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新药申报资料4

中药注册分类6第一局部：

综述资料编号4

泽泻白术胶囊申报资料

对主要研究结果的总结及评价

工程负责人：

吴义权

资料整理者：

石海霞

资料审读者：

吴义权

联系人：

李璐华

联系：

新药申报单位：

安徽滴石制药股份

对主要研究结果的总结及评价

一、处方规格及制备工艺

1.处方：

泽泻、白术

2.规格：

粒

3.制备工艺：

①泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、枯燥即可。

③将①②与适量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可

4.生产工艺

．泽泻胶囊的工艺选择

泽泻胶囊由泽泻与白术组成,有清热解毒之功,对晕动症有良效。

按标准规定项下的提取方法,两味药材的有效成分提取率太低,且操作麻烦,生产周期长,现采用新的提取方法,提取率大幅度增高,本钱大幅度下降。

本试验采用与质量标准项下相同的方法对泽泻中的有效成分泽泻醇B乙酸酯与白术中的有效成分苍术酮的测定。

对提取工艺进行考察,为泽泻胶囊制备工艺确实定,提供实验依据。

实验材料

泽泻与白术（购于和义堂中药饮片公司）,泽泻醇B乙酸酯与苍术酮（购于中国药品生物制品检定所）,SSIPC2000高效液相色谱仪,泵:

seriesⅢ型,检测器型号Mode1-500,所用溶剂均为分析纯,流动相配制用色谱纯,水为重蒸馏水色谱柱:

C18ODS柱（250mm、4.6mm、5mm）（天津市兰博实验仪器设备）。

方法与结果

4.1.　工艺设计

泽泻的有效成分为泽泻醇B乙酸酯,白术有效成份为苍术酮。

根据二者的性质,采用乙醇回流法。

将提取后的提取物皆枯燥成粉末,再测其含量,计算其提取率。

以二者的提取率（提取物中有效成份的量除以原药材中有效成份的量）为指标,以乙醇浓度,溶媒倍数、提取时间、提取次数为影响提取率的四个关键因素,每个因素取3个水平,用正交表L9（34）安排试验,见表1。

表1泽泻、白术提取率的因素水平表

水平

乙醇浓度

提取次数

溶媒倍数

提取时间〔h〕

60%

70%

80%

4.2.　样品制备

分别取泽泻（泽泻醇B乙酸酯含量3.2%）与白术（苍术酮含量10.9%）各10kg按表2的设计方案进行。

4.　含量测定

4.　泽泻提取物中泽泻醇B乙酸酯的含量测定　

色谱条件与系统适用性试验:

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙晴-0.4%磷酸溶液（13∶87）为流动相,检测波长为327nm,理论板数按泽泻醇B乙酸酯峰计算应不低于1000。

对照品溶液制备:

精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量,置棕色瓶中,加50%乙醇制成1ml含40μg的溶液,即得（10℃以下保存）。

供试品溶液制备:

取泽泻干粉0.2g,精密称定,精密参加50%甲醇100ml,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量、摇匀、滤过,精密量取续滤液5ml置25ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即可。

测定法:

吸取供试品与对照品各10μl,注入液相色谱仪,即可。

4.　白术提取物中苍术酮的含量测定　

色谱条件与系统适用性试验:

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）为流动相;检测波长为280nm。

理论板数按苍术酮峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备:

精密称取在60℃减压枯燥4h的苍术酮对照品适量,加甲醇制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备:

取本品粉末约0.1g,精密称定,加70%乙醇50ml,加热回流3h,放冷,滤过,滤液置100ml量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。

精密量取1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

测定法:

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。

4.　结果判定

表2泽泻、白术样品制备设计表

组号

泽泻醇B乙酸酯苍术酮

提取率%提取率%

浓度

次数

倍数

时间

1（60%）

2（70%）

3（80%）

泽泻醇

187

130

200

210

212

213

B乙酸

235

242

212

乙酯

214

265

223

135

苍

222

105

182

178

201

186

术

194

217

185.9

酮

149

243

197

138

表3泽泻、白术提取新工艺与标准工艺比拟

名称

浸膏得率

浸膏含量

提取率〔%〕

新工艺

泽泻

〔泽泻醇B〕

白术

〔苍术酮〕

泽泻

〔泽泻醇B〕

标准工艺

白术

〔苍术酮〕

由表2R值可知,在先定的因素条件下,在泽泻的工艺中以泽泻醇B乙酸酯的提取率为考察指标,因素B>A>C>D,以次数为影响提取效果的最显著因素,乙醇浓度次之。

提取时间最小,结合K值分析,最正确工艺为:

70%乙醇提取3次,加12倍量提取2h。

为节省本钱,采用70%的乙醇提取3次,加12倍量,提取1h。

在白术的工艺中,以苍术酮的提取率为考察指标,因素B>A>D>C,提取次数为影响提取效果的最显著因素。

乙醇的浓度次之,加溶剂的倍数影响最小,结合K值分析,最正确工艺为60%乙醇提取3次,加溶剂12倍,提取1.5h,为节省本钱,采用60%乙醇,提取3次,加溶剂8倍,提取1.5h。

4.　比照试验

将上述筛选的最正确工艺条件与原标准项下工艺比拟。

（药材同上批）　经以上比拟知该工艺明显优于原标准项下工艺,因此新工艺切实可靠、经济、省时,本钱大幅度降低,可作为金银花和黄芩的提取工艺。

　泽泻胶囊的生产工艺

泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、枯燥即可。

③将①②与适量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可。

中试一般研究资料

泽泻胶囊中试

按上述确定的制备工艺技术路线进行三批泽泻胶囊中试，并对三批中试样品进行质

量检查，以考察工艺技术路线的稳定性和合理性，结果见表1-1。

表1-1三批泽泻胶囊中式数据

批号配方量〔万粒〕药材量〔kg〕浸膏量〔万粒〕成品数〔万粒〕成品率〔%〕

111201198

1112021

1112031

4.4.崩解时限

取泽泻胶囊6粒，照?

中国药典?

2021年版一部（附录ⅫA）检查，分别置于崩解仪吊篮的玻璃管中，开动崩解仪，使吊篮浸入1000mL烧杯中，烧杯中盛有37±1℃的水，观察崩解情况，并记录时间。

结果见表1-2。

三批泽泻胶囊均在30分钟内完全崩解。

表1-2泽泻胶囊崩解时限检查结果

批号123456平均〔min〕

1112011010101010

11120210101011

11120310101010101010

4.4.装量差异

取三批泽泻胶囊各20粒，照?

中国药典?

2021年版一部（附录IL）检查重量差异，结果见表1—3，三批样品均未超出10％的重量差异限度。

表1-3三批供试品重量差异检查结果：

装量〔g〕

供试品批号111201111202111203

平均装量

色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：

德国Nucleosil-CJ，（4．6nmxl50mm,5pm）；甲醇一O．5％醋酸（10：

90）为流动相；检测波长为312nm。

理论板数按原峰计算应不低于1800。

精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备

取装量差异项下本品，混匀，取适量，研细，取约0．29，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率：

160W，频率：

50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用0．45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

测定方法

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1、20u1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

本品每粒含泽泻中泽泻醇B乙酸酯计，不得少于0．9mg。

三批泽泻胶囊含量测定结果见表2-4。

表2-4泽泻胶囊中泽泻醇B乙酸酯含量测定

批号111201111202111203

含量粒粒粒

结果

结果说明三批中试样品崩解度检查均在30分钟内全部崩解，装量检查未超出10％的重量差异限度，泽泻醇B乙酸酯含量分别为0．93mg／粒、0．91mg／粒和0．9mg／粒，说明工艺技术路线稳定、合理。

二、质量标准研究

泽泻胶囊

ZeXiejiaonang

【处方】泽泻白术

【制作】

③将①②与适量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可。

【性状】本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。

【鉴别】

（1）取本品2粒，研细，加石油醚30ml，超声处理20分钟（温度30℃，功率80Hz），滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟（温度30℃，功率80Hz），滤过，残渣再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。

另取泽泻对照药材10g，按照供试品溶液制备方法制备，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取供试品溶液10μl,、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水（65:

35:

10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（2）取本品2粒，用70%乙醇溶解，超声处理20分钟（温度30℃，功率80Hz），用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。

另取白术对照药材20g，加石油醚3Oml，超声处理20分钟（温度30℃，功率80Hz），滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟（温度30℃，功率80HZ），滤过，残渣，再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。

取苍术酮标准品0.5mg，甲醇定容至10ml，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯一醋酸乙酷一异丙醇一甲醇一浓氨试液（5:

3二1.5:

1.5:

0.5）为展开剂，另槽参加等体积的浓氨试液，预平衡数分钟后，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】水分不得过9.0%〔附录IXH〕。

其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定〔附录IL〕。

【含量测定】照高效液相色谱法〔附录VID〕测定。

色谱条件与系统适用性试验色谱柱：

德国Nucleosil-CJ，（4．6nmxl50mm,5pm）；甲醇一O．5％醋酸（10：

90）为流动相；检测波长为312nm。

理论板数按原峰计算应不低于1800。

对照品溶液的制备精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备取装量差异项下本品，混匀，取适量，研细，取约0．29，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率：

160W，频率：

50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用0．45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

测定方法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1、20u1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

本品每粒含泽泻中泽泻醇B乙酸酯计，不得少于0．9mg。

【功能与主治】晕动症

【用法与用量】一次4粒，一日2次，饭后服用。

【注意】

1、忌生冷、辛辣食物。

2、小儿应在医师指导下使用。

3、药品性状发生改变时禁止服用。

4、不宜长期服用。

5、如正服用其他药物，使用本品请咨询医师或药师。

【规格

【贮藏】密封，置阴凉枯燥处。

【有效期】18个月

2.1名称与汉语拼音

本品由泽泻汤制成胶囊剂，采用方中药味及原名称加剂型的命名方法，将本品命名为泽泻胶囊。

汉语拼音为ZexieJiaonang

2.2处方

泽泻白术

③将①②与适量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可。

本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。

2.5鉴别

胶囊中泽泻的鉴别

取本品粉末2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加于氧化铝柱（200～300目，5g，内径为1cm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取23一乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

照?

薄层色谱法检验标准操作程序?

（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯（1：

1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

胶囊中白术的鉴别

取本品粉末，加正己烷2ml，超声处理15分钟，过，取滤液作为供试品溶液。

另取白术对照药材，同法制成对照药材溶液。

照?

薄层色谱法检验标准操作程序?

（附录ⅥB）试验，吸取上述新制备的两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）乙酸乙酯（50：

1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点（苍术酮）。

2.6.1装量差异

取三批泽泻胶囊各20粒，照?

中国药典?

2021年版一部（附录IL）检查重量差异，结果见表2—3，三批样品均未超出10％的重量差异限度。

表2-3三批供试品重量差异检查结果：

装量〔g〕

供试品批号111201111202111203

平均装量

结果说明：

本品符合?

中国药典?

2021年版一部胶囊剂项下的装量差异应在士10%的规定。

2.6.2水分

取本品，按（（（中国药典?

2005年版一部附录IXH）水分测定法中（甲苯法）测定三批样品的水分，结果见表2一4.

表2-4泽泻胶囊水分检查结果

批号

111201

111202

111203

水分〔%〕

检查结果符合?

中国药典?

2021年版一部〔附录IL〕标准不得过9.0%。

取三批肠泰胶囊每批六粒，照?

中国药典?

2005版一部（附录郑A崩解时限检查法）进行试验，均在30分钟内完全崩解。

结果见表2-5。

表2-5泽泻胶囊崩解时限检查结果〔min〕

批号

平均

111201

111202

111203

结果说明：

本品崩解时限符合?

中国药典?

2021年版一部〔附录XIIA〕胶囊剂项下30分钟全部崩解的规定。

2.6.4重金属检查

按〔?

中国药典?

2021年版第一部附录IXE〕重金属检查法中第二法试验。

称取硝酸铅0.1609，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每lml相当于10ug的Pb）。

取三批供试品各1g，研细，置于柑锅缓缓一1.Oml，使其湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500一600℃炽灼使完全灰化，放冷。

上述灰化物加盐酸2ml，置水浴上蒸干，再加水15ml，滴加氨试液（至对酚酞指示液显中性），再参加醋酸盐缓冲液2ml，微热使溶解，移至甲比色管中，加水至25ml;另取配制供试液的试剂，置瓷皿中蒸干后，参加醋酸盐缓冲注液2ml与水15ml，加热使溶解，移至乙比色管中，加标准铅溶液lml，再加水稀释至25ml。

甲、乙二管分别参加硫代乙酸胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，甲管明显浅于乙管（供试品管颜色明显浅于对照管），说明本品重金属含量小于百万分之十，结果见表2-6。

表2-6泽泻胶囊重金属检查结果

批号

重金属检查结果

111201

小于万分之一

111202

小于万分之一

111203

小于万分之一

由此结果可见，本品重金属含量均低于药典不超过百万分之十的规定。

2.6.5砷盐检查

g，加等量无砷氢氧化钙，加水少量调匀，使成糊状，枯燥后先用小火加热使炭化，再于500一600℃灼烧至完全灰化，取出，放冷，加蒸馏水5ml，然后小心转移至测砷斑用标准磨口锥形瓶内，用蒸馏水冲洗增祸三次，每次6ml，洗液并入锥形瓶中，再加盐酸5ml，照（?

中国药典?

2021年版一部附录IXF）砷盐检查法第一法，自“再加碘化钾试液5ml〞起，依法操作，将生成的砷斑与标准砷班比拟，颜色均浅于2ug的标准砷斑。

结果见表2-7.

表2-7泽泻胶囊砷盐检查结果

批号

111201

111202

111203

检查结果

小于百万分之二

由此结果可见，三批样品砷盐限度检查结果均小于百万分之二，未列入质量标准正文。

2.6.6微生物限度

取肠泰胶囊（111201、111202、111203），按照（（中国药典?

2021年版一部（附录XIIIC）微生物限度检查法测定。

结果三批泽泻胶囊细菌数、霉菌、酵母菌数及大肠杆菌检查结果均符合规定。

结果见表2-8.

表2-8泽泻胶囊微生物限度检查结果

微生物限度标准

111201

111202

111203

细菌数不得过1000个/g

细菌数：

100个/g

细菌数：

100个/g

细菌数：

100个/g

霉菌数和酵母菌不得过100个/g

霉菌数和酵母菌：

<10个/g

霉菌数和酵母菌：

<10个/g

霉菌数和酵母菌：

<10个/g

大肠埃希菌不得检出

大肠埃希菌：

未检出

大肠埃希菌：

未检出

大肠埃希菌：

未检出

检查结果符合?

中国药典?

2021年版一部〔附录XIIIC〕微生物限度检查标准。

2.6.7含量测定

2.6.7.1泽泻醇B乙酸酯的含量测定

LC-10A型高效液相色谱仪，岛津SPD-10A紫外检测器，AUTOSCIENCEAT-330柱温箱，AGTC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）;RE-52型旋转蒸发仪（天津第一玻璃厂）;试剂均为色谱纯，水为娃哈哈饮用纯洁水。

泽泻醇B乙酸酯对照品（中国药品生物制品检定所）;抗眩晕颗粒（批号20210218，20210708）。

2.6.7.1.2方法与结果

2.6.7.1.2.1色谱条件AGTC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）;流动相乙腈-水（85∶15）;检测波长208nm;流速1.0mL·min－1;柱温25℃;进样量20μL。

2.6.7.1.2.2样品的制备

2.6.7.12.2.1对照品溶液的制备精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成70g·－1的对照品溶液，见图1。

2.6.7.1．2.2.2供试品溶液的制备取抗眩晕颗粒适量，研细，精密称取1.5g于圆底烧瓶中，加甲醇20mL超声（功率120W，频率40kHz）1h，过滤至25mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液，见图1。

2.6.7.1.2.2.3阴性样品溶液的制备按处方取除泽泻的各味药材，煎煮，制成阴性样品颗粒，按1.3.2.2.2项下方法，制得阴性样品溶液，见图1。

.7.2.3标准曲线的制备精密吸取一定量对照品溶液，用甲醇稀释并定容，得到0.28，0.70，1.40，2.10，2.80，3.50g·L－1的对照品溶液的系列溶液。

将上述溶液按2.1项下色谱条件进行测定，以泽泻醇B乙酸酯峰面积值（Y）对其相应浓度（X）做线性回归，得到泽泻醇B乙酸酯的回归方程:

Y=1.62×104X+1.78×103，r=0.9992，说明泽泻醇B乙酸酯在0.28～3.50g·L－1线性关系良好。

.2.4精密度试验取同一浓度泽泻醇B乙酸酯对照品溶液（2.80g·L－1），按2.1项下色谱条件连续进样5次，测定峰面积值，其相对标准偏差RSD为1.31%。

.2.5重复性试验取同一批样品，精密称取5份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，其相对标准偏差RSD为1.60%，说明本法重复性良好。

.2.6稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8h按1.3.2.1项下色谱条件进行测定，其相对标准偏差RSD为1.77%，说明样品在8h内稳定性良好。

.2.7回收率试验精密称取泽泻醇

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