6.通常用紫外分光光度法测定蛋白质的含量,这是因为蛋白质分子中_酪氨酸_,__丙氨酸_,_色氨酸三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。
7.半胱氨酸的-SH可以形成_二硫键_键,其功能稳定蛋白质的三级结构和空间构象__。
三、名词解释
1.必须氨基酸
2.等电点
3.肽键
四、问答题
1.简述水溶性蛋白质的构象特点。
水溶性蛋白质的整体结构通常为球形,疏水性氨基酸侧链主要聚集于球状构象的内部,亲水性氨基酸侧链主要位于球状构象的表面,球状构象内部也可以聚集可电离侧链,整体的能量需要尽可能的低,其构象才属于稳定构象
2.八肽氨基酸组成为Asp,Ser,Gly,Ala,Met,Phe,Lys2.
(1)DNFB与之反应再酸水解,得DNP-Ala。
(2)胰凝乳蛋白酶消化后分出一个四肽,其组分为Asp,Gly,Lys和Met,此四肽与DNFB反应生成DNP-Gly。
(3)胰蛋白酶消化八肽后,得到组成为Lys,Ala,Ser及Phe,Lys,Gly的两个三肽及一个二肽,此二肽被CNBr处理游离出Asp。
请写出八肽的顺序及推理过程
由
(1)知即N-Ala①(2分)
由
(2)知Phe-Gly-*-*-*(*为Asp,Lys和Met)②(2分,判断出四肽的N端是Gly给1分,判断出四肽的N相邻的氨基酸是Phe给1分)这个四肽其实就是八肽的C端4肽
(胰凝乳蛋白酶的消化位点为C-termofPhe,Trp,Tyr)
由(3)知
Lys,Ala,Ser③并且顺序是N-Ala-Ser-Lys⑥(1分)
Phe,Lys,Gly④并且顺序是Phe-Gly-Lys⑦(1分)
Met-Asp⑤(1分)并且顺序是Met-Asp⑧(1分)
(胰蛋白酶的消化位点为C-terminalsideofLys,Arg)
(溴化氰CNBr断裂由Met残基的羧基参加形成的肽键).
②⑦⑧可知Phe-Gly-Lys-Met-Asp⑨(1分)
⑥⑨可知N-Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys-Met-Asp(1分)
蛋白质的结构与功能
练习题
一、选择题
1.下列氨基酸残基中最不利于形成a螺旋结构的是(C )
A.亮氨酸 B.丙氨酸
C.脯氨酸 D.谷氨酸
2.关于α螺旋的叙述错误的是(C)
A.分子内的氢键使α螺旋稳定
B.减弱R基团间不利的相互作用使α螺旋稳定
C.疏水作用力使α螺旋稳定
D.在某些蛋白质中,α螺旋是二级结构中的一种类型
E.脯氨酸和甘氨酸残基使α螺旋中断
3.血红蛋白的氧合曲线(A)
A.双曲线B抛物线CS曲线D直线E钟罩型
4.每分子血红蛋白所含铁离子数(D)
A.1B.2C.3D.4E.6
5.可用于蛋白质多肽链N未端氨基酸分析的方法有(AC)
A.二硝基氟苯法B.肼解法
C.丹磺酰氯法D.茚三酮法
6.对一个富含His残基的蛋白质,在离子交换层析时,应优先考虑严格控制的是(B)
A.盐浓度B.洗脱液的pH
C.NaCl的梯度D.蛋白质样品上柱时的浓度
7.有关变性蛋白质的描述错误的是(C)
A.变性蛋白质的空间结构被显著改变
B.强酸碱可以使蛋白质变性
C.变性蛋白质的一级结构被破坏
D.变性蛋白质的溶解度下降
8.SDS凝胶电泳测定蛋白质分子量是根据各种蛋白质的(B)
A.一定pH条件下所带电荷B.分子大小
C.分子极性
D.溶解度
9.将抗体固定在层析柱的载体,使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来,这技术属于D
A.吸附层析B.离子交换层析C.分配层析D.亲和层析E.凝胶过滤
10.根据蛋白质分的配基专一性进行层析分离的方法有(C)
A.凝胶过滤B.离子交换层析
C.亲和层析D.薄层层析
11.关天凝胶过滤技术的叙述正确的是(AC)
A.分子量大的分子最先洗脱下来B.分子量小的分子最先洗脱下来
C.可用于蛋白质分子量的测定D.主要根据蛋白质带电荷的多少而达到分离的目的
二、填空题
1.血红蛋白(Hb)与氧结合的过程呈现_协同_效应,是通过Hb的_变构_现象实现的,它的辅基是_血红素_。
由组织产生的CO2扩散至红细胞,从而影响Hb和O2的亲和力,这称为_波尔_效应。
2.维持蛋白质构象的化学键有_二硫键,肽键,氢键,离子键,疏水键,范德华力_。
3.Pauling等人提出的蛋白质α螺旋模型,每圈螺旋包含_3.6__个氨基酸残基,高度为_0.54nm__。
每个氨基酸残基沿轴上升_0.15nm_,并延轴旋转_100_度。
4.蛋白质的二级结构有α螺旋结构,β折叠,β转角,无规则卷曲_
5.常用打开二硫键的方法是使用_过量β-巯基乙醇_试剂,使其还原为-SH,为了使反应能顺利进行,通常加入一些变性剂,如_尿素_或_盐酸胍_,而为了避免-SH被重新氧化,可加入_碘乙酸_试剂,使其生成羧甲基衍生物。
6.稳定蛋白质胶体性质的因素有_双电层_和_水化膜_。
7.SDS-PAGE是用_丙烯酰胺_为单体,以_N,N-亚甲基双丙烯酰胺_为交连剂,聚合而成的网状凝胶。
8.蛋白质与印三酮反应生成_蓝紫色_颜色化合物,而蛋白质和多肽分子中的肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热,呈现_红紫色,此反应称为_双缩脲_反应。
三、名词解释
1.α-螺旋
2.β-折叠
3.亚基
4.四级结构
5.超二级结构
6.别构效应
7.协同效应
8.分子伴侣
9.蛋白质变性和复性
10.亲和层析
四、问答题
1.氨基酸序列、立体(空间)结构、生物功能之间有怎样的关系?
氨基酸和环境条件共同决定蛋白质的构象,而构象又决定蛋白质的功能,所以基因决定氨基酸的序列和所处的环境共同决定蛋白质的功能
2.在蛋白质变性的过程中,有哪些现象出现?
并举三种能引起蛋白质变性的理化因素。
①生物活性丧失②导致某些理化性质的改变③生物化学性质改变
物理因素:
高压,X射线,高温,超声波,紫外线
化学因素:
强酸,强碱,尿素,胍盐
3.简述蛋白质分离纯化的主要方法?
(1)根据分子大小不同的分离方法:
凝胶过滤层析
(2)利用蛋白质的酸碱性质:
离子交换纤维素层析
(3)利用蛋白质与特定化学基团专一结合:
亲和层析
3.SDS-PAGE凝胶电泳测蛋白质分子量的原理?
SDS是一种阴离子去污剂,可使蛋白质变性并解离成亚基,当蛋白质样品中加入SDS后,SDS与蛋白质分子结合,是蛋白质带上大量的负电荷,这些电荷量远远超过蛋白质原来所带的电荷量,因此掩盖了不同蛋白质之间的电荷差异。
聚丙烯酰胺是一种网状结构凝胶,具有分子筛效应,这样在消除了蛋白质间原有的电荷和形状差以后,电泳速度只取决于蛋白质的相对分子质量大小
4.从结构和功能上谈谈血红蛋白与肌红蛋白的区别?
①肌红蛋白一条肽链,血红蛋白4条,分别为2条α两条β
②肌红蛋白含有75%α螺旋含有一个血红素的辅基,辅基通过组氨酸连接在肌红蛋白上;血红蛋白每个亚基含一个血红素,共有4个血红素辅基
③肌红蛋白氧合曲线是双曲线,血红蛋白是S型
④肌红蛋白与氧气结合无协同性,而血红蛋白有
⑤血红蛋白与氧气有叠构效应,CO2与质子升高,S曲线右移,亲和性降低,不受二磷酸甘油酸调节
⑥肌红蛋白在肌肉中运氧气,血红蛋白在血液中
第二章核酸的结构与功能
练习题
一、选择题
A型题
1.在核酸中,核苷酸之间的连接键是(C)
A.糖苷键B.氢键C.3′,5′-磷酸二酯键
D.1′,3′-磷酸二酯键E.2′,5′-磷酸二酯键
2.下列核酸中含有稀有核酸的是(C)
A.rRNAB.mRNAC.tRNA
D.hnRNAE.线粒体DNA
3.下列DNA分子中,哪一种的Tm值最低(B)
A.A+T含量占15%B.G+C含量占15%C.G+C含量占40%
D.A+T含量占70%E.A+T含量占60%
4.关于tRNA的结构,下列哪个是不正确的(D)
A.是小分子量的RNA,只含一条74-95个核苷本残基多核苷酸链
B.分子中除含有A、U、C和G而外,还含有稀有碱基
C.分子中某些部位的碱基相互配对,形成局部的双螺旋
D.5′端末的三个核苷残基的碱基依次为CCA,该端有一个羟基
E.反密码环的中央三个核苷酸的碱基组成反密码子
5.核酸的最大紫外光吸收值一般在(B)
A.280nmB.260nmC.240nmD.200nmE.220nm
6.下列有关核酶的叙述正确的是(B)
A.它是有蛋白质和RNA构成的B.它是核酸分子,但具有酶的功能
C.它是有蛋白质和DNA构成的D.位于细胞核内的酶
E.它是专门水解核酸的蛋白质
7.下列关于DNA与RNA彻底水解后产物的描述正确的是(D)
A.戊糖不同,碱基不同B.戊糖相同,碱基不同
C.戊糖不同,碱基相同D.戊糖不同,部分碱基不同E.戊糖相同,碱基相同
8.关于DNA的二级结构,叙述错误的是(A)
A.A和T之间形成三个氢键,G和C之间形成两个氢键
B.碱基位于双螺旋结构内侧C.碱基对之间存在范德华力
D.两条键的走向相反E.双螺旋结构表面有一条大沟和小沟
9.关于mRNA的正确描述是(B)
A.大多数真核生物的mRNA在5′末端是多聚腺苷酸结构
B.大多数真核生物的mRNA在5′末端是7-甲基鸟嘌呤结构
C.只有原核生物的mRNA在3′末端有多聚腺苷酸结构
D.只有原核生物的mRNA在5′末端是7-甲基鸟嘌呤结构
E.所有生物的mRNA分子中都含有稀有碱基
10.下列关于DNA受热变性的描述正确的是(E)
A.A260nm下降B.碱基对可形成共价键连接
C.粘度增加D.多核甘酸链裂解成寡核甘酸链
E.加入互补RNA键,再缓慢冷却,可形成DNA:
RNA杂交分子
11.核小体的核心蛋白质的组成(C)
A.非组蛋白B.H2A、H2B、H3、H4各一分子
C.H2A、H2B、H3、H4各二分子
D.H2A、H2B、H3、H4各四分子
E.H1组蛋白与140-145碱基对DNA
12.如果双键DNA的原胸腺嘧啶含量为碱基总含量的20%,则鸟嘌呤含量应为(C)
A.10%B.20%C.30%D.40%E.50%
13.合成DNA需要的原料是(C)
A.ATP、CTP、GTP、TTPB.ATP、CTP、GTP、UTP
C.dATP、dCTP、dGTP、dTTPD.dATP、dCTP、dGTP、dUTP
E.dAMP、dCMP、dGMP、dTMP
14.正确解释核酸具有紫外吸收能力的是(A)
A.嘌呤和嘧啶环中有共轭双键B.嘌呤和嘧啶连接了核糖
C.嘌呤和嘧啶中含有氮原子D.嘌呤和嘧啶含有硫原子
E.嘌呤和嘧啶连接了磷酸基团
15.如果mRNA中的一个密码为5′CAG3′,那么与其相对应的tRNA反密码子是(B)
A.GUCB.CUGC.GTCD.CTGE.以上都不是
16.自然界DNA以螺旋结构存在的主要方式(B)
A.A-DNAB.B-DNAC.GTC
D.E-DNAE.Z-DNA
17.DNA的解链温度是指(B)
A.A260nm达到最大值时的温度B.A260nm达到最大值的50%时的温度
C.DNA开始解链时所需的温度D.DNA完全解链时所需的温度
18.有关核酸的变性与复性的说法正确的是(D)
A.热变性的DNA迅速降温的过程称为退火
B.热变性的DNA迅速冷却后即可再结合为双链
C.所有DNA分子变性后,在合适的温度下都可以复性
D.热变性后相同的DNA经缓慢降温冷却后可以复性
E.复性的最佳温度时640C
19.将RNA变性转移到硝酸纤维素膜上,进行分子杂交的技术是(B)
A.Southern杂交BNorthern杂交C。
Eastern杂交D.Western杂交
B型题
A.三叶草结构B.倒L形C.双螺旋结构
D.a-螺旋E.反密码环
1.tRNA的三级结构是(B)
2.DNA的二级结构是(C)
3.tRNA的二级结构是(A)
A.rRNAB.mRNAC.tRNA
D.hnRNAE.SnRNA
4.成熟mRNA的前体(D)
5.参与转运氨基酸(C)
6.蛋白质合成的模板(B)
7.核糖体的组成成分(A)
8.参与RNA的剪接、转运(E)
二、填空题
1.核酸的基本结构单位_核苷酸_。
2.DNA的双螺旋中只存在_4__种不同碱基,T总是与_A_配对,C总是与_G_配对。
3.核酸的主要组成是_戊糖_,_磷酸_和_含氮碱基_。
4.两类核酸在细胞中的分类不同,DNA主要位于_细胞核_中,RNA主要位于_细胞质中。
5.在典型的DNA双螺旋结构中,由磷酸戊糖构成的主链位于双螺旋的_外侧_,碱基位于双螺旋的_内侧_。
6、tRNA均具有_三叶草型_二级结构和_倒L型_三级结构。
7、成熟的mRNA的结构特点是:
5`-帽子结构_,_3`末端的polyA尾巴_。
8、DNA的基本功能是_遗传信息的复制_和_转录的模板_。
9、Tm值与DNA的_分子大小_和所含碱基中的_CG含量_成正比。
10、DNA双螺旋结构稳定的维系横向靠_氢键_维系,纵向则靠_碱基堆积力_维持。
11、脱氧核苷酸或核苷酸连接时总是由_核苷_与_磷酸_形成3′,5′-磷酸二酯键。
12、嘌呤和嘧啶环中均含有_共轭双键_,因此对_260mm紫外光_有较强吸收。
13、碱基__和核糖或脱氧核糖通过__糖苷键__连接形成核苷。
14.自然界中大多数双螺旋DNA的螺旋方向为_右手螺旋_,Z-DNA的螺旋方向为_左手螺旋_,
三、名词解释
1.核酸以核苷酸为基本结构单元,按照一定的顺序以3’,5’-磷酸二酯键连接,并通过折叠、卷曲形成具有特定生物学功能的多聚核苷酸链。
2、增色效应:
DNA变性后对260nm紫外光的吸光度明显增加的现象。
3减色效应DNA发生复性后,OD260降低,称为减色效应。
4、核小体染色质或染色体最基本结构和功能的亚单位,由200个左右的核苷酸所组成的DNA分子产缠绕在由组蛋白组成的八聚体表面,所形成的一种念珠状结构。
5、退火:
变性DNA在复性过程中必须缓慢冷却,称为退火。
6、分子杂交两条来源不同的单链核酸。
只要他们有大致相同的互补碱基顺序,经退火才处理即可复性,形成新的杂合双螺旋,称之分子杂交。
7、Tm值加热变性使DNA的双螺旋失去一半时,即p紫外吸收达到最大吸收值一半时的温度称为DNA的熔解温度。
8.DNA变性双螺旋DNA在某些理化因素作用下,其两条互补链松散而分开成为单链,从而导致核酸的理化性质和生物学性质发生变化,称为DNA变性。
四、问答题
1、简述RNA和DNA主要区别。
①碱基不同:
DNA由ATCG构成,RNA由AUCG构成
②戊糖不同:
DNA是脱氧核糖,RNA是核糖
③单双链不同:
DNA是两条反相平行的聚核苷酸链形成螺旋结构,RNA以单链为主
2、简述双螺旋结构模型的要点及其生物学意义。
①DNA分子由两条相互平行但走向相反的脱氧多核苷酸链组成,两链以-脱氧核糖-磷酸-为骨架,以右手螺旋方式绕同一中心轴相互盘绕
②碱基垂直螺旋轴居双螺旋内側,与对側碱基形成氢键配对(互补配对形式:
A=T;GC)③氢键维持双链横向稳定性,碱基堆积力维持双链纵向稳定性。
生物学意义:
对于DNA复制和RNA转录过程具有关键作用。
3、细胞内有哪几种主要的RNA?
其主要的功能是什么?
①信使RNA蛋白质合成模板②转运RNA转运氨基酸③核糖体RNA:
核糖体组分
④HnRNA:
成熟mRNA前体⑤SnRNA:
参与HnRNA剪接转运⑥SnORNA:
rRNA加工
酶(Enzyme)
练习题
一、填空题
1.全酶由_酶蛋白_和_辅助因子_组成,在催化反应时,二者所起的作用不同,其中酶蛋白_决定酶的专一性和高效率,_辅助因子_起传递电子,原子或化学基团的作用。
2.辅助因子包括_金属离子_,辅基_和_辅酶_等。
其中_辅基_与酶蛋白结合紧密,需要_化学试剂_除