Takara 双酶切buffer用表.docx
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Takara双酶切buffer用表
Enzyme
AccI
BamHI
BglII
ClaI
EcoRI
EcoRV
HincII
HindIII
KpnI
NcoI
NdeI
NotI
PstI
PvuI
SacI
SalI
SmaI
SpeI
SphI
XbaI
XhoI
SuppliedBuffer
10×M
10×K
10×H
10×M
10×H
10×H
10×M
10×M
10×L
10×K
+BSA
10×H
10×H
+BSA
+Triton
10×H
10×K
+BSA
10×L
10×H
10×T
+BSA
10×M
10×H
10×M
+BSA
10×H
AccI
-
0.5×K
1×T
1×M
1×M
0.5×K
1×M
1×M
1×M
1×M
+BSA
1×T
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1.5×T
1×T
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1×M
BamHI
0.5×K
-
1×K
1×K
1×K
1×K
0.5×K
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×K
0.5×K
+BSA
1×K
1×K
0.5×K
1.5×T
0.5×T
+BSA
1×K
1×K
0.5×K
1×K
BglII
1×T
1×K
-
1×H
1×H
1×H
2×K
1×K
1×T
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1×K
0.5×K
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
2×T
1×H
ClaI
1×M
1×K
1×H
-
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
1×M
1×H
1×M
1×H
EcoRI
1×M
1×K
1×H
1×H
-
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
1×M
1×H
EcoRV
0.5×K
1×K
1×H
1×H
1×H
-
2×T
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1×K
0.5×K
1×H
0.5×K
+BSA
1×H
1×H
2×T
1×H
HincII
1×M
0.5×K
2×K
1×M
1×M
2×T
-
1×M
1×M
1×M
+BSA
1×T
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1.5×K
1×T
+BSA
1×M
2×T
1×M
1×M
HindIII
1×M
1×K
1×K
1×M
1×M
1×K
1×M
-
1×M
1×K
+BSA
1×K
0.5×K
+BSA
1×M
1×K
1×M
1.5×K
1×T
+BSA
1×M
1×K
1×M
1×M
KpnI
1×M
0.5×K
1×T
1×M
1×M
0.5×K
1×M
1×M
-
0.5×K
+BSA
1×T
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×L
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1×M
NcoI
1×M
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×M
+BSA
1×K
+BSA
0.5×K
+BSA
-
1×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×K
+BSA
1×K
+BSA
1×M
+BSA
1×K
+BSA
NdeI
1×T
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
1×T
1×K
1×T
1×K
+BSA
-
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×T
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
1×T
1×H
NotI
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
-
1×H
+BSA
2×K
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
0.5×T
+BSA
1×H
+BSA
1×H
+BSA
0.5×K
+BSA
1×H
+BSA
PstI
1×M
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
-
1×K
1×M
1×H
0.5×T
+BSA
1×H
1×H
1×M
1×H
PvuI
0.5×K
1×K
1×K
1×K
1×K
1×K
0.5×K
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×K
2×K
+BSA
1×K
-
0.5×K
1.5×K
+BSA
1×K
+BSA
1×K
1×K
0.5×K
1×K
SacI
1×M
0.5×K
0.5×K
1×M
1×M
0.5×K
1×M
1×M
1×L
0.5×K
+BSA
1×T
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
-
1.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1×M
SalI
1.5×T
1.5×T
1×H
1×H
1×H
1×H
1.5×K
1.5×K
1.5×T
+BSA
1.5×T
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1.5×K
+BSA
1.5×T
+BSA
-
1.5×T
+BSA
1×H
1×H
1.5×T
1×H
SmaI
1×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
0.5×K
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
0.5×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×K
+BSA
1×T
+BSA
1.5×T
+BSA
-
1×T
+BSA
0.5×T
+BSA
1×T
+BSA
1×T
+BSA
SpeI
1×M
1×K
1×H
1×M
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
-
1×H
1×M
1×H
SphI
0.5×K
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
2×T
1×K
0.5×K
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1×K
0.5×K
1×H
0.5×T
+BSA
1×H
-
2×T
1×H
XbaI
1×M
0.5×K
2×T
1×M
1×M
2×T
1×M
1×M
1×M
1×M
+BSA
1×T
0.5×K
+BSA
1×M
0.5×K
1×M
1.5×T
1×T
+BSA
1×M
2×T
-
1×M
XhoI
1×M
1×K
1×H
1×H
1×H
1×H
1×M
1×M
1×M
1×K
+BSA
1×H
1×H
+BSA
1×H
1×K
1×M
1×H
1×T
+BSA
1×H
1×H
1×M
-
Note:
1）Itisconfirmedthat10unitsofeachenzymecompletelydigest1µgofDNAat37°Cinonehourin50µlreactionmixture.
2）TheconcentrationofGlycerolshouldbelessthan10%tominimizestaractivity.
3）DNAmaynotbedigestedcompletely,whenrecognitionsequencesoftwoenzymesarecloseeachother,orwhenDNAtakeshigh-structureconformation.
Takaraappliesasysteminwhichenzymeactivitiesmeasuredintheoptimaluniversalbuffers（oneof5buffers:
）aredisplayed.Therelativeactivityinotheruniversalbuffersisexpressedas100%oftheoptimaluniversalbuffers.
（）indicatesbufferswhicharelikelytobeaffectedbystaractivityetc.Inordertoavoidtheseeffects,useof
or
buffersisrecommended.For15enzymes（AccIII,BalI,BcnI,BglI,Bpu1102I,Cfr10I,Eam1105I,Eco52I,NruI,PshBI,SnaBI,SspI,TaqIorVpaK11BI,basalbufferspecializedforeachenzymeissupplied）.
Thecompositionsofbasalbuffersvarydependingonenzymes.Forreferencetodoubledigestion,recomendableenzymesforeachbuffer（relativeactivityforeachreactionmixture
and
enzyme）arelisted.
Relativeactivityforeachreactionbuffer
:
supplied,activitymeasuredbuffer
:
recommendedbuffer
Restrictionenzyme
Relativeactivities（%）
L
M
H
K
T+BSA
Basal***
AatII
<20
<20
<20
<20
100
120
AccI
20
100
<20
（<20）
160
80
AccII
（260）
100
<20
20
200
160
AccIII
（<20）
（<20）
20
（80）
（<20）
100
AfaI
60
60
40
60
100
100
AflII
20
80*
<20
<20
140
120
AluI
100
100
<20
40
200
120
Aor13HI
<20
20
<20
80*
80
100
Aor51HI
80
100
<20
20
120
120
ApaI
100
<20
<20
<20
<20
120
ApaLI
100
20
<20
<20
120
120
AvaI
（<20）
100
20
40
100
120
AvaII
80
100
<20
20
100
100
BalI
20
20
<20
<20
40
100
BamHI
（<20）
<20
40
100
（<20）
80
BanII
（120）
（120）
100
80
（100）
100
BbeI
<20
<20
<20
<20
<20
100
BcnI
<20
20
40
60
60
100
BglI
<20
<20
20
40
<20
100
BglII
<20
20
100
（100）
（60）
100
BlnI
<20
20
40
100
20
120
BmeT110I
<20
<20
20
100
<20
140
BmgT120I
<20
<20
100
40
<20
240
Bpu1102I
<20
<20
<20
40
60
100
BspT104I
100
60
<20
<20
100
120
BspT107I
<20
20
80
100
20
100
Bsp1286I
100
20
<20
<20
60
100
Bsp1407I
20
60
20
20
100
100
BssHII
100
100
60
20
140
100
BstPI
（<20）
（60）
100
（100）
（100）
100
BstXI
<20
40
100
<20
<20
120
Bst1107I
（<20）
60
100
100
40
100
Cfr10I
（<20）
（<20）
（<20）
40
（20）
100
ClaI
40
100
120
100
60
100
CpoI
<20
<20
80
100
<20
100
DraI
100
100
60
100
80
80
EaeI
60
100
<20
<20
120
160
Eam1105I
（<20）
（40）
20
40
（40）
100
EcoO65I
（20）
（60）
60*
40
40
100
EcoO109I
100
60
<20
<20
100
160
EcoRI
（20）
（100）
100
（120）
（80）
120
EcoRV
（<20）
（40）
100
（120）
（40）
100
EcoT14I
（<20）
（40）
100
120
（60）
100
EcoT22I
<20
20
100
（140）
（20）
120
Eco52I
<20
<20
<20
<20
<20
100
Eco81I
<20
100
<20
<20
100
160
FbaI
（<20）
（<20）
（80）
100
（20）
100
FokI
（20）
（60）
<20
<20
（200）
100
HaeII
80
100
<20
80
140
100
HaeIII
60
100
100
60
100
100
HapII
100
60
<20
<20
100
80
HhaI
80
100
100
120
120
100
HincII
20
100
20
40
100
80
HindIII
（60）
100
<20
200
（100）
80
HinfI
80
100
100
160
60
100
Hin1I
40
80*
<20
20
60
160
HpaI
<20
（40）
20
100
（80）
100
KpnI
100
60
<20
<20
（100）
80
MboI
20
40
60
100
40
100
MboII
100
60
<20
<20
60
100
MflI
100
80
<20
<20
80
100
MluI
60
60
100
（100）
60
100
MspI
80
80
<20
100
100
80
MunI
（200）
100*
<20
<20
160
100
MvaI
（<20）
（40）
80
100
（20）
120
NaeI
100
<20
<20
<20
100
120
NcoI
（40）
（60）
20
60*
（60）
160
NdeI
<20
40
100
100
80
100
NheI
（120）
100
<20
<20
（160）
100
NotI
（<20）
（<20）
20**
<20
（<20）
100
NruI
0
<20
20
20
<20
100
NsbI
40
20
<20
60
100
100
PmaCI
100
80
<20
<20
100
100
PshAI
20
40
<20
100
60
160
PshBI
（20）
（40）
20
40
40
100
Psp1406I
20
60
<20
<20
100
100
PstI
（<20）
（60）
100
80
（20）
80
PvuI
（<20）
（20）
（40）
80*
（40）
120
PvuII
（80）
100
40
<20
（40）
100
SacI
100
60
<20
<20
80
80
SacII
40
20
<20
<20
100
40
SalI
<20
<20
100
（20）
<20
120
Sau3AI
（60）
80
100
<20
（80）
100
ScaI
（<20）
（<20）
100
（60）
（<20）
100
SfiI
（40）
100
<20
<20
100
100
SmaI
<20
<20
<20
<20
100
100
SmiI
<10
<20
100
40
<10
100
SnaBI
（20）
（40）
<20
<20
（40）
100
SpeI
（80）
100
80
100
（80）
100
SphI
（20）
（40）
100
120
（20）
100
Sse8387I
（120）
60*
<20
<20
（60）
100
SspI
（<20）
（60）
40
（100）
（80）
100
StuI
60
100
60
80
140
100
TaqI
40
80
60
60
80
100
Tth111I
（20）
80
40
100
（80）
120
Van91I
<20
（20）
60
100
（60）
100
VpaK11BI
<20
<20
60
（40）
<20
100
XbaI
<20
80*
20
<20
120
120
XhoI
<20
60
100
160
60
100
XspI
<20
60
<20
100
160
100
*+0.01%BSA→100%AflII,EcoO65I,FokI,Hin1I,MunI,NcoI,PvuI,SplI,Sse8387I,XbaI
**+0.01%BSA+0.01%TritonX-100→100%NotI
***Thecompositionofbasalbuffersvariesdependingonenzymes.
Enzymesclassifiedregardingtouniversalbuffer
L
M
H
K
T+BSA
AfaI
AccI
BanII
AfaI
AatII
AluI
AccII
BglII
Aor13HI*
AccI
Aor51HI
AfaI
BmgT1
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