新药申报资料4.docx

1、新药申报资料4 中药注册分类6 第一局部：综述资料 编号4泽泻白术胶囊申报资料对主要研究结果的总结及评价工程负责人：吴义权资料整理者：石海霞资料审读者：吴义权联系人：李璐华联系 ：新药申报单位：安徽滴石制药股份对主要研究结果的总结及评价一、处方规格及制备工艺1.处方：泽泻、白术2.规格：粒3.制备工艺：泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为的稠膏;另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、枯燥即可。将与适量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可4.生产工艺泽泻胶囊的工艺选择泽泻

2、胶囊由泽泻与白术组成,有清热解毒之功,对晕动症有良效。按标准规定项下的提取方法,两味药材的有效成分提取率太低,且操作麻烦,生产周期长,现采用新的提取方法,提取率大幅度增高,本钱大幅度下降。本试验采用与质量标准项下相同的方法对泽泻中的有效成分泽泻醇B乙酸酯与白术中的有效成分苍术酮的测定。对提取工艺进行考察,为泽泻胶囊制备工艺确实定,提供实验依据。实验材料泽泻与白术(购于和义堂中药饮片公司), 泽泻醇 B 乙酸酯与苍术酮(购于中国药品生物制品检定所),SSIPC2000高效液相色谱仪,泵:series型,检测器型号Mode1-500,所用溶剂均为分析纯,流动相配制用色谱纯,水为重蒸馏水色谱柱:C1

3、8ODS柱(250 mm、4.6 mm、5 mm)(天津市兰博实验仪器设备)。方法与结果4.1.工艺设计泽泻的有效成分为泽泻醇 B 乙酸酯,白术有效成份为苍术酮。根据二者的性质,采用乙醇回流法。将提取后的提取物皆枯燥成粉末,再测其含量,计算其提取率。以二者的提取率(提取物中有效成份的量除以原药材中有效成份的量)为指标,以乙醇浓度,溶媒倍数、提取时间、提取次数为影响提取率的四个关键因素,每个因素取3个水平,用正交表L9(34)安排试验,见表1。表1 泽泻、白术提取率的因素水平表 水平ABCD乙醇浓度 提取次数溶媒倍数提取时间h160%1812370%80%23101224.2.样品制备分别取泽泻

4、(泽泻醇B乙酸酯含量3.2%)与白术(苍术酮含量10.9%)各10 kg按表2的设计方案进行。4.含量测定4.泽泻提取物中泽泻醇B乙酸酯的含量测定色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙晴-0.4%磷酸溶液(1387)为流动相,检测波长为327 nm,理论板数按泽泻醇B乙酸酯峰计算应不低于1 000。对照品溶液制备:精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量,置棕色瓶中,加50%乙醇制成1 ml含40g的溶液,即得(10以下保存)。供试品溶液制备:取泽泻干粉0.2 g,精密称定,精密参加50%甲醇100 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重

5、量、摇匀、滤过,精密量取续滤液5 ml置25 ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即可。测定法:吸取供试品与对照品各10l,注入液相色谱仪,即可。4.白术提取物中苍术酮的含量测定色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水-磷酸(47530.2)为流动相;检测波长为280 nm。理论板数按苍术酮峰计算应不低于2 500。对照品溶液的制备:精密称取在60减压枯燥4 h的苍术酮对照品适量,加甲醇制成每1 ml含60g的溶液。供试品溶液的制备:取本品粉末约0.1 g,精密称定,加70%乙醇50 ml,加热回流3 h,放冷,滤过,滤液置100 ml量瓶中,用少量70%乙醇分

6、次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取1 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l,注入液相色谱仪,测定,即得。4.结果判定表2 泽泻、白术样品制备设计表组号ABCD泽泻醇B乙酸酯 苍术酮提取率% 提取率 %浓度次数倍数时间11(60%)1812121031312242(70%)123522316231273(80%)1328321393321泽泻醇K1187130200 210 212 213B乙酸K2235242212乙酯K3214265223R13523苍K1222105182 178 201

7、 186术K2194217185.9 酮K3149243197R138表3 泽泻、白术提取新工艺与标准工艺比拟名称浸膏得率浸膏含量提取率%新工艺泽泻泽泻醇B白术苍术酮泽泻泽泻醇B标准工艺白术苍术酮由表2 R值可知,在先定的因素条件下,在泽泻的工艺中以泽泻醇B乙酸酯的提取率为考察指标,因素BACD,以次数为影响提取效果的最显著因素,乙醇浓度次之。提取时间最小,结合K值分析,最正确工艺为:70%乙醇提取3次,加12倍量提取2 h。为节省本钱,采用70%的乙醇提取3次,加12倍量,提取1 h。在白术的工艺中,以苍术酮的提取率为考察指标,因素BADC,提取次数为影响提取效果的最显著因素。乙醇的浓度次之

8、,加溶剂的倍数影响最小,结合K值分析,最正确工艺为60%乙醇提取3次,加溶剂12倍,提取1.5 h,为节省本钱,采用60%乙醇,提取3次,加溶剂8倍,提取1.5 h。4.比照试验将上述筛选的最正确工艺条件与原标准项下工艺比拟。(药材同上批) 经以上比拟知该工艺明显优于原标准项下工艺,因此新工艺切实可靠、经济、省时,本钱大幅度降低,可作为金银花和黄芩的提取工艺。泽泻胶囊的生产工艺泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为的稠膏;另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、枯燥即可。将与适

9、量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可。中试一般研究资料泽泻胶囊中试按上述确定的制备工艺技术路线进行三批泽泻胶囊中试，并对三批中试样品进行质量检查，以考察工艺技术路线的稳定性和合理性，结果见表1-1。表1-1 三批泽泻胶囊中式数据批号 配方量万粒 药材量kg 浸膏量万粒 成品数万粒 成品率%111201 1 98111202 1 111203 1 4.4.崩解时限取泽泻胶囊6粒，照?中国药典?2021年版一部(附录A)检查，分别置于崩解仪吊篮的玻璃管中，开动崩解仪，使吊篮浸入1000mL烧杯中，烧杯中盛有371的水，观察崩解情况，并记录时间。结果见表1-2。三批泽泻胶囊均在30分钟内完全崩

10、解。表1-2 泽泻胶囊崩解时限检查结果 批号 1 2 3 4 5 6 平均min111201 10 10 10 10 10 111202 10 10 10 11 111203 10 10 10 10 10 10 104.4.装量差异取三批泽泻胶囊各20粒，照?中国药典?2021年版一部(附录I L)检查重量差异，结果见表13，三批样品均未超出10的重量差异限度。表1-3 三批供试品重量差异检查结果：装量g 供试品批号 111201 111202 111203 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 平均装量 色谱条件与系统适用性试验

11、色谱柱：德国Nucleosil-C J，(46nmxl50mm,5 p m)；甲醇一O5醋酸(10：90)为流动相；检测波长为312nm。理论板数按原峰计算应不低于1800。精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成每lml含10 u g的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下本品，混匀，取适量，研细，取约029，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率： 160W，频率： 50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用045um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。测定方法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1、20 u1，注入液相色谱仪，测定

12、，计算，即得。本品每粒含泽泻中泽泻醇B乙酸酯计，不得少于09mg。三批泽泻胶囊含量测定结果见表2-4。表2-4 泽泻胶囊中泽泻醇B乙酸酯含量测定 批号 111201 111202 111203 含量 粒 粒 粒结果结果说明三批中试样品崩解度检查均在30分钟内全部崩解，装量检查未超出10的重量差异限度，泽泻醇B乙酸酯含量分别为093mg粒、091mg粒和09mg粒，说明工艺技术路线稳定、合理。二、质量标准研究 泽泻胶囊 ZeXie jiaonang【处方】 泽泻 白术【制作】泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为的稠膏;另将白术用60

13、%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、枯燥即可。将与适量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可。【性状】本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。【鉴别】(1)取本品2粒，研细，加石油醚30ml，超声处理20分钟(温度30，功率80Hz)，滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟(温度30，功率80Hz)，滤过，残渣再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材10g，按照供试品溶液制备方法制备，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取供试品溶液10l,、对照品溶液10l，分别点

14、于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水(65:35:10)10以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品2粒，用70%乙醇溶解，超声处理20分钟(温度30，功率80Hz)，用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。另取白术对照药材20g，加石油醚3Oml，超声处理20分钟(温度30，功率80Hz)，滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟(温度30，功率 80HZ)，滤过，残渣，再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。取

15、苍术酮标准品0.5mg，甲醇定容至10ml，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯一醋酸乙酷一异丙醇一甲醇一浓氨试液(5:3二1.5:1.5:0.5)为展开剂，另槽参加等体积的浓氨试液，预平衡数分钟后，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。【检查】水分 不得过9.0%附录IX H。 其他 应符合胶囊剂项下有关的各项规定附录I L。【含量测定】照高效液相色谱法附录VI D测定。色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：德国Nucleosil-C J，

16、(46nmxl50mm,5 p m)；甲醇一O5醋酸(10：90)为流动相；检测波长为312nm。理论板数按原峰计算应不低于1800。对照品溶液的制备 精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成每lml含10 u g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下本品，混匀，取适量，研细，取约029，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率： 160W，频率： 50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用045um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。测定方法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1、20 u1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品

17、每粒含泽泻中泽泻醇B乙酸酯计，不得少于09mg。【功能与主治】晕动症【用法与用量】一次4粒，一日2次，饭后服用。【注意】1、忌生冷、辛辣食物。2、小儿应在医师指导下使用。3、药品性状发生改变时禁止服用。4、不宜长期服用。5、如正服用其他药物，使用本品请咨询医师或药师。【规格【贮藏】密封，置阴凉枯燥处。【有效期】18个月2.1 名称与汉语拼音本品由泽泻汤制成胶囊剂，采用方中药味及原名称加剂型的命名方法，将本品命名为泽泻胶囊。汉语拼音为Zexie Jiaonang2.2 处方泽泻 白术泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为的稠膏;另将白

18、术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、枯燥即可。将与适量淀粉混匀、枯燥、充填胶囊,过塑、包装即可。本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。2.5 鉴别胶囊中泽泻的鉴别取本品粉末2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加于氧化铝柱(200300目，5g，内径为1cm，干法装柱)上，用乙酸乙酯10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取23一乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照?薄层色谱法检验标准操作程序?(附录B)试验，吸取上述两种溶液各51，分别点于

19、同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯(1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5硅钨酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。胶囊中白术的鉴别取本品粉末，加正己烷2ml，超声处理15分钟，过，取滤液作为供试品溶液。另取白术对照药材，同法制成对照药材溶液。照?薄层色谱法检验标准操作程序?(附录B)试验，吸取上述新制备的两种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(6090)乙酸乙酯(50：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应

20、显有一桃红色主斑点(苍术酮)。2.6.1 装量差异取三批泽泻胶囊各20粒，照?中国药典?2021年版一部(附录I L)检查重量差异，结果见表23，三批样品均未超出10的重量差异限度。表2-3 三批供试品重量差异检查结果：装量g 供试品批号 111201 111202 111203 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 平均装量 结果说明：本品符合?中国药典?2021年版一部胶囊剂项下的装量差异应在士10%的规定。2.6.2 水分取本品，按(中国药典?2005年版一部附录IXH)水分测定法中(甲苯法)测定三批样品的水分，结果见表2一

21、4.表2-4 泽泻胶囊水分检查结果批号111201111202111203水分%检查结果符合?中国药典?2021年版一部附录I L标准不得过9.0%。 取三批肠泰胶囊每批六粒，照?中国药典?2005版一部(附录郑A崩解时限检查法)进行试验，均在30分钟内完全崩解。结果见表2-5。表2-5 泽泻胶囊崩解时限检查结果min批号123456平均111201101010101011120210101111120310101010101010结果说明：本品崩解时限符合?中国药典?2021年版一部附录XII A胶囊剂项下30分钟全部崩解的规定。2.6.4 重金属检查 按?中国药典?2021年版第一部附录I

22、XE重金属检查法中第二法试验。称取硝酸铅0.1609，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每lml相当于 10ug的Pb)。取三批供试品各1g，研细，置于柑锅缓缓一1.Oml，使其湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500一600炽灼使完全灰化，放冷。上述灰化物加盐酸2ml，置水浴上蒸干，再加水15ml，滴加氨试液(至对酚酞指示液显中性)，再参加醋酸盐缓冲液2ml，微热使溶解，移至甲比色管中，加水至25ml;另取配制供

23、试液的试剂，置瓷皿中蒸干后，参加醋酸盐缓冲注液2ml与水 15ml，加热使溶解，移至乙比色管中，加标准铅溶液lml，再加水稀释至25ml。甲、乙二管分别参加硫代乙酸胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，甲管明显浅于乙管(供试品管颜色明显浅于对照管)，说明本品重金属含量小于百万分之十，结果见表2-6。表2-6 泽泻胶囊重金属检查结果 批号 重金属检查结果 111201 小于万分之一 111202小于万分之一 111203小于万分之一由此结果可见，本品重金属含量均低于药典不超过百万分之十的规定。2.6.5 砷盐检查g，加等量无砷氢氧化钙，加水少量调匀，使成糊状，枯燥后先用小火加

24、热使炭化，再于500一600灼烧至完全灰化，取出，放冷，加蒸馏水5ml，然后小心转移至测砷斑用标准磨口锥形瓶内，用蒸馏水冲洗增祸三次，每次6ml，洗液并入锥形瓶中，再加盐酸5ml，照(?中国药典?2021年版一部附录IX F)砷盐检查法第一法，自“再加碘化钾试液5ml起，依法操作，将生成的砷斑与标准砷班比拟，颜色均浅于 2ug的标准砷斑。结果见表2-7.表2-7 泽泻胶囊砷盐检查结果批号111201111202111203检查结果小于百万分之二小于百万分之二小于百万分之二由此结果可见，三批样品砷盐限度检查结果均小于百万分之二，未列入质量标准正文。2.6.6 微生物限度取肠泰胶囊(111201、

25、111202、111203)，按照(中国药典?2021年版一部(附录XIII C)微生物限度检查法测定。结果三批泽泻胶囊细菌数、霉菌、酵母菌数及大肠杆菌检查结果均符合规定。结果见表2-8.表2-8 泽泻胶囊微生物限度检查结果微生物限度标准111201111202111203细菌数不得过1000个/g细菌数：100个/g细菌数：100个/g细菌数：100个/g霉菌数和酵母菌不得过100个/g霉菌数和酵母菌： 10个/g霉菌数和酵母菌： 10个/g霉菌数和酵母菌： 10个/g大肠埃希菌不得检出大肠埃希菌：未检出大肠埃希菌：未检出大肠埃希菌：未检出检查结果符合?中国药典?2021年版一部附录XIII

26、 C微生物限度检查标准。2.6.7 含量测定2.6.7.1泽泻醇 B 乙酸酯的含量测定LC-10A 型高效液相色谱仪，岛津 SPD-10A 紫外检测器，AUTO SCIENCE AT-330 柱温箱，AGTC18色谱柱(4. 6 mm 250 mm，5m); RE-52 型旋转蒸发仪(天津第一玻璃厂);试剂均为色谱纯，水为娃哈哈饮用纯洁水。泽泻醇 B 乙酸酯对照品(中国药品生物制 品 检 定 所); 抗 眩 晕 颗 粒 ( 批 号 20210218，20210708) 。2.6.7.1.2 方法与结果2.6.7.1.2.1色谱条件 AGT C18色谱柱 (4. 6 mm 250mm，5m);流

27、动相乙腈-水(85 15);检测波长 208nm;流速 1. 0 mLmin 1;柱温 25 ;进样量 20 L。2.6.7.1.2.2 样品的制备2.6.7.12. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取泽泻醇 B 乙酸酯对照品适量，加甲醇制成 70 g 1的对照品溶液，见图 1。2.6.7.12. 2. 2 供试品溶液的制备 取抗眩晕颗粒适量，研细，精密称取 1. 5 g 于圆底烧瓶中，加甲醇 20 mL 超声(功率 120 W，频率 40 kHz)1 h，过滤至 25 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液，见图 1。2.6.7.1.2. 2. 3 阴性样品溶液的制备

28、 按处方取除泽泻的各味药材，煎煮，制成阴性样品颗粒，按 1.3.2. 2. 2 项下方法，制得阴性样品溶液，见图 1。.7.2. 3 标准曲线的制备 精密吸取一定量对照品溶液，用甲醇稀释并定容，得到 0. 28，0. 70，1. 40，2. 10，2. 80，3. 50 gL 1的对照品溶液的系列溶液。将上述溶液按 2. 1 项下色谱条件进行测定，以泽泻醇 B乙酸酯峰面积值(Y) 对其相应浓度 (X) 做线性回归，得到泽泻醇 B 乙酸酯的回归方程:Y = 1. 62 104X + 1. 78 103，r = 0. 999 2，说明泽泻醇 B 乙酸酯在0. 28 3. 50 gL 1线性关系良好

29、。.2. 4 精密度试验 取同一浓度泽泻醇 B 乙酸酯对照品溶液(2. 80 gL 1)，按 2. 1 项下色谱条件连续进样 5 次，测定峰面积值，其相对标准偏差 RSD 为1. 31% 。.2. 5 重复性试验 取同一批样品，精密称取 5 份，按 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进行测定，其相对标准偏差 RSD 为 1. 60% ，说明本法重复性良好。.2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h 按 1.3.2. 1 项下色谱条件进行测定，其相对标准偏差 RSD 为 1. 77% ，说明样品在 8 h 内稳定性良好。.2. 7 回收率试验 精密称取泽泻醇