显微摄影不同于一般摄影，其最大的区别是影象反差小，焦深浅。
这两点可随孔径光阑缩小而提高。
孔径光阑小于物镜的数值孔径时，物象的分辨力和亮度降低，但影象反差和焦点深度提高，便影象更加清晰。
所以，在不过多地降低分辨力的前提下，把孔径光阑调到所用物镜数值孔径的60－70％大小是比较合适的。
例如，物镜的数值孔径为1.0，孔径光阑的数值调到0.6－0.7，所以，显微摄影时，缩小孔径光阑，尽管丧失少许的分辨力，却提高了影象反差、焦点深度和影象的清晰度。
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孔径光阑的调节方法：
当聚光器标有孔径的数字时，对准所需的值即妥，如果不具孔径光阑数值，在显微镜向标本聚焦后，从镜筒中取下目镜，在物镜的后透镜中可见孔径光阑影象。
光阑缩小时，仅一见一亮点，逐渐开大光阑，亮孔扩大，直至需要的程度。
当光阑缩小，视野亮度降低时，可适当提高电压增加照明强度。
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（2）视野光阑的调节：
视野光阑位于镜座之中，用以控制照明光束的直径，缩小视野光阑，光束直径小于孔径光阑，视野亮度不足，影象不清晰；视野光阑开大，光束直径超出孔径光阑，因光线过多，造成光线的乱反射，影响影象的清晰度。
视野光阑的适宜大小，以光阑的边缘外切孔径或孔径光阑内接视野光阑为度（图3-13）。
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总之，孔径光阑的调节，取决于所用物镜数值孔径。
当两者相等，分辨力最高；孔径光阑小于物镜的数值孔径，影象反差和焦点深度增大。
视野光阑随孔径光阑而变，总是外切孔径光阑。
更换物镜，数值孔径改变，孔径光阑重新调整，视野光阑亦随之改变。
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四、选用适宜的感光胶片b!
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感光胶片类别多，性能相差甚大，不是每种胶片都适于显微摄影。
了解胶片的各种性能试拍后择优选用。
一经选定，不要轻易改换，以保持拍摄质量的稳定。
胶片的性能是胶片中直接决定和影拍摄质量的因素，如感色性，感光度和反差系数等，要从这些质量因素中选用适宜的胶片。
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1、感色性 是指胶片对不同色光的敏感程度，这是胶片最主要的性能。
根据感色性，可把黑白胶片分为色盲片、分色片和全色片等不同的片种。
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色盲片：
乳剂中除卤化银外未加入化学增感剂，只能感受可见光谱中的蓝紫两色，对其他各种色光不感受。
感色范围为330nm-480nm的波长区（图3-14）。
为一种低速感光片，银粒细，反差大，解象力高。
适于黑白、蓝紫等色光影象的显微摄影，不能用以拍摄红、绿和黄等色的影象。
胶片对这些色光不感受，在照片上呈黑灰一片，不能分辨。
所以，用醋酸洋红和孚尔根反应的染色体标本，不能使用色盲片摄影，铁矾苏木精制片的标本可以使用色盲片。
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分色片：
感光乳剂中加入了黄绿增感色素，除感受蓝紫色外，对黄绿二色也能感受，对红橙色光仍不能感受，感受范围为波长300μm－600μm区段（图3-15乙），除红橙色标本外，可广泛用于显微摄影，是一理想的显微摄影胶片，它不仅反差强，颗料细，并能记录出较多的亮度等级和较宽的感受范围。
用醋酸洋红染色和孚尔根反应的标本，仍不能使用分色片拍摄。
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全色片：
乳剂中添加了公演增感色素，对可见光谱的各波段色光能全部感受，故称全色片，感色范围为330-700μm（图3-15丙），共中对绿色光感应稍弱。
胶片的银粒粗、感光速度快、反差小、黑白等级多。
这些特点，会使显微摄影本来影象反差就小，黑白对比不鲜明的缺点更加突出。
照片中的染色体不黑，背景不白，呈灰暗状态，使用感光底低（ASA50以下）的全色胶片，可获良好的效果。
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2、感光度 指胶片对光线作用的敏感程度，即感光速度。
显微摄影对胶片的感光速度没有特写的要求，选用胶片时，考虑的不是速度本身，而是与感光速度相关的质量因素，凡属感光度高的胶片，乳剂的银粒粗、反差小、灰雾大、保存性差；感光速度低的胶片、银粒细、反差大、灰雾小，保存性好。
所以，显微摄影力求使用低感光度的胶片，以便获得反差高、银粒细腻、清晰度高的摄影效果。
目前，市场供应的GB21°（ASA50）全色胶片，不是理想的显微摄影用胶片，感光度在ASA100以下适于显微摄影。
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3、反差和反差系数 反差是指被摄物体景象中明亮部分与阴暗部分亮度差别的程度。
胶片的反差，用反差系数表示。
它是指胶片影象反差与被摄物体影象反差的比值。
即：
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若胶片上影象反差大于物体影象反差，则胶片的反差系数大于1；胶片影象反差小于物体影象反差时，胶片的反差系数小于1。
同一视野的相同影象，用不同反差系数的胶片拍摄，能拍出不同反差效果的底片。
反差系数愈大，底片的影象反差愈强，黑白对比愈分明；反差系数愈小，底片反差愈弱，色调灰暗，影象黑白对比不鲜明。
显微摄影选用高反差系数，对控制影象的质量是十分重要的。
应作为选用胶片的重要质量指标。
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除上所述，胶片的有效期限、乳剂号、胶片牌号和制造厂家，也是选用胶片时，加以考虑的因素。
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五、滤色镜的选用x70+*a@
滤色镜是显微摄影必备的光学滤光元件，利用滤色镜对色光选择吸收的原理，通过控制色光，突出或抑制影象在胶片上的感应，以期获得理想的照相底片。
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黑白胶片的显微摄影，是把视野中的彩色影象，以黑白两色及其不同程度的灰色中间层次，将影象录在负片上。
利用滤色镜控制照明光束的不同色光，调整影色的色调和反差，可拍出各种不同效果的底片，甚至拍出在反差和清晰度上优于原物体影象的底片。
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一束白光，色散后形成红、橙、黄、绿、青、蓝和紫七种单色光。
这段可见光谱的波长为400-700μm，为实际应用的方便，通常将该七种色光概括为红、绿和蓝三段。
白光就是由这三种色光等量混合组成。
而红、绿和蓝色光的不等量混合，会形成各种不同的色光。
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在摄影中，通常把红色光、绿色光和蓝色光称作三原色光。
把蓝光与黄光、绿光与品红光、红光与青光称作三对互补色光，这三对互补色光分别相加皆可得到白光、黄、品红和青三色，就称为红，绿和蓝三原色的补色。
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滤色镜对各种色光有选择吸收的特性，凡与滤色镜颜色相同的色光则能透过，而与滤色镜颜色互补的色光则被吸收。
例如，绿滤色镜，在白光下把光谱中的蓝色光区段和红色光区段全部吸收，只让绿色光段的色光透过，滤色镜显示绿色。
黄滤色镜吸收蓝色光，透过红光和绿色光。
红滤色镜，把光谱中由绿到红段的光波全部吸收，只让红色的一段光透射。
蓝滤色镜吸收了由红到绿段的色光，仅让红色的一段光透射，蓝色滤色镜吸收了由红到绿段的色光，仅使蓝色光通过（图3－15）。
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在显微镜的光路上，加用滤色镜，从白光中减去与滤色镜颜色互补的色光，使改变的色光透射物体，造成影象色调和反差的改变。
显微摄影利用滤色镜提高影象的反差和清晰度，以获得理想的底片，被摄物体反射出来的色光，如果被滤色镜透过，在黑白底片上产生相应的密度，印放出照片，这部分影调，比较明亮，假若该色光被滤色镜吸收，底片上的密度就薄，制出的照片影调就暗。
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为提高影象反差，选用滤色镜的原则：
选用与被摄物体吸收的色光同一颜色的滤色镜，即选用被摄物体的补色滤色镜，则可达到理想的最佳影象对比。
因为视野中的物体影象的色调和反差，可被补色的滤色镜加强，而被同色的滤色镜所削弱。
举例说明如下：
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染色体用铁矾苏木精染色，呈蓝色，这种蓝色染色体，吸收红光和绿光，透过蓝光。
摄影时加用蓝色的补色──黄色滤色镜，可把照明光线中的蓝色光吸收，通过的是黄色光，滤色镜透射的色光，恰好是染色体吸收的色光，致使透射在染色体上的黄色光全被吸收，不再作用在底片上。
染色体在冲洗后的底片上呈白色，其他部分为黑色。
印放照片，将是深黑色的染色体，散在光亮的白色背景上，影象清晰，黑白分明。
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