酶免项目标准操作程序.docx
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酶免项目标准操作程序
SOP_13-4酶免项目标准操作程序
一、目的：
统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：
免疫学检验项目。
三、操作人员：
检验科授权工作人员
四、项目内容：
乙肝两对半检测
甲胎蛋白AFP检测
癌胚抗原CEA检测
丙型肝炎病毒抗体Anti—HCV检测
爱滋病抗体Anti—HIV检测
乙肝表面抗原（HBsAg）
【原理】
本试剂盒在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体
（HbsAb—HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中的乙肝表面抗原（HBsAg）。
【方法】
双抗体夹心法
【操作步骤】
1．平衡：
将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板开封后，余者既时以自封袋封存。
2．配液：
浓缩洗涤液配制前应充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
3．编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
4．稀释：
每孔加20uL样品稀释液
5．加样：
分别用加样器在相应孔中加入阴、阳性对照血清或待测样本100uL。
6．温育：
置37℃温育60分钟。
7．加酶：
分别在每孔酶标记抗体50uL（1滴），轻拍混匀。
8．温育：
置37℃温育30分钟。
9．洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30~60秒的浸泡时间）。
10．显色：
每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀。
11、终止：
终止每孔加终止液50uL，轻拍混匀。
15分钟内比色。
10、测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔30分钟内完成测定，并记寻结果。
）
【结果判定】：
1．临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD均值×2.1
阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算
2．结果判定：
样品OD值S/C.O.≥1者HbsAg阳性
样品OD值S/C.O.＜1者HbsAg阴性
【注意事项】：
1．每板设阴、阳对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
2．洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能未能洗净。
3．加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1~2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
4．所有样品都应按传染源处理。
5．样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。
6．封口膜使用说明：
（1）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
（2）微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。
7．不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
乙肝表面抗体（HBsAb）
【原理】
本试剂盒在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗原（HBsAg），配以酶标记抗体
（HbsAg—HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中的乙肝表面抗体（HBsAb）。
【方法】
双抗原夹心法
【操作步骤】
1、平衡：
将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板开封后，余者既时以自封袋封存。
2、液：
浓缩洗涤液配制前应充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
3、号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
4、加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴性或阳性对照血清50uL于相应孔中。
5、加酶：
分别在每孔酶标记抗体50uL（1滴），轻拍混匀。
6、温育：
置37℃温育25分钟，室温平衡5分钟。
7、洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30~60秒的浸泡时间）。
8、显色：
每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀。
9、终止每孔加终止液50uL，轻拍混匀。
10分钟内比色。
10、测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔30分钟内完成测定，并记寻结果。
）
【结果判定】：
1．临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD均值×2.1
阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算
2．结果判定：
样品OD值S/C.O.≥1者HbsAb阳性
样品OD值S/C.O.＜1者HbsAb阴性
【注意事项】：
1、每板设阴、阳对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
2、洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能未能洗净。
3、加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1~2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
4、所有样品都应按传染源处理。
5、样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。
6、封口膜使用说明：
（1）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
（2）微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。
7、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
乙肝e抗原（HBeAg）
【原理】
本试剂盒在微孔条上预包被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗体
（HbeAb—HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中的乙肝e抗原（HBeAg）。
【方法】
双抗体夹心法
【操作步骤】
1、平衡：
将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板开封后，余者既时以自封袋封存。
2、配液：
浓缩洗涤液配制前应充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
3、编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
4、加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴性或阳性对照血清50uL于相应孔中。
5、加酶：
分别在每孔酶标记抗体50uL（1滴），轻拍混匀。
6、温育：
置37℃温育25分钟，室温平衡5分钟。
7、洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30~60秒的浸泡时间）。
8、显色：
每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀。
9、终止每孔加终止液50uL，轻拍混匀。
10分钟内比色。
10、测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔30分钟内完成测定，并记寻结果。
）
【结果判定】：
1．临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD均值×2.1
阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算
2．结果判定：
样品OD值S/C.O.≥1者HbeAg阳性
样品OD值S/C.O.＜1者HbeAg阴性
【注意事项】：
1、每板设阴、阳对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
2、洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能未能洗净。
3、加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1~2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
4、所有样品都应按传染源处理。
5、样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。
6、封口膜使用说明：
a）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
b）微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。
7、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
乙肝e抗体（HBeAb）
【原理】
本试剂盒在微孔条上预包被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗体（HBeAb—HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中的乙肝e抗体（HBeAb）。
【方法】
双抗体夹心法
【操作步骤】
1、平衡：
将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板开封后，余者既时以自封袋封存。
2、配液：
浓缩洗涤液配制前应充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
3、编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
4、加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴性或阳性对照血清50uL于相应孔中。
5、中和：
分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50uL，轻拍混匀。
6、加酶：
分别在每孔酶标记抗体50uL（1滴），轻拍混匀。
7、温育：
置37℃温育25分钟，室温平衡5分钟。
8、洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30~60秒的浸泡时间）。
9、显色：
每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀。
10、终止：
每孔加终止液50uL，轻拍混匀。
10分钟内比色。
11、测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔30分钟内完成测定，并记寻结果。
）
【结果判定】：
1．临界值（C.O.）的计算：
待测样品为原倍血清时，临界值（C.O.）=阴性对照孔OD均值×0.2
待测样品为非原倍血清时，临界值（C.O.）=阴性对照孔OD均值×0.5
（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）
2．结果判定：
样品OD值S/C.O.≤1者HBeAb阳性
样品OD值S/C.O.＞1者HBeAb阴性
【注意事项】：
1、每板设阴、阳对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
2、洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能未能洗净。
3、加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1~2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
4、所有样品都应按传染源处理。
5、样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。
6、封口膜使用说明：
a）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
b）微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。
7、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
乙肝核心抗体（HBcAb）
【原理】
本试剂盒在微孔条上预包被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HBcAb—HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中的乙肝核心抗体。
【方法】
竞争抑制法
【操作步骤】
1、平衡：
将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板开封后，余者既时以自封袋封存。
2、配液：
浓缩洗涤液配制前应充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
3、编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
★作为临床诊断依据，必须将原倍血清样品按照1：
30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水或10mMPBS；作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验。
4、加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴性或阳性对照血清50uL于相应孔中。
5、加酶：
分别在每孔酶标记抗体50uL（1滴），轻拍混匀。
6、温育：
置37℃温育25分钟，室温平衡5分钟。
7、洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30~60秒的浸泡时间）。
8、显色：
每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀。
9、终止：
每孔加终止液50uL，轻拍混匀。
10分钟内比色。
10、测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔30分钟内完成测定，并记寻结果。
）
【结果判定】：
1、临界值（C.O.）的计算：
待测样品为原倍血清时，临界值（C.O.）=阴性对照孔OD均值×0.2
待测样品为非原倍血清时，临界值（C.O.）=阴性对照孔OD均值×0.5
（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）
2、结果判定：
样品OD值S/C.O.≤1者HBcAb阳性
样品OD值S/C.O.＞1者HBcAb阴性
【注意事项】：
1、每板设阴、阳对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
2、洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能未能洗净。
3、加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1~2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
4、所有样品都应按传染源处理。
5、样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。
6、封口膜使用说明：
a）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
b）微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。
7、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
甲胎蛋白（AFP）测定（酶联免疫法）
【原理】：
采用针对不同抗原决定簇的两个单克隆抗体分别制备成包被板和酶结合物，利用ELISA双抗体夹心法原理定量检测人血清样本中的AFP含量。
适用于原发性肝细胞癌及胎儿神经管发育异常（脊柱裂、脑积水）的早期辅助诊断。
【试剂】采用郑州安图生物公司产品，试剂盒组成：
1.微孔反应板条6.显色剂A
2.酶结合物7.显色剂B
3.标准品：
5瓶8.终止液
4.阴性对照9.封片
5.洗涤液1×8ml（使用前以蒸馏水稀释至500ml）10.说明书
【样本要求】：
病人标本无需特殊制备处理，采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后，提取血清用于检测。
待测血清存放于4℃冰箱，采血后24小时内测定。
若需长时间保存，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复至室温，轻轻摇动混匀。
若标本有沉淀物形成，应离心除去，并确定未变质方可使用。
溶血或脂血标本不能使用。
【操作】：
1.将包被孔编号，各孔加入50微升待测标本和标准品，并设空白对照1孔。
2.每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。
3.洗板机洗板：
选择洗涤5次程序洗板后拍干。
手工洗板：
弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置20秒，甩干，重复5次后拍干。
4.每孔加显色剂A、B各1滴，充分混匀，封板，室温（18-25℃）孵育10分钟。
5.每孔加入终止液1滴，混匀。
6.使用双波长酶标仪比色，主波长450nm，参考波长630nm，读取各孔OD值。
【结果判定】
样品OD值≥20ng标准品OD值判断为阳性，否则为阴性。
【注意事项】
1．从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。
在平衡试剂的同时，待测标本需置室温平衡30分钟后再行测试。
2．使用试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。
3．封片不能重复使用。
4．结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
5．不同批号的试剂不可混用。
6．标准品开启后须在1个月内使用，否则应冻存，但应避免反复冻融。
7．洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗涤过猛过急而致假阴性。
8．贮藏条件：
试剂盒应置2-8℃中避光保存，有效期一年。
癌胚抗原（CEA）测定（酶联免疫法）
【原理】：
采用针对不同抗原决定簇的两个单克隆抗体分别制备成包被板和酶结合物，利用ELISA双抗体夹心法原理定量检测人血清样本中的CEA含量。
适用于结肠癌、肺癌、胃癌的辅助临床诊断。
【试剂】采用郑州安图生物公司产品，试剂盒组成：
1.微孔反应板条6.显色剂A
2.酶结合物7.显色剂B
3.标准品:
5瓶8.终止液
4.阴性对照9.封片
5.洗涤液1×8ｍｌ（使用前以蒸馏水稀释至500ml）10.说明书
【样本要求】：
病人标本无需特殊制备处理，采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后，提取血清用于检测。
待测血清存放于4℃冰箱，采血后24小时内测定。
若需长时间保存，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复至室温，轻轻摇动混匀。
若标本有沉淀物形成，应离心除去，并确定未变质方可使用。
溶血或脂血标本不能使用。
【操作】：
1.将包被孔编号，各孔加入50微升待测标本和标准品，并设空白对照1孔。
2.每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置37℃孵育60分钟。
3.洗板机洗板：
选择洗涤5次程序洗板后拍干。
手工洗板：
弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置20秒，甩干，重复5次后拍干。
4.每孔加显色剂A、B各1滴，充分混匀，封板，室温（18-25℃）孵育10分钟。
5.每孔加入终止液1滴，混匀。
6.使用双波长酶标仪比色，主波长450nm，参考波长630nm，读取各孔OD值。
【结果判定】
样品OD值≥5ng标准品OD值判断为阳性，否则为阴性。
【注意事项】
1．从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。
在平衡试剂的同时，待测标本需置室温平衡30分钟后再行测试。
2．使用试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。
3．封片不能重复使用。
4．结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
5．不同批号的试剂不可混用。
6．标准品开启后，须在1个月内使用，否则应冻存，但应避免反复冻融。
7．洗涤要彻底，防止假阳性，但不可洗涤过猛过急而致假阴性。
8．贮藏条件：
试剂盒应置2-8℃中避光保存，有效期一年。
丙型肝炎病毒抗体Anti—HCV检测
【原理】
本试剂盒采用间接ELISA方法检测血清或血浆中丙型肝炎病毒抗体Anti—HCV。
在微孔条上预包被基因表达纯化HCV抗原，与血清中抗HCV抗体反应，再加入HRP标记羊抗人—IgG的酶标记抗体与之结合，然后用TMB作用显色。
采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中的丙型肝炎病毒抗体Anti—HCV。
【操作步骤】
1、平衡：
将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板开封后，余者既时以自封袋封存。
2、配液：
浓缩洗涤液配制前应充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
1、编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
2、稀释：
用加液器每孔加入100uL样品稀释液。
3、加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴性或阳性对照血清或待测样品10uL于相应孔中。
4、温育：
置37℃温育25分钟。
5、洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30~60秒的浸泡时间）。
10、加酶：
分别在每孔加入酶标液两滴，轻拍混匀。
11、温育：
置37℃温育25分钟，室温平衡5分钟。
12、洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30~60秒的浸泡时间）。
13、显色：
每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀。
14、终止：
每孔加终止液50uL，轻拍混匀。
10分钟内比色。
15、测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔30分钟内完成测定，并记寻结果。
）
【结果判定】：
1、阴性对照：
正常情况下，阴性对照孔OD值≤0.008。
（阴性对照孔OD值大于0.008应舍弃，如果所有阴性对照孔OD值都大于0.008，应重复试验。
2、阳性对照：
正常情况下，阳性对照孔值≥0.5。
3、临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD均值×2.8
（阴性对照OD均值低于0.05时以0.05计算）
4、结果判定：
样品OD值S/C.O.≥1者HCV抗体阳性
样品OD值S/C.O.＜1者HCV抗体阴性
★初试验阳性者（S/C.O.≤2）应进行双孔复试，复试阳性者方为HCV抗体反应阳性。
【注意事项】：
1、每板设阴、阳对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
2、洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能未能洗净。
3、加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1~2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
4、所有样品都应按传染源处理。
5、样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗原存在。
6、封口膜使用说明：
a）微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
b）微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其它因素对实验带来的非预期的影响。
7、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和（或）Ⅱ型抗体
Anti—HIV检测
【检测原理】
本试剂盒是采用双抗原夹心原理的ELISA法检测人血清或血浆中的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和（或）Ⅱ型抗体。
样品加入包被HIV抗原反应孔，再加入酶标记的HIV抗原，在随后的温育过程中，若样品中含特异性抗体（抗-HIV），则形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”免疫复合物，洗涤后，加入显色剂显色。
适用范围，人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体初筛诊断，献血员筛查。
【试剂盒组成】
序号组分名称数量
1包被反应板1包2样品稀释液1瓶
3阴性对照1瓶4阳性对照1瓶
5洗涤液（20倍）1瓶6酶标二抗1瓶
7显色剂A1瓶8显色剂B1瓶
9终止液1瓶10密封袋1个
11封板膜3张
【操作程序】
1.配洗液：
取适量蒸馏水稀释20倍洗涤液（将50ml20倍洗涤液加水稀释至1000ml），充分摇匀后备用。
2.加样本稀释液：
各微孔反应板孔中加入样本稀释液50ul，空下一孔作底物空白对照。
3.加标本：
将每份待检标本各50ul分别加入各孔中，空下六孔加对照和作底物空白对照。
4.加对照和留底物空白对照：
在预先空下的六孔中分别加入阳性对照二孔，阴性对照三孔，每孔50ul，留下一孔不加组分作底物空白对照，标好位置。
阴、阳对照应在所有待检标本加完后再加,以保证阈值计算的准确性。
5.温育：
充分混匀,贴上封膜，37℃温育60分钟。
6.洗板：
洗板机洗或手洗，方法如下：
①.手洗：
倾去内容物，用洗液注满反应孔，静置20秒至60秒后吸去或弃去,在毛巾或吸水纸上拍干。
如此洗板重复5次。
②.洗板机洗：
洗板次数为5次，每次洗液在孔中滞留时间为20-60秒，洗液应注满反应孔，确保每次吸净无残留，全部洗完后在毛巾或吸水纸上用力拍干。
7.加酶标抗原：
各孔中用加样器加入酶标抗原100ul，底物空白对照除外。
8.温育：
充分混匀,贴上封膜，37℃温育30分钟。
9洗板：
同步骤6。
10.加显色剂：
每孔加入显色剂A50ul，全部加完后再在每孔中加入显色剂B50ul，混匀。
11.显色：
37℃显色
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