消毒灭菌效果与环境卫生学监测.docx

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消毒灭菌效果与环境卫生学监测

合格标准

一、环境卫生学

包括各类环境空气、物体表面、医护人员手

1、细菌菌落总数卫生标准

环境

类别

范围

标准

物体医护

空气表面人员手

Cfu／m3cfu／cm2、cfu／cm2

Ｉ类

Ⅱ类

Ⅲ类

Ⅳ类

层流洁净手术室、层流洁净病房

普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房、输血科、血透室、介入中心

儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间

传染病科及病房

≤10≤5≤5

≤200≤5≤5

≤500≤10≤10

－≤15≤15

2．致病性微生物及结果判断：

（一）空气

Ⅰ类区域：

细菌总数≤10cfu／m3（或0.2cfu/平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为小弟合格；

Ⅱ类区域：

细菌总数≤200cfu／m3（4cfu／平板），未检出金黄色葡萄球菌、溶血性练球为小弟合格；

Ⅲ类区域：

细菌总数≤500cfu／m3（或10cfu／平板），未检出金黄色葡萄球为消毒合格。

（二）物体表面

Ⅰ、Ⅱ类区域：

细菌总数≤5cfu／cm2,并未检出致病菌为消毒合格；

Ⅲ类区域细菌：

细菌总数≤10cfum2,并未检出致病菌为消毒合格；

Ⅳ类区域细菌：

细菌总数≤15cfucm2,并未检出致病菌为消毒合格；

母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门菌。

（三）手：

Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：

细菌总数≤5cfu／cm2,并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌为合格；

Ⅲ类区域工作人员：

细菌总数≤15cfu／cm2,并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为合格；

Ⅳ类区域工作人员：

细菌总数≤15cfu／cm2,并未检出金黄社葡萄球菌、大肠杆菌为合格；

母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房得工作人员手上，不得检出沙门

大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为合格。

二、医疗用品

1、进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品：

必须无菌。

灭菌物品不得检出任何微生物。

2、接触皮肤、粘膜的医疗用品：

必须消毒。

细菌菌落总数应≤20cfu／g或100cm2,消毒物品不得检出致病性微生物。

三、使用中消毒剂和无菌器械保持液

1、使用中消毒剂：

细菌菌落总数≤100cfu／ml;致病性微生物不得检出。

2无菌器械保持液：

必须无菌。

四、紫外线灯管辐照强度

1、普通30W直管型紫外线灯：

新灯辐照强度应≥90μW／cm2;使用中的紫外线辐照强度应≥70μW／cm2;

2、30W高强度紫外线：

新灯的辐照强度≥180μw/cm2为合格。

3、生物监测标准：

经消毒后的物品空气中的自然菌应减少90.00%以上，人工染菌杀灭率应达到99.90%.

五、内镜

1、灭菌后的内镜（如腹腔镜、关节镜、胆道镜、膀胱镜、脑室镜、胸腔镜）：

不得检出任何微生物。

2、消毒后的内镜（如喉镜、气管镜、支气管镜、胃镜、肠镜、乙状结肠就、直肠镜）：

细菌总数≤20cfu／件，不得检出致病菌。

六、血液净化系统

1、透析器入口液：

细菌菌落总数必须≤200cfu／ml；

2、透析器出口液：

细菌菌落总数必须≤2000cfu／ml,并不得检出致病微生物。

七、医院感染病例

1、医院感染发病率＜10%。

2、医院感染漏报率＜10%。

3、无菌手术切口感染率＜0.5%。

4、出现医院感染散发病例：

经治医师应及时向本科室感染监控小组负责人报告，查找感染原因，采取有效控制措施，并于24小时内报告医院感染管理科。

5、医疗机构经调查证实发生5例以上医院感染暴发；或由于医院感染暴发直接导致患者死亡；或由于医院感染暴发导致3人以上人身伤害后果时，应当于12小时内向所在地的县地方人民政府卫生行政部门报告，并同时向所在地疾病预防控制机构报告。

八、污物处理

按照《医疗卫生机构医疗废物管理办法》进行处理。

监测时间

一、使用中消毒剂、灭菌剂

1、生物监测：

消毒剂每季度一次；灭菌剂每月一次。

2、化学监测：

含氯消毒剂、过氧乙酸等易挥发产品每日监测；戊二醛监测每周不少于一次。

二、消毒物品、灭菌物品

1、消毒物品：

每季度一次。

2、灭菌物品：

每月一次。

三、压力蒸汽灭菌

1、工艺监测：

每锅进行，并详细记录。

2、化学监测：

每包进行，手术包还需进行中心部位的化学监测。

3、生物监测：

每月进行，对新灭菌器使用前或拟采用新包装容器、摆放方式、排气方式及特殊灭菌工艺，都必须进行生物监测，合格后才能采用。

4、B–D试验：

预真空压力蒸汽灭菌器每天灭菌前进行。

四、环氧乙烷气体灭菌

1、工艺监测：

每锅进行。

2、化学监测：

每包进行。

3、生物监测：

每月进行。

五、紫外线消毒

1、日常监测：

包括灯管应用时间、累计照射时间和使用人签名。

2、强度监测：

每半年一次。

3、生物监测：

必要时进行。

六、内镜

1、消毒后内镜：

每季度进行。

2、灭菌后内镜：

每月进行。

七、血液净化系统

1、对入、出透析器的透析液：

每月进行。

2、疑有透析液污染胡有严重感染病例时：

应及时进行监测，并增加采样点，如原水口、软化水出口、反渗水出口、透析液配液口等。

3、检查结果超标：

必须复查。

八、空气、物体表面、医护人员手

1、重点部门：

每月进行。

如手术室、种种监护病房／室（ICU）、产房、母婴室、新生儿病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供应室无菌区、治疗室、、换药室等。

2、有医院感染流行，怀疑与医院环境卫生学因素有关时：

应及时进行监测。

采样及检查方法

一、采样及检查原则

采样后必须尽快对样品进行相应指标的监测，送检时间不得超过6h，若采样保存于0-4℃条件时，送检时间不得超过24h.

二、空气采样检查方法

1、采样时间：

在消毒后与医疗活动前之间采样。

2、采样高度：

与地面垂直高度1.5m,距墙1m.。

3、布点方法：

室内面积≤30m2,设内、中、外对角线3点，即中心一点，内、外点布点部位距墙壁1m处；

室内面积＞30m2,设4角及中央5点，4角的布点部位距墙1m.

4、采样方法：

平板暴露法

将9cm直径普通营养琼脂平板放在室内各采样点，高度距地面1.5m,采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5min后盖好立即送检。

将送检的平板置37℃温箱培养48h，计算菌落数，并分离致病菌。

5、结果计算

空气细菌菌落总数（cfum3）

=

三、物体表面采样及检查方法

1、采样时间：

消毒处理后4h内进行采样。

2、采样面积：

被采表面＜100cm2,取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2.

3、采样方法：

用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的试子1支，在规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉试子，连续采样1-4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉试子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管中立即送检。

门把手等小型不规则物体表面用棉试子直接涂擦采样。

4、结果计算：

物体表面细菌菌落总数（cfu/cm2）=

小型物体表面的结果计算，用cuf／件表示。

四、医护人员手采样机检查方法

1、采样时间：

在接触病人、从事医疗活动前进行采样。

2、采样面积及方法：

被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支，在双手指曲面从指根到指端回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm2）,并随之转动采样棉试子，剪去手接触部分，将棉试子放入装有10ml采样液的试管内送检。

3、结果计算：

手细菌菌落总数（cfu/cm2）=

五、医疗用品采样及检查方法

1、采样时间：

在灭菌处理后，存放有效期内采样。

2、无菌检验：

是指检查经灭菌的敷料、缝线、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适合于无菌间的其它物品。

注意：

无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染；对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净度验证。

3、采样量及采样方法：

可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器、注射针等可直接送细菌室采样。

（1）即用无菌方法将拟检缝合针、针头、手术刀片等小件医疗器械各5件直接浸入6管需–厌氧培养管（其中一管作阳性对照）与4管霉菌培养管。

培养管用量为15ml∕管。

（2）对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉试子在被检物体表面涂擦采样。

手术钳、镊子等大件医疗器械取2件，用沾有无菌洗脱液的棉试子反复涂擦采样，将棉试子投入5ml无菌洗脱液中，将采样液混匀，接种于需–厌氧培养管（共6管，其中一管作阳性对照）与霉菌培养管（共4管）。

接种量为1ml／管，培养管用量为15ml／管。

4、培养：

在待检样品的需厌培养管中，接种预先准备的金黄色葡萄菌阳性对照管液1:

1000稀释1ml,将需–厌氧培养管以及阳性与阴性对照管均匀于30～35℃培养5天，霉菌培养管与阴性对照管于20～25℃培养7天，培养期间逐日检查是否有菌生长，如加入供试品后培养基出现混浊或沉淀，经培养后不能从外观上判断时，可取培养夜转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上，培养48h～72h后，观察是否再现混浊或在斜面上有无菌落生长，并在转种的同时，取培养液少量，涂片染色，用显微镜观察是否有菌生长。

5、判断结果：

阳性对照在24hn内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生长，如需–厌氧菌及霉菌培养管内均匀为澄清或虽混浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格；

如需–厌氧菌及霉菌培养管中任何1管显混浊并证实有菌生长，应重新取样，分别同法复试2次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。

6、注意事项：

送检时间不得超过6h,若样品保存于0～4℃，则不得超过24h。

被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。

若消毒因子为化学消毒剂时，采样液中应加入相应中和剂。

六、使用中消毒剂与无菌器械保存液

1、采样时间：

更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。

2、采样量及方法：

在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混匀。

稀释液中需根据不同种类消毒剂加入相应中和剂，以中和被检样液的残作用。

◆唇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；

◆含氯、含碘、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠；

◆洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W／V）吐温80和0.3%卵磷脂；

◆醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；

◆含表面活性剂各种复方消毒剂，需在肉汤中加入3%（W／V）吐温80.

3、结果判断：

平板上有细菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以上，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌），若每个平板菌落实数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，即不能再用。

七、紫外线消毒效果监测

1、检测方法：

开启紫外线灯5min后，将紫外线强度指示卡或紫外线辐照计探头置于距灯管下垂直距离1m处，照射1min.

2、结果判断：

普通30W直管型紫外线灯，新灯辐照强度≥90uW／cm2为合格；使用中的紫外线辐照强度≥70uW／cm2为合格。

八、内镜消毒灭菌效果的监测

1、采样时间：

在消毒灭菌后、使用前进行采样

2、采样方法：

监测采样部位为内镜的内腔面。

用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检。

3、菌落计数：

将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml,加入只有2只直径90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45－48℃营养琼脂15ml－18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于35℃培养48h后计数。

4、判断结果：

菌落数／镜=2个平皿菌落数平均值×20。

5、致病菌监测：

将送检液用旋涡器充分震荡，取0.2ml分别接种90mm血平皿、中国兰平皿和SS平皿，均匀涂布，35℃培养48h,观察有无致病菌生长。

九、压力蒸汽灭菌效果监测方法

1、化学监测法

①化学指示卡（管）：

放入每一个待灭菌的物品包中央。

②化学指示胶带监测法：

将其粘贴于每一个待灭菌物品包外。

③结果判断：

所放置的指示卡（管）的性状或颜色均变至规定的条件，即灭菌合格。

2、生物监测法

①指示菌株：

为嗜热脂肪杆菌芽孢（ATCC7953H或SSIK31株）。

②检测方法：

将两个嗜热脂肪杆菌芽孢菌片分别装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。

预真空灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准测试包（由16条全棉手术巾，每条41cm×66cm,将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层然后叠放，做成23cm×23cm×15cm大小的测试包）；

下排气灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包（由3件平纹长袖手术衣、4快小手术巾、2快中手术巾、1快大手术巾，30快10cm×10cm8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小）。

手提压力蒸汽灭菌器用通气储物盒（22cm×13cm×6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将储物盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。

经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包的指示菌片，头入溴甲酚紫蛋白胨水培养基中，经56℃培养7天（自含式生物指示剂按说明书执行），观察培养基颜色变化。

检测时必须设阴性对照和阳性对照。

③结果判断：

每个指示菌片接种的溴甲酚脂蛋白胨水培养基都不变色，判定为灭菌合格；

指示菌片之一接种的溴甲酚脂蛋白胨水培养基，由紫色变为黄色时，则灭菌不合格。

3、B–D试验：

预真空压力蒸汽灭菌器每天灭菌前进行

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