人多能干细胞多能性维持和发育潜能差异的系统研究.docx

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人多能干细胞多能性维持和发育潜能差异的系统研究

项目名称：

人多能干细胞多能性维持和发育潜能差异的系统研究

首席科学家：

康九红同济大学

起止年限：

2011.1至2015.8

依托部门：

教育部上海市科委

二、预期目标

总体目标：

本项目以不同来源的ES和iPS细胞系为研究对象，以探索其多能性及稳定维持、向特定谱系分化的潜能、临床有效性及安全性差异的分子机制，并通过比较研究差异，建立ES和iPS细胞系在临床应用中的标准和根据不同目的筛选ES和iPS细胞系的便捷方法为总体目标。

为此，我们整合国内优秀团队，利用当前最先进的研究手段和技术，从细胞学、分子生物学、发育学、基因组学、表观基因组学和生物信息学等方面进行研究。

通过本项目的实施，将获得一批有自主知识产权的重要成果，提高国家科研实力，揭示ES和iPS细胞系间种种差异的机制，建立根据不同目的筛选适合ES和iPS细胞的标准和方法，加快ES和iPS细胞的临床应用。

五年预期目标：

1.揭示细胞内部预编程并决定不同ES和iPS细胞系多能性及稳定维持差异的分子、表观遗传机制和信号转导网络；

2.揭示细胞内部预编程并决定不同ES和iPS细胞系向RPE定向分化及治疗视网膜退行性眼病有效性和安全性差异的分子、表观遗传机制和信号转导网络；

3.揭示细胞内部预编程并决定不同ES和iPS细胞系向NPC或DA定向分化及治疗帕金森病有效性和安全性差异的分子、表观遗传机制和信号转导网络；

4.通过比较分析，初步制定出较为普遍的判断ES/iPS细胞系分化潜能以及临床安全性标准，以及根据不同临床目的（帕金森治疗等）筛选适合ES和iPS细胞的基本标准和经济便捷方法。

5.预期该项目完成时有多于80篇的研究论文发表在高水平的国际学术刊物上，其中影响因子大于5的30-50篇，影响因子大于10的10-20篇；申请专利5-10项。

6.培养博士后10-15人，博士研究生30-50人名，培养和壮大国内干细胞及iPS细胞的研究队伍。

三、研究方案

项目研究采用多学科交叉，多课题组合作的方式进行，第一课题组负责鉴定不同来源人类ES和iPS细胞多能性差异，与第四课题合作研究其机制和临床标准，并为其它课题组提供优秀的ES和iPS细胞。

在此基础上，第二、第三课题分别利用两个成型的动物模型，鉴定ES和iPS细胞分化潜能及临床安全性差异，与第四课题合作研究其机制和临床标准。

具体研究方案如下：

图1：

项目总体研究方案和技术路线

课题一不同（来源）人类ES和iPS细胞系多能性及其稳定维持的差异及预编程机制

1.人类多能干细胞的获得

结合已有小鼠技术和平台，主要利用华东干细胞库、中科院上海生科院干细胞库和北京干细胞库已有的人ES和iPS细胞系的资源，结合项目组成员已有的10多株不同人ES和iPS细胞系开展研究多能性的细胞、分子和体内评价工作。

2．不同来源多能干细胞多能性的确定、多能性及稳定维持潜能的差异分析

细胞形态学分析、核型分析、免疫组织化学方法、PCR方法。

主要的检测特征：

细胞核大小、核质比、克隆扁平度、边缘光滑度、细胞周期、群体倍增时间、核型、分子标记（SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81、Oct4、Nanog、Sox2、E-cadherin、Brachyury、Pax6、APF）

重要基因的表达：

端粒酶基因、细胞周期相关基因、关键的hESCs标记分子基因nanog等；重要的表观遗传修饰稳定性指标：

oct4等基因区域DNA甲基化、特征性miRNA、和X染色体失活；稳定传代数。

类胚体EB分化成三胚层的能力及差异：

多能干细胞消化成单细胞，在10%DMEM中悬浮培养，培养至第7天左右，收集形成球状的EB，抽提mRNA，反转，利用实时定量PCR手段检测各胚层基因的表达；同时，将收集到球状EB转移到细胞培养皿中，使其贴壁分化，并进行给胚层标记物的荧光染色鉴定。

畸胎瘤形成能力及差异：

将不同来源的多能干细胞收集后注射到NOD／SCID小鼠大腿内侧皮下。

待畸胎瘤形成至2cm左右时，摘除畸胎瘤，制备成石蜡切片，行HE染色，检测畸胎瘤含各胚层组织的情况。

根据这些结果，为课题二、三、四提供多能性、稳定性及分化潜能不同的细胞株。

3．不同来源多能干细胞多能性及其稳定维持差异的分子机制解析（与课题四合作）

利用高通量测序技术，鉴定多能性稳定维持具有显著差异的ES与iPS细胞系的microRNA和mRNA表达谱，基因组测序、以及组蛋白H3几个特定位点的乙酰化和甲基化修饰全基因组图谱。

利用比较基因组学和计算生物学的手段，分析和鉴定在多能性及其稳定遗传中起核心作用的转录因子、microRNAs及其靶基因、关键信号通路分子等其它分子（课题四）。

利用基因操作技术、分子生物学手段、iPS形成、多能干细胞全能性及稳定维持等功能分析等，研究上述发现的转录因子和microRNAs在多能性稳定维持等相关过程中的功能，阐明不同ES/iPS细胞系间多能性及其稳定维持潜能差异的分子、表观遗传机制和信号转导网络。

图2：

课题一技术路线

课题二ES和iPS细胞向RPE分化，治疗视网膜变性眼病有效性和临床安全性间的差异及预编程机制

1.建立并完善不同来源的人ES和iPS细胞诱导分化为RPE的实验技术

以H1、H2、H9、Hsf1、Hsf6等ES细胞系，以及人成纤维细胞、脂肪干细胞、羊膜干细胞等不同来源的iPS细胞系为实验材料，通过对各种相关信号通路、表观遗传修饰、转录因子进行调控，建立安全高效、简便快捷的多能干细胞诱导分化为RPE的技术。

2.对不同来源的ES/iPS细胞分化为RPE的潜能进行鉴定，评估不同来源的ES/iPS细胞诱导分化为RPE的分化潜能差异

通过检测类视色素形成活性、RPE特异分子标记等指标，对不同来源的多能性干细胞体外诱导分化RPE的速度、效率及分化后细胞功能进行比较，揭示不同来源多能干细胞向RPE诱导分化的潜能差异。

3.利用rpe65-/-小鼠和RSC大鼠两种视网膜疾病动物模型，检测不同来源多能干细胞体外分化得到的RPE在视网膜退行性眼病治疗能力和致瘤性上的差异

将RPE细胞移植入模型动物眼睛的视网膜下腔，监测眼类视色素水平、眼杯内Rpe65催化活性、RPE内吞噬小体数量，绘制RPE细胞存活曲线，并通过网膜电图标记术（electroretinography,ERG）检测移植动物的视觉改善效果，通过光学显微镜和电镜观察移植动物的眼睛的显微结构的改变。

利用重症联合免疫缺陷（severecombinedimmunodificiency,SCID）小鼠检测不同多能干细胞来源的RPE体内致瘤性。

4．在已鉴定不同来源多能干细胞系向RPE分化潜能差异的基础上，采用各种组学手段，筛选出具有RPE分化倾向的多能干细胞特异性分子标志

采用表观基因组学、转录组学、蛋白质组学等组学技术对不同来源的多能性干细胞进行研究，在DNA、RNA、蛋白质和染色质水平寻找RPE细胞分化趋向的特异性分子标志。

5.筛选并鉴定决定多能干细胞向RPE分化的关键因子

分析和鉴定ES和iPS细胞定向分化为RPE的过程中及RPE在体内修复损伤中起核心作用的转录因子、microRNAs及其靶基因和关键信号分子。

6.根据以上数据，阐明不同来源多能干细胞定向分化为RPE潜能差异及临床有效性和安全性差异的产生机制及调控网络

利用基因操作技术、RPE定向分化试验、干细胞功能分析、RPE动物模型和分子生物学技术等，研究上述发现的关键因子在ES和iPS细胞定向分化为RPE中，以及在分化为RPE后在体内成瘤过程中的功能，阐明不同ES/iPS向RPE定向分化、治疗视网膜退行性眼病的临床有效性及安全性差异的分子、表观遗传机制及信号转导网络。

7．制定来源于ES/iPS细胞的RPE临床安全性指标，建立筛选适合于分化为RPE的ES和iPS细胞的基本标准和技术体系。

基于上述工作，制定来源于ES/iPS细胞的RPE临床安全性指标，建立筛选适合于分化为RPE的ES和iPS细胞的基本标准和技术体系。

图3：

课题二技术路线图

课题三ES和iPS细胞向DANPC分化、治疗帕金森病有效性和临床安全性间的差异及预编程机制

1.人多能干细胞向DANPC定向分化、治疗帕金森病有效性及致瘤性的差异

研究多能干细胞在体外向DANPC分化能力的差异。

采用五部法诱导多能干细胞向DANPC的定向分化，从分子、细胞和功能学水平上评估不同来源的ES/iPS细胞系向DANPC方向分化的能力的差异进行半定量和定量的分析。

DANPC植入小鼠和食蟹猴帕金森模型后的功能比较。

将6-OHDA通过立体定位仪手术单侧注射到小鼠的脑纹状体以造成帕金森模型。

术后两周经腹腔注射Amphetamine并进行行为学测试小鼠单侧向左或向右旋转的比率。

将行为学稳定的小鼠保留进行多巴胺神经元移植手术。

将DANPC细胞移植入小鼠同侧病变的纹状体区域或者中脑黑质区域。

以后每隔一周做一次Amphetamine诱导的行为学试验。

细胞移植后一个月和3个月后结束试验，取脑做病理及染色分析。

一部分标本做多巴胺的HPLC定量，WesternBlot，和电生理试验以测试植入细胞是否整合到现有的神经通路中去。

同时，观测这些细胞系来源的细胞在体内的致瘤能力等安全性指标的差异。

双侧帕金森病食蟹猴模型的建立：

通过小剂量静脉注射神经毒素MPTP0.2mg/kg，建立稳定的双侧帕金森病模型。

用99mTc-TRODAT-1SPECT（单光子发射计算机体成像术）成像确认纹状体多巴胺转运（DAT）摄取率较对照组减少超过60％时认为模型稳定。

双侧模型由于与临床病人的表现更为接近，因此有利于进行帕金森病治疗的研究。

用DANPC细胞移植到造模稳定的模型猴一侧的纹状体处，术后通过行为学观察细胞治疗是否导致猴运动系统的功能改善。

行为学评价每周进行两次，共八周。

八周后用SPECT检测纹状体多巴胺转运（DAT）的摄取率。

临床观测终止后，对部分脑标本进行病理及免疫染色分析，部分标本做HPLC检测纹状体的多巴胺含量以及WesternBlot检测相关蛋白的表达量。

并观测这些细胞系来源的细胞在体内的致瘤能力等安全性指标差异。

2．人多能干细胞分化为DANPC、治疗帕金森病有效性及致瘤性差异的分子机制（与课题四合作）

利用高通量测序技术，分别鉴定利于和不利于向DANPC定向分化的ES与iPS细胞，以及成瘤性强和成瘤性弱的ES与iPS细胞的microRNA和mRNA表达谱，DNA甲基化图谱，基因组测序，以及组蛋白H3几个特定位点的乙酰化和甲基化修饰的全基因组图谱。

利用比较基因组学和计算生物学的手段，分析和鉴定在ES和iPS细胞定向分化为DANPC过程中，以及在分化为DANPC后再在体内成瘤过程中起核心作用的转录因子、microRNAs及其靶基因、其它分子等（课题四）。

利用基因操作技术、DANPC定向分化试验、干细胞功能分析、NPC小鼠模型和分子生物学技术等，研究上述发现的转录因子和microRNAs在ES和iPS细胞定向分化为DANPC中，以及在分化后在体内成瘤过程中的功能，阐明不同ES/iPS向DANPC定向分化、治疗帕金森病的临床有效性及安全性差异的分子、表观遗传机制及信号转导网络。

图4：

课题三技术路线

课题四决定ES和iPS细胞多能性、分化潜能及临床安全性差异的关键因素及临床判断指标

1.不同细胞系基因表达和表观基因组高通量数据的获得

利用课题一、二、三鉴定的多能性及稳定维持、RPE、DANPC定向分化潜能、临床有效性和安全性具有显著差异的细胞系，采用ChIP-seq等高通量技术，获取系列细胞系的microRNA谱、基因表达谱、基因组测序、DNA甲基化谱、以及组蛋白H3几个特定位点的乙酰化和甲基化修饰的全基因组图谱。

2．人多能干细胞多能性、临床安全性、以及定向分化为RPE、DANPC差异的分子机制和临床指标探讨（与课题1-3合作）

（1）利用比较基因组学和计算生物学的手段，分析和鉴定引起不同多能干细胞系多能性及稳定维持、向RPE、DANPC定向分化、以及临床有效性和安全性等方面差异的重要转录因子、microRNAs及其靶基因、信号转导分子等其它分子。

（2）与课题1-3合作，利用基因操作技术、分子生物学手段、iPS细胞形成、RPE、DANPC定向分化试验、多能干细胞功能分析和动物模型研究等，探究所发现的重要分子在相关过程中的功能，并阐明其机制和调控相关过程的网络。

（3）在阐明机制和构建网络的基础上，通过生物信息学分析、各种组学数据和开放的数据平台，以及已有的文献报道，预测上述发现的分子和细胞学差异中，哪些差异是最关键的，选择一些这样的分子、细胞学指标、特定基因位点的表观遗传特征性修饰等，作为多能干细胞临床应用判断的候选指标。

（4）与课题1-3合作，在大量不同的人ES和iPS细胞系中检测这些分子的表达和修饰状态，并结合这些细胞多能性标准检测、分化实验，以及体内移植后成瘤等方面的分析，探索建立一套适合于临床筛选多能性和临床安全性好的标准和便捷方法，以及适合于临床筛选利于RPE、DANPC分化，适合治疗视网膜眼病及帕金森病的多能干细胞的标准和便捷方法。

（5）结合现有的小鼠多能性细胞平台，探究所得候选指标的表达和修饰状态，对小鼠多能性细胞多能性标准、分化实验和体内移植后成瘤等方面的影响，以验证适于临床筛选多能性和临床安全性好的标准和便捷方法。

图5：

课题四技术路线

四、年度计划

研究内容

预期目标

第

一

年

通过细胞形态学分析、核型分析、免疫组织化学方法、PCR方法等检测不同ES和iPS细胞系的细胞核大小、核质比、克隆扁平度、边缘光滑度、细胞周期、群体倍增时间、核型、分子标记（SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81、Oct4、Nanog、Sox2、E-cadherin、Brachyury、Pax6、APF）等特征。

并确定不同ES和iPS细胞系的端粒酶基因、细胞周期相关基因、关键的hESCs标记分子基因nanog等关键基因的表达情况；oct4等基因区域DNA甲基化、特征性miRNA、和X染色体失活；稳定传代数等重要的表观遗传修饰稳定性指标；以及体内体外分化成三胚层细胞的能力分析；

搜集多种不同来源的多能干细胞系，建立快捷高效的RPE体外诱导技术；

从正常对照病人以及帕金森病人身上获得成纤维母细胞标本；

从不同组织来源的原代细胞制备非整合型的人iPS细胞；

构建人TH-reporter的慢病毒载体，用来转染NPC并通过表达组织特异性TH及GFP情况，筛选易于分化为DA神经元的细胞系；

利用课题1-3鉴定的多能性及稳定维持、RPE、DANPC定向分化潜能、临床有效性和安全性具有显著差异的细胞系，采用ChIP-seq等高通量技术，以及比较基因组学的手段，分析鉴定在不同ES/iPS细胞系多能性、RPE、DANPC定向分化、安全性差异中起关键作用的microRNAs及其靶基因。

确定不同来源人ES和iPS细胞系的各自多能性状况，为后续分化研究等提供多能性、稳定性及分化潜能不同的细胞株；

将不同来源的ES/iPS细胞系诱导分化为RPE细胞。

建立诱导效率更高、RPE产生速度更快的诱导分化方案；

完成IPSC的诱导以及鉴定工作，完善ES或iPS向神经前体细胞或多巴胺神经细胞分化的方法；

获得目标细胞的microRNA谱、mRNA表达谱、DNA甲基化图谱以及组蛋白H3几个特定位点的乙酰化和甲基化修饰的全基因组图谱；

鉴定出在不同ES/iPS细胞系多能性、RPE、DANPC定向分化、安全性差异中起关键作用的microRNAs及其靶基因。

第

二

年

对比分析不同ES和iPS细胞系的细胞生长、形态、克隆形成特性；

发育多能性标志性蛋白的免疫荧光染色和细胞流式分析及细胞周期特性等细胞水平上的差异；

对比分析不同ES和iPS细胞系在特定标志基因表达、特定基因启动子区DNA甲基化和X染色体失活等分子水平上的差异；

通过类胚胎体形成和畸胎瘤形成能力等对比分析不同ES和iPS细胞系在功能水平上的差异；

综合评价不同ES/iPS细胞系分化为RPE的潜能以及临床有效性和安全性；

将不同的品系的IPSC在体外诱导分化成为神经干细胞以及多巴胺神经元前体；

体外鉴定得到的神经干细胞及多巴胺前体细胞的质量、功能以及比例；

比较从不同品系多能干细胞得到的细胞的效率、功能和质量的差异；

全转录组深度测序和高通量转录组分析，以及通过ChIP-Seq和2DE技术描绘不同细胞系的全基因组的转录水平及表观遗传差异；

利用基因剔除实验或RNAi干扰技术分析microRNAs及其靶基因在相关过程中的作用，并进行系统研究和比较具有特征差异的不同多能干细胞的表观遗传组特征。

分析确定不同来源多能干细胞多能性及稳定维持潜能的差异，为课题后续分化研究提供多能性、稳定性及分化潜能不同的细胞株；

从分子、细胞、功能等层次评估各种不同来源ES/iPS细胞系产生RPE的速度和效率，找到合适分化为RPE的多能干细胞；

鉴定不同来源ES/iPS细胞系产生的RPE在功能、临床安全性和有效性方面的差异；

完成不同品系多能干细胞系向DA神经元的分化以及鉴定工作。

体外进行比较和鉴定不同来源的ES或iPS细胞在向上述细胞分化时的分化效率、质量和功能差异，初步选出已有的易于分化为的细胞系；

明确特定microRNAs及其靶基因在相关过程中的作用与功能，揭示出表观遗传预编程影响多能性干细胞分化潜力与细胞重编程的分子机制；

在SCI收录的国际杂志上至少发表10-14篇论文。

第

三

年

使用上述研究中获得的多能性稳定维持具有显著差异的ES与iPS细胞系，利用高通量测序技术获得其microRNA和mRNA表达谱，利用比较基因组学和计算生物学的手段寻找多能性及其稳定遗传中起核心作用的转录因子、microRNAs等分子；

通过组学手段，筛选适合分化为RPE细胞的多能干细胞特异性分子标记；

通过分子生物学手段以及表达谱系差异的研究找到关键的调控IPSC向神经干细胞和多巴胺前体分化的基因/位点；

研究各种细胞因子、小分子及中草药对人iPS细胞定向分化成神经干细胞的影响；

开展将神经干细胞及多巴胺前体细胞移植入小鼠及食蟹猴帕金森模型的体内实验；

通过生物信息学分析，充分利用各种组学数据和开放的数据平台，预测所发现的分子和细胞学差异中，哪些差异是最关键的。

分析鉴定获得在ES/iPS细胞系中多能性及其稳定遗传中起核心作用的转录因子、microRNAs等重要分子；

得到各种不同来源多能干细胞的全基因转录组图谱、表观基因组图谱和蛋白表达谱，筛选并鉴定出具有RPE分化趋向的多能干细胞特异性分子标记；

寻找表达谱差异，初步阐明不同ES/iPS系向DA神经元定向分化差异的关键分子；

确定安全性较高的iPS细胞的分子标签系统；

找到控制IPSC向神经干细胞或多巴胺前体细胞分化的关键基因；

获得一些关键的分子、细胞学指标和特定基因位点的表观遗传特征性修饰，以作为多能干细胞临床应用判断的候选指标；

在SCI收录的国际杂志上至少发表15-20篇论文。

第

四

年

利用基因组测序、以及组蛋白H3几个特定位点的乙酰化和甲基化修饰全基因组图谱，其他信息学手段分析鉴定多能性及其稳定遗传中起核心作用的转录因子、microRNAs的靶基因、关键信号通路分子等其它分子，并初步探讨其在多能性稳定维持等相关过程中的功能；

研究不同来源的多能干细胞在RPE分化潜能和移植后致瘤能力上产生差异的机制与调控网络；

继续小鼠和食蟹猴的体内移植实验，体外实验研究关键基因/因子的调控反过来对IPSC分化的质量影响；

综合前3年的研究结果，鉴定多能干细胞差异的评估和分类标准；

选择可能用于临床筛选的几个microRNAs及其靶基因，几个特定基因位点组蛋白修饰，验证这些特定位点在各相关过程中的变化，探讨它们作为临床判断ES和iPS各种特性标准的可行性。

获得关键转录因子、microRNAs的靶基因、关键信号通路分子等其它分子信息；

揭示发现的转录因子和microRNAs等分子在ES/iPS细胞多能性稳定维持等相关过程中的功能；

筛选并鉴定能够影响细胞系分化趋向性的因子；

揭示决定不同来源多能干细胞系向RPE定向分化及治疗视网膜退行性眼病有效性和安全性差异的分子机制；

完成小鼠的体内实验，找到适合移植的细胞系，阐明不同ES/iPS向DANPC定向分化差异的分子机制；

初步形成一套包含microRNAs、关键基因、关键位点表观遗传修饰和细胞学指标在内的适合于临床筛选ES及iPS细胞的标准便捷方法；

在SCI收录的国际杂志上发表16-21篇论文。

第

五

年

进一步利用基因操作技术、分子生物学手段、iPS形成、多能干细胞全能性及稳定维持等功能分析等，研究上述发现的转录因子和microRNAs在多能性稳定维持等相关过程中的具体功能及作用机制；

初步提出一套可用于筛选适合临床治疗视网膜退行性疾病的多能干细胞的方法和标准，并利用基因操作技术、RPE定向分化试验、干细胞功能分析和RPE动物模型实验反复验证；

继续食蟹猴的体内移植实验，在分化潜能（效率和质量）及转录水平进一步确定分化存在差异的原因；

结合现有的小鼠多能性细胞平台，探究所得候选指标的表达和修饰状态，对小鼠多能性细胞多能性标准检测、分化实验以及体内移植后成瘤等方面的影响

阐明不同ES/iPS细胞系间多能性及其稳定维持潜能差异的分子、表观遗传机制和信号转导网络；

探索建立筛选适合分化为RPE的ES和iPS细胞的基本标准和经济便捷方法；

确立多能干细胞定向分化存在差异的评估及分类标准；

完成从不同IPSC品系得到的神经干细胞以及多巴胺前体细胞移植后的安全性以及功能的鉴定工作，得到适合临床研究的安全的高质量的细胞品系；

利用小鼠多能性细胞平台验证适于临床筛选多能性和临床安全性好的标准和便捷方法。

在SCI收录的国际杂志上至少发表17-23篇论文，申请专利3-8项。

一、研究内容

本项目要解决的关键科学问题是：

决定不同来源的人类ES细胞或iPS细胞系在多能性、分化潜能、临床有效性和安全性差异的内在本质是什么？

是否可以根据决定这些差异的根本因素，制定可用于临床的、根据不同目的筛选ES/iPS细胞系的标准和经济便捷方法。

针对上述科学问题，本项目的主要研究内容包括以下四个方面：

1，不同（来源）人类ES和iPS细胞系间多能性及其稳定维持的差异及预编程机制；2，ES和iPS细胞向RPE分化，治疗视网膜变性眼病有效性和临床安全性间的差异及预编程机制；3，ES和iPS细胞向DANPC分化、治疗帕金森病有效性和临床安全性间的差异及预编程机制；4，决定ES和iPS细胞多能性、分化潜能及临床安全性差异的关键因素及临床判断指标。

内容1对不同（来源）人类ES及iPS细胞进行细胞、分子、功能等水平的鉴定，鉴定不同来源人类ES和iPS细胞在多能性及其稳定维持方面的差异，并与内容4合作研究其机制，同时为其它研究提供多能性优秀的ES和iPS细胞。

内容2，3利用两个成熟的动物模型，鉴定ES和iPS细胞分化潜能及临床安全性差异，与内容4合作研究其机制。

内容4则在以上研究所发现的种种差异的基础上，研究哪些差异是决定不同品系ES/iPS细胞多能性、向特定谱系细胞定向分化潜能、临床有效性和安全性差异的根本因素和细胞内造成全能性、分化潜能和安全性差异的预编程机制及网络，从而探索可用于临床的根据不同目的筛选ES/iPS细胞的标准和便捷方法。

研究内容围绕不同来源干细胞间在多能性稳定维