作者用的是muticycle,所以不太能确定。
但是不管是哪家的软件,都是按一定的数学模型(公式)结合数据进行模拟,所以在数据分布不够典型的时候是会产生很大误差的。
就像你的结果,我根据经验判断是modfit强行进行subG1计算,其实算进去的基本上都不是凋亡细胞,但是它没有模糊概念,生硬地套用了subG1的模拟方程,所以才有“subG1”的出现。
如果你对sample只进行onecycle模拟,结果会不一样的。
建议,除非subG1和G1分隔干净利落,否则不要随便应用cycle软件进行模拟,否则大部分结果是错误的,cycle软件本质上说适合作周期分析,作AP分析有较为严格的限制。
直接拉水平门就可以了。